一、矮牵牛的组织培养及快速繁殖的研究（论文文献综述）
李嘉敏[1]（2021）在《铅胁迫对矮牵牛生理特性的影响》文中提出近年来,由于交通排放、矿物采挖、工厂废弃物和垃圾堆等因素造成了土壤重金属污染,其中重金属铅（Lead,Pb）会对土壤、植物和人体造成伤害。在土壤中,Pb以难溶性化合物形式被植物根吸收并对植物产生一定的危害,导致植物生长发育受阻,严重时甚至死亡。因此,挑选出适合在Pb污染土壤中的生存植物显得尤为重要。矮牵牛（Petunia×hybrida）作为环境适应能力强、生物量大且经济效益高的绿化植物,尽管在观赏市场中备受研究者关注,但在对Pb污染耐受方面的研究不多,所以选用矮牵牛进行Pb耐受性研究具有重要的研究意义。本研究选取“兰州市区段矮牵牛及其所在土壤”和“陇东学院生命科学与技术学院植物组织培养实验室提供的矮牵牛”为实验材料,通过分析户外土壤中Pb的污染程度,探究矮牵牛对Pb的转移与分配能力,进一步分析不同浓度Pb(0.05、0.8、1和2 mmol·L-1)处理对室内矮牵牛幼苗生长及光合作用的影响,探讨氧化应激下酶类抗氧化剂与渗透性调节物质等抗氧化物质对矮牵牛的保护作用。主要研究结果如下:1.户外所选采样点土壤Pb污染指数为1.8;且在0.05和0.8 Pb mmol·L-1胁迫下,室内矮牵牛组培苗对Pb的转运能力不受影响。2.除了0.05 mmol·L-1 Pb处理,其他浓度Pb胁迫下抑制了矮牵牛幼苗的生长,减小了其生物量与叶面积,根冠比值和根系耐性指数也明显降低;矮牵牛在1和2 mmol·L-1Pb胁迫下,与对照相比,叶绿素和叶黄素含量显着降低。矮牵牛幼苗叶类胡萝卜素含量在2 mmol·L-1Pb胁迫下与对照相比显着降低。叶绿素a/b值在Pb处理下相比于对照无显着差异。3.在Pb胁迫下,矮牵牛幼苗叶绿素荧光参数会发生变化,其中初始荧光（F0）、非光化学猝灭（Non-photochemical quenching,NPQ）和调节性能量耗散电子产量（Quantum yield of regulatory energy dissipation,Y（NPQ））随Pb浓度增加明显升高;而最大荧光（Fm）、可变荧光（Fv）、光系统II潜在活性（Potential activity of PSII in the light,Fv/F0）、最大光化学效率（Maximal photochemical efficiency,Fv/Fm）、PSII实际光化学效率（Effective photochemical quantum yield,Y（II））、PSII有效光化学效率（Photochemical efficiency of PSⅡin the light,Fv′/Fm′）、光化学猝灭（Coefficient of photochemical quenching,q P）和光合电子传递效率（Electron transport rate,ETR）随着Pb浓度的增加明显降低。但低Pb(0.05mmol·L-1)胁迫下,这些参数较对照无显着差异。4.与对照相比,Pb胁迫会导致矮牵牛叶片气孔开度、气孔导度（Stomatal conductance,Gs）、净光合速率(（Net photosynthesis rate,A）、蒸腾速率（Transpiration rate,Tr）明显降低;而气孔密度和胞间CO2浓度（Intracellular CO2and concentration,Ci）相比于对照随Pb浓度增加明显上升;但是在低Pb(0.05mmol·L-1)胁迫下,这些参数与对照相比无显着差异。此外,矮牵牛的叶片水分利用效率（Water use efficiency,WUE）随着Pb浓度的增加无明显变化。同样,Pb胁迫会明显诱导矮牵牛幼苗叶片内ROS（Reactive oxygen species,ROS）的积累,使丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量升高,膜脂过氧化程度提升,使膜通透性增加。Pb处理下矮牵牛叶过氧化物酶（Peroxidase,POD）活性随着处理浓度增加而升高;而叶片超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（Catalase,CAT）和抗坏血酸过氧化物酶（Aseorbate peroxidase,APX）从0.8mmol·L-1Pb处理开始随着处理浓度的增加呈现递增趋势。在Pb胁迫下,矮牵牛叶中可溶性糖含量随胁迫程度的增加而增加,而脯氨酸和可溶性蛋白含量从0.8 mmol·L-1Pb胁迫下才开始随浓度的升高呈显着上升趋势。以上结果表明:自然环境下土壤Pb污染指数达到了1.8。通过对矮牵牛试管苗研究发现,在0.05和0.8 mmol·L-1Pb处理下,矮牵牛对Pb的转移能力不受影响。并进一步研究发现,0.05 mmol·L-1Pb对矮牵牛生长无明显影响,但0.8、1和2 mmol·L-1Pb胁迫会抑制矮牵牛幼苗的生长,减小其生物量,根冠比值和根系耐性指数也明显降低。在不同浓度Pb胁迫下,矮牵牛会通过调整幼苗叶气孔形态,降低其气孔开度、Gs、A、Tr和光合色素含量,起到有效抑制PSII反应中心开放水平程度的作用,从而降低Fv/F0、qP和ETR等,抑制矮牵牛幼苗生长。Pb处理也会诱导矮牵牛叶片中ROS的积累,引起MDA含量的增长,使膜脂氧化程度严重,进而通过提高SOD、POD、CAT和APX等活性和渗透性调节物含量,来稳定植物氧化应激平衡,加强矮牵牛对Pb的适应能力。
张洁,郑益平,杨成龙,林觅,林智敏[2]（2021）在《矮牵牛梅林愈伤组织诱导与植株再生》文中认为为建立矮牵牛梅林的高频再生体系,以叶器官为材料,研究不同生长调节剂配比、叶片不同部位和不同形态愈伤对不定芽再生的影响。结果表明:6-BA和NAA及其配比极显着影响矮牵牛梅林不定芽再生率,其中NAA 0.3mg·L-1极显着促进了矮牵牛梅林不定芽的再生,6-BA和NAA浓度超过1.0mg·L-1和0.5mg·L-1时,刺激玻璃化的发生。叶片不同部位极显着影响不定芽的再生,芽分化率由高到低依次是叶柄>带主叶脉>不带主叶脉,愈伤组织形态决定芽分化能力和质量,叶柄直接分化丛芽是梅林再生的优良外植体,分化率达98.3%。芽诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1,其产生不定芽无玻璃化且分化率高,为68.3%。叶片愈伤组织诱导最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg·L-1+NAA 0.3mg·L-1,其不定芽分化率为68.3%且未产生玻璃化苗;最佳生根培养基为1/2 MS培养基,生根率达100.0%;继代增殖培养最佳培养基为MS+6-BA 0.5mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1,丛生芽多且大小均匀。
陈澜[3]（2021）在《通过混池转化快速筛选目标菊花脑MYB基因的方法初探》文中指出菊花,原产中国,是一种在世界范围内广受欢迎的观赏植物。菊花植物品种繁多,在花色、瓣型、花期、抗性和株型等方面均具有丰富的变异,其中有关花色的研究是传统热点。前人的报道已验证了MYB基因家族对植物花色以及其他多种生理性状均具重要的调控功能。本研究我们针对经全基因组测序的、遗传背景相对简单的菊花二倍体野生种菊花脑（Chrysanthemum nankingense）基因组中的276个MYB基因进行高保真克隆,将成功克隆出的60个MYB基因在白花矮牵牛中进行异源、混池过表达,对产生的转基因植株进行初步的表型鉴定,以研究菊花脑MYB基因的功能;初步探索了通过混池表达实现快速筛选目标MYB基因并用于后续研究这一方法的可行性。研究结论如下:1.根据菊花脑的基因组信息,我们找到了276个MYB基因。用高保真EVO酶进行一轮扩增,由于叶片组织的特异性表达以及凝胶电泳分析比对,最终成功克隆出60个MYB基因。2.构建GFP和production of anthocyanin pigment 1（PAP1）过表达载体并侵染矮牵牛叶片,侵染后28天,OD600=0.4的愈伤组织比例为86.15%,发芽率为10.76%;OD600=0.6时愈伤组织的比例为73.1%,发芽率为3.60%,因此相对较低的菌液浓度更利于愈伤组织的分化。除此之外,叶片的含水量也会影响遗传转化效率。综合以上因素,在第28天,约70%-80%的叶片出现了愈伤组织,约10%的叶片出现了小芽,60天左右可以获得转基因矮牵牛。3.将60个MYB基因分为7组,采用混池转化的方法将7组基因异源过表达至矮牵牛。对移栽出的转基因小苗进行验证,结果显示90%以上的植株为阳性,共获得99棵过表达矮牵牛（T0植株）。将T0植株的种子进行播种,发芽率在20%-70%之间。其中G2-10、G2-12、G2-17、G6-8、#117-1、#117-2、G2-4、G2-6、G2-9、G2-18、G2-26和G7-3的阳性植株比例均达到100%（G=Group）,因此可以稳定遗传。4.转基因植株G3-1和G3-2两个株系的叶片明显变大,叶片的形状呈现出心形而不是普通的椭圆形,花朵直径增加,通过PCR分析发现两个株系均只转入MYB158基因。除此之外,在茎粗和叶片厚度也有明显加大的表型。通过流式细胞仪测定发现这两个株系变为4倍体,细胞面积也增大。5.在菊花脑中,MYB158的表达具有明显的组织特异性,根中基本没有表达,茎和叶中有表达且叶中的表达量最高。在花器官中,花蕾、管状花、舌状花都基本没有表达量。6.将菊花脑MYB158异源过表达至矮牵牛获得两个过表达株系158-1和158-2,在表型上和野生型无明显差异,经流式细胞仪测定,倍性无改变,仍为2倍体。后将菊花脑MYB158异源过表达拟南芥,共获得32棵阳性植株,叶片面积较野生型拟南芥略有变大,通过细胞水平测定,倍性无改变,为2倍体,但核内周期有一定的变化。7.菊花脑MYB158基因在野生型矮牵牛中的含量为0,在过表达植株158-1和158-2中的含量略有上升,在混池转化的G3-1和G3-2中含量呈明显上升,表明植物倍性的增加会导致基因表达量的上升。
徐小晶[4]（2021）在《miR319靶TCPs基因突变和超表达对矮牵牛植株再生的影响及再生相关基因表达分析》文中研究表明矮牵牛（Petunia hybrida）,茄科碧冬茄属,花色丰富,株型多样,再生能力强,作为模式植物应用广泛。miR319是第一个利用正向遗传突变筛选方法发现的植物miRNA,在植物生长发育中发挥重要作用。miR319主要靶向作用于TCP转录因子基因家族ClassⅡ亚家族的CIN类基因,通过抑制它们的功能发挥作用。植物离体培养是观赏植物规模化繁殖的重要手段也是植物遗传转化、基因工程改良和分子生物学研究的基础。我们在利用叶盘法进行矮牵牛遗传转化时发现,使用35S:MIR319载体比用其它载体进行转化再生转基因植株更容易,因此,我们推测miR319可能通过抑制其靶TCPs基因的表达,调控矮牵牛叶片外植体再生能力。本论文对miR319超量表达植株、miR319靶TCPs基因单突变体和三突变体植株以及PhTCP6基因超量表达植株在不同培养基条件下的再生差异,以及细胞分裂素处理条件下相关基因的表达量进行分析,得到研究结果如下:1.miR319超量表达、miR319靶TCPs基因单基因突变和三基因突变促进不定芽再生对4个miR319靶TCPs基因PhTCP5、PhTCP6、PhTCP9、PhTCP10单基因突变体进行再生,除tcp10外,其余3个突变体再生不定芽能力增强。tcp5tcp6tcp10植株再生不定芽能力也得到提高,并且与单基因突变体相比,其再生能力更强。2.PhTCP6基因超量表达抑制不定芽再生利用地塞米松诱导糖皮质激素受体融合系统构建PhTCP6基因植物表达载体,农杆菌转化得到转基因植株,鉴定正确后观测其再生能力。结果表明,在培养基中添加地塞米松的条件下,PhTCP6-GR转基因植株表现出对不定芽的抑制作用,抑制率达到100%。3.再生过程中适宜内参基因的筛选为了在组培条件下更好地检测基因的表达,根据转录组测序结果选择稳定性较高的8个基因作为备选内参基因。通过q RT-PCR获得这些基因在不同的非生物胁迫处理条件和不同激素处理条件下的表达量,利用内参基因分析软件进行结果分析,得到再生过程中最适宜的内参基因为ACTIN基因。4.细胞分裂素处理条件下再生相关基因表达分析野生型矮牵牛MD在MS+0.5μmol/L 6-BA条件下处理0、1、3、6、10和15 d,观测4个miR319靶TCP基因表达量变化。PhTCP5和PhTCP10表达量变化趋势为先增加后减少,PhTCP6基因表达量缓慢下降,在处理3d时出现显着下降,之后其表达量缓慢上升,PhTCP9基因表达量无显着变化。在这个过程中,PhTCP10表达量始终保持最低;6-BA处理后,PhTCP5表达量为最高;其余2个基因表达量中等。将MD和tcp5tcp6tcp10在MS+0.5μmol/L 6-BA条件下处理0、1、3、6和10d,观测3个再生相关基因以及9个A类RR类受体蛋白基因的表达量变化。3个再生相关基因表达量均显着上升。NAM和STM在处理10d时表达量开始显着增加,并且在tcp5tcp6tcp10植株中的表达量高于MD中表达量;WUS在处理3d时表达量开始显着增加,之后表达量持续上升,在tcp5tcp6tcp10植株中的表达量显着低于MD中表达量。9个A类RR类基因在6-BA处理后表达量均升高;在MD和tcp5tcp6tcp10中,表达量差异显着的基因有包括Ph RR1、Ph RR2、Ph RR3在内的5个基因,说明TCPs基因突变可能是通过对细胞分裂素信号传导途径产生影响,进而促进不定芽再生。
范丽娟[5]（2020）在《黄耆苯丙氨酸解氨酶基因（AmPAL）参与植物抗逆性的功能解析》文中研究说明在干旱、盐碱地区园林绿化植物仍比较缺乏,抗逆植物基因工程育种是丰富多逆境环境条件下绿化植物的有效快捷途径之一,其中抗多种非生物胁迫的功能基因的筛选尤为重要。黄耆（Astragalus membranaceus）是抗逆性较强的观赏和药用植物资源,在寒冷、干旱和盐碱地区具有广泛的开发应用前景,也是非常好的抗逆基因资源植物。苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase,PAL）在绿色植物中广泛存在,作为苯丙烷次生代谢和初级代谢的桥梁,通常对植物的生理代谢和逆境胁迫应答有重要作用。本研究对克隆到的黄耆AmPAL基因进行了多逆境条件下的表达特性分析、亚细胞定位及转AmPAL烟草后代表达稳定性检验、对烟草形态发育的影响;并进行了多种非生物胁迫下的抗逆功能解析;通过对同源性较高的烟草NtPAL1蛋白互作网络构建进一步探讨了转AmPAL烟草的抗逆机理;同时开展了AmPAL基因在观赏花卉百合和矮牵牛中的异源转化,以期提高花卉的抗逆性。本研究成果可为今后开展花卉抗逆基因工程育种提供基因资源,也为黄耆抗逆机理深入研究及开发利用奠定了理论研究基础。主要研究结果如下:1.通过RT-PCR技术获得黄耆的PAL基因（AmPAL,EF567076）的全长cDNA序列,该基因具有 Lyasearomatic 结构域,属于 phenylalanine ammol/Lonia-lyase 家族。NJ 法系统进化树分析发现黄耆的PAL与同科的大豆（Glycine max）、豌豆（Pisum sativum）和苜蓿（Medicago sati）聚到一起,相似度分别为89.18%、87.59%和57.36%。2.黄耆AmPAL是响应盐、碱、干旱胁迫的功能基因并响应ABA信号诱导,主要在根中响应胁迫并高表达。在根和叶中AmPAL显着地受盐（NaCl）、碱（NaHCO3）、PEG6000和ABA胁迫诱导表达而显着增加。尤其在根中,NaCl胁迫对AmPAL基因的诱导表达6h后增加了 9.5931倍;NaHCO3胁迫48h后根AmPAL基因表达量增加了24.5243倍。在叶中PEG6000胁迫对AmPAL基因的诱导表达显着,48h胁迫表达持续增加,根中是先增加后减少的表达水平变化,且都高于对照;ABA信号诱导24h时在叶中表达出现高峰,根中的诱导表达量也是增加的趋势。3.构建表达载体pBI121-AmPAL-GFP,应用基因枪法将其转入洋葱表皮细胞中,检测AmPAL-GFP融合蛋白的绿色荧光,表明AmPAL亚细胞定位于细胞膜上。4.构建植物表达载体pCXSN-AmPAL,并遗传转化烟草,经Southern杂交、Northern杂交检测到35S驱动AmPAL在T3代烟草中以单拷贝形式超表达。5.AmPAL基因在逆境胁迫下产生了生理上的系列抗性响应,通过减轻逆境胁迫下膜脂氧化损伤及提高光合效率增强植物抗性,来增强植物抗性,表现出抗性生长。对转AmPAL基因烟草T3代株系抗逆胁迫相关性研究表明:转AmPAL基因烟草2叶龄幼苗在NaCl胁迫下叶片和根生长都受到抑制,但根长生长量、鲜重、PAL酶活性优于野生型（WT）;转基因株系Na+/K+显着高于WT的,提高了 K+的利用率,表现出胁迫下的生长优势。在引起栽培基质pH值变化的NaHCO3胁迫下,转AmPAL基因烟草根比WT的有较好的生长势,而MDA较低;转基因烟草5叶龄幼苗在盐碱、干旱处理下,随着处理浓度增加烟草植株生长均受到抑制,但是过表达AmPAL烟草表现出生长优势。同一浓度处理下,检测到过表达AmPAL烟草幼苗的SOD活性、脯氨酸含量、叶绿素含量及叶绿素荧光参数优于WT。6.AmPAL可能通过某种途径参与了植物的生长发育。通过对过表达AmPAL T3代烟草的生长发育进行观测发现植株变矮、节间距缩短、地径变大、叶片变宽、叶长/叶宽的比例变小等特点,始花期推迟52天,花朵数量有所增加,连续花期延长4天。7.通过NCBI BLAST比对发现AmPAL与烟草NtPAL1同源性最高。NtPAL1基因启动子序列含有大量逆境相关的响应元件及光响应元件,在逆境条件下,这些逆境响应元件会启动NtPAL1基因的表达;NtPAL1蛋白互作网络分析发现10个互作蛋白,其中XP009622435.1、XP009612485.1、XP009631403.1、XP009631897.1、XP009609722.1和XP009607087.1 参与苯丙氨酸代谢途径,XP009612485.1 和XP009631403.1 参与甜菜碱的生物合成,XP009622435.1、XP009631897.1、XP009612485.1和XP009631403.1是维生素B6的基本类型和表现形式,这些产物都与植物抗逆性有关,而转AmPAL基因烟草PAL过表达,进一步促进了这些物质的合成,进而提高了植物的抗逆性。进一步说明AmPAL是提高植物抗逆功能的关键基因。8.构建的pCXSN-AmPAL植物表达载体,通过农杆菌介导法将AmPAL基因分别转入观赏花卉矮牵牛和细叶百合内,通过抗性筛选和抗性植株PCR检测,证明目的基因已成功插入到了矮牵牛和细叶百合的基因组。荧光定量PCR检测到目的基因AmPAL在转基因细叶百合中的过表达。综上,AmPAL基因具有抗逆功能;在逆境胁迫下,AmPAL基因抗逆性与膜脂抗氧化性存在互作关系;AmPAL基因对烟草营养生长和生殖生长都产生了影响。
何佳越[6]（2020）在《适宜转蓝色色素合成相关基因的仙客来受体品种筛选及其再生体系建立》文中研究指明仙客来（Cyclamen persicum）是重要的冬季观花植物和年宵花卉;稀有的蓝色花是仙客来的一个重要育种目标。蓝色花仙客来的培育可以丰富现有仙客来品种、满足市场需求。受体材料的生理环境和离体再生都是蓝色花卉转基因育种成功的重要因素。因此,本研究围绕蓝色花仙客来的基因工程育种完成了受体品种选择和离体再生体系构建的前期基础工作,对推进蓝色花仙客来的分子育种进程具有重要意义。本研究以12个不同类型的仙客来品种为试验材料,采用二氢杨梅素饲喂花瓣、紫外-可见光分光光度计和pH计等对其二氢黄酮醇4-还原酶利用二氢杨梅素生成飞燕草素苷的能力、总黄酮含量和液泡pH值进行检测,并综合这些指标利用关联分析方法计算关联序,筛选出了适宜进行转蓝色色素合成相关基因的仙客来受体品种。植物离体再生体系的建立是基因工程育种的基础,本研究又以筛选出的适宜转蓝色色素合成相关基因的仙客来品种和野生种波斯仙客来为试验材料,探究了特定品种的仙客来离体再生技术,获得了最佳的外植体灭菌方法和愈伤组织诱导、分化及生根培养基配方。主要试验结果如下:1.筛选出1个最适宜转蓝色色素合成相关基因F3’5’H的仙客来受体品种:在12个不同类型的仙客来品种中,8个品种能在饲喂二氢杨梅素后检测到飞燕草素苷的生成。利用二氢杨梅素生成飞燕草素苷的量最多的品种是‘条纹荷花’为39.01μg/g FW,最低的品种是‘蕾丝贝贝C’为4.49μg/g FW;花瓣液泡pH值最高的品种也是‘条纹荷花’为6.82,最低的品种是‘浅黄’为5.79;总黄酮含量最多的品种是‘八重玫瑰’为2507.64μg/g FW,含量最低的品种是‘蕾丝贝贝C’为343.65μg/g FW。由二氢黄酮醇4-还原酶特异性催化能力、总黄酮含量和液泡pH这3个指标的最高值构成关联分析所需的参考品种参数,计算出加权关联度最高的品种是‘八重玫瑰’,其关联度为0.8408。该结果表明‘八重玫瑰’是最适宜转蓝色色素合成相关基因的仙客来受体品种,可以为蓝色花仙客来的转基因育种提供材料参考。2.建立了2种仙客来的离体再生体系:以本研究筛选出的适宜转蓝色色素合成相关基因受体品种‘八重玫瑰’和野生种波斯仙客来的叶片为外植体,进行了不同基因型仙客来的离体再生体系的构建探索。获得了适宜的灭菌方法,即流水冲洗30 min+2%NaClO 4 min+0.1%HgCl2 4 min+75%酒精10 s。‘八重玫瑰’的污染率和褐化率分别为9.33%和5.93%;波斯仙客来的污染率和褐化率分别为9.33%和20.62%。‘八重玫瑰’愈伤组织诱导培养基最佳为MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.1mg/L+KT 0.5 mg/L,诱导率为91.11%;波斯仙客来愈伤组织诱导培养基最佳为MS+6-BA 1 mg/L+2,4-D 1 mg/L+KT 0.5 mg/L,愈伤组织质量好易分化,诱导率为57.78%。‘八重玫瑰’的愈伤组织分化培养基最佳为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.5 mg/L,分化率为88.89%;波斯仙客来的愈伤组织还需经液体培养基预培养12 h,其分化率为84.44%。‘八重玫瑰’和波斯仙客来最佳的生根培养基为1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1 mg/L+活性炭3 g/L,其生根率分别为93.33%和88.89%,根系健壮,经选苗、炼苗后,移植成活率100%。综上,栽培种‘八重玫瑰’较野生种波斯仙客来的组织培养效果更好,表明仙客来组培效果与基因型有关。‘八重玫瑰’离体再生体系的成功构建,有利于提高其繁殖效率,促进生产应用,加快其蓝色花品种的基因工程育种进程。
童雨嘉[7]（2019）在《满天星快速繁殖与农杆菌转化体系的建立》文中研究指明满天星,学名圆锥丝石竹（Gypsophila paniculata L.）,多年生草本园艺植物。可栽培供观赏,是常用的鲜切花三大配花中单价最高的一种,市场需求量大,在各类鲜切花的成交量中位居第四。栽培种包括单瓣花和重瓣花两类。重瓣满天星花不育,生产上采用扦插繁殖。这种方法繁殖系数低,不能周年供苗,无法满足市场需求。满天星是一种很难转化的花卉植物,遗传转化研究很少。为此,本论文研究了满天星的种植技术和管理规范,建立了较完善的快速繁殖和遗传转化体系。主要结果如下:（1）以2个单瓣花满天星品种的种子为材料,建立了从播种至开花过程的种植技术和管理规范;以重瓣花满天星伊洛斯品种植株为材料,进行了花器官观察和枝条扦插生根实验,发现该品种在1.0 mg/L IAA条件下扦插生根长出的根系较弱,存活率低。（2）以2个重瓣花品种的茎段、叶片、花序为外植体,进行了愈伤组织诱导。结果表明,0.1%HgCl2处理8 min消毒效果最好。0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA的激素组合对愈伤组织诱导有一定效果。茎段诱导的愈伤组织有半数以上出现了玻璃化现象,叶片诱导的愈伤组织难以分化成芽,这两种外植体都不适合用于快速繁殖;未开放花序的诱导效果较好,适合用于大规模的快速繁殖。（3）以4个重瓣花品种的1 cm茎段为材料,建立了丛生芽的快速繁殖体系。首先,利用茎切段诱导丛生芽产生与增殖,1.0 mg/L 6-BA对丛生芽的诱导效果最好,繁殖系数可达916倍。随后用IBA和NAA诱导试管苗生根,发现生长素浓度对生根的诱导效果不明显。移栽前开盖通气培养34 d,存活率90%以上。（4）以pTCK303（潮霉素抗性）或pCAM3301（草胺膦抗性）质粒位载体,重瓣花瑞亚品种试管苗的上中部茎段为外植体,构建了农杆菌EHA105介导的满天星遗传转化体系。结果表明,优化了外植体大小、培养条件（预培养或恢复培养）、侵染条件（真空压强和抽真空时间）、共培养时间等因素,建立了满天星的农杆菌转基因体系,获得了草胺膦抗性的4株阳性转基因幼苗,阳性转化效率3.3%。转基因体系如下:外植体5 mm长,在含有0.5 mg/L 6-BA培养基中预培养2 d。200μM AS的MS液体培养基重悬农杆菌,侵染20 min,暗培养23 d。用含有250 mg/L carb或500 mg/L cef的灭菌水清洗后进行第一次筛选（1 mg/L草胺膦）,约14 d后再生出新芽。转移至第二次筛选培养基（2 mg/L草胺膦）上,再培养约21 d。将存活的外植体转移到含有carb或cef但不含草胺膦的培养基上增殖培养。待转化苗长到34cm时,转移到生根培养基（MS+1.0 mg/L IBA）中生根培养。
王梦茹[8]（2018）在《矮牵牛愈伤组织诱导及原生质体分离培养》文中进行了进一步梳理矮牵牛（Petunia hybrida）为茄科矮牵牛属的多年生草本花卉,原产于南美阿根廷,花色丰富,可广泛用于室内外盆栽和花坛造景,是世界各国应用最多的草本花卉之一。目前矮牵牛多采用杂交育种技术,而植物原生质体融合技术可克服远缘杂交亲和性差的困难,为矮牵牛新品种的培育开辟新途径。本实验以矮牵牛“梦幻”系列（Petuniahybrida‘Dream’）白色花高代自交系品种SH-2015-1为实验材料,针对矮牵牛愈伤组织诱导、原生质体分离及纯化的技术进行研究,建立稳定的愈伤组织原生质体分离及纯化体系,为进一步的矮牵牛原生质体培养和细胞融合奠定基础,为矮牵牛新品种培育提供种质资源。1.矮牵牛愈伤组织的诱导以矮牵牛无菌苗叶片为外植体,接种到激素组合为MS+6-BA（1.0mg/L）+NAA（0.1 mg/L）的愈伤组织诱导培养基,培养温度（24±1）℃,光照14 h·d-1,光照强度3000 lux,6-7 d在中脉和叶缘切口处形成肉眼可见的黄绿色愈伤组织,培养15 d愈伤组织呈团状聚集在培养基的表面,愈伤组织诱导率为67.5%。将诱导出的愈伤组织从初代培养基中转入MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA的培养基中进行继代培养,为后续原生质体的分离及纯化研究提供植物材料。2.矮牵牛原生质体的分离及培养（1）原生质体分离体系的建立取继代培养10-15 d的愈伤组织进行原生质体的分离,适宜的酶液组合为2%纤维素酶R-10+0.5%果胶酶Y-23+0.3%离析酶R-10,酶液中添加0.5 mol/L的甘露醇作为渗透压调节剂,愈伤组织黑暗条件下静置酶解12 h,20℃温度下1100 rpm离心2 min,弃去上清液,相同温度和转速下重复洗涤2次,获得纯化的原生质体产量和活性分别达到3.4×106个/g和83%。（2）原生质体培养体系的建立本实验通过渗透压浓度、培养密度、激素组合等因素,对矮牵牛愈伤组织原生质体的培养体系进行了初步探讨。实验发现,培养3 d原生质体破裂程度达50%,培养7 d原生质体均溶解分散。有关矮牵牛愈伤组织原生质体培养体系的建立有待进一步研究。
曾云英,万强,马存琛[9]（2016）在《抑菌剂及接种条件在矮牵牛开放式快速繁殖中的效果》文中研究指明以矮牵牛为外植体,将不同种类和浓度的抑菌剂加入培养基中,确定适合矮牵牛开放式快速繁殖的最佳抑菌剂种类和浓度。结果表明,Y1和Y2均可作为矮牵牛开放式快速繁殖的抑菌剂,Y1浓度为2.5%时抑菌效果最佳且外植体生长良好。接种器具用抑菌剂浸泡消毒5 min后在空气消毒后的制剂间接种可以达到超净工作台的效果。
祁宏英,徐洪国,张志[10]（2012）在《矮牵牛组织培养及不同基质对生根的影响》文中研究说明以矮牵牛幼苗茎段为外植体,研究了不同培养基对矮牵牛丛生芽诱导及生根的影响,以及不同基质的生根效果。结果表明:矮牵牛最佳丛生芽诱导培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30%,pH 5.8,分化率为92.17%;生根培养基为1/2MS+IBA0.1mg/L,生根率达到93.23%。在各种基质中,珍珠岩+蛭石+草炭土组合生根效果最好,并且与琼脂培养基比较更适于移栽。
二、矮牵牛的组织培养及快速繁殖的研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、矮牵牛的组织培养及快速繁殖的研究（论文提纲范文）
（1）铅胁迫对矮牵牛生理特性的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 前言 |
| 1.1 铅(Pb) |
| 1.2 土壤Pb污染现状 |
| 1.3 Pb对植物的影响 |
| 1.3.1 Pb在植物体内的吸收与转运 |
| 1.3.2 Pb对植物生长发育的影响 |
| 1.3.3 Pb对植物光合作用的影响 |
| 1.3.4 植物对Pb的氧化应激 |
| 1.3.5 酶类抗氧化剂对植物的保护作用 |
| 1.3.6 非酶抗氧化剂与渗透性调节物质对植物的保护作用 |
| 1.4 矮牵牛 |
| 1.5 研究目的和意义 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料的培养与处理 |
| 2.1.1 户外采样区域概况 |
| 2.1.2 矮牵牛试管苗的培养及处理 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 户外土壤及矮牵牛叶片中Pb含量的测定 |
| 2.2.2 室内矮牵牛幼苗中Pb含量测定 |
| 2.2.3 矮牵牛幼苗的生长 |
| 2.2.4 幼苗叶面积的测定 |
| 2.2.5 光合色素含量的测定 |
| 2.2.6 叶绿素荧光参数的测定 |
| 2.2.7 气孔参数的测定 |
| 2.2.8 光合气体交换参数的测定 |
| 2.2.9 总ROS含量的测定 |
| 2.2.10 抗氧化酶活性的测定 |
| 2.2.11 渗透性调节物质与丙二醛含量测定 |
| 2.3 数据处理 |
| 第3章 结果与分析 |
| 3.1 户外采样点土壤与矮牵牛叶片Pb含量 |
| 3.2 户外采样点土壤重金属Pb污染水平评价 |
| 3.3 Pb胁迫对矮牵牛幼苗Pb含量及其转移系数与分配系数的影响 |
| 3.4 Pb胁迫对矮牵牛幼苗生长的影响 |
| 3.4.1 矮牵牛幼苗根茎长的变化 |
| 3.4.2 矮牵牛幼苗生物量及根冠比的变化 |
| 3.4.3 矮牵牛幼苗根系耐性指数与生长抑制率的变化 |
| 3.5 Pb胁迫对矮牵牛幼苗叶面积的影响 |
| 3.6 Pb胁迫对矮牵牛幼苗光合色素含量的影响 |
| 3.7 Pb胁迫对矮牵牛幼苗叶绿素荧光参数的影响 |
| 3.7.1 矮牵牛幼苗叶初始荧光、最大荧光、可变荧光和潜在活性的变化 |
| 3.7.2 矮牵牛叶PSⅡ系统光化学效率的变化 |
| 3.7.3 矮牵牛叶猝灭系数的变化 |
| 3.7.4 矮牵牛叶片PSⅡ系统光合电子传递效率的变化 |
| 3.7.5 矮牵牛叶片光保护能力的变化 |
| 3.8 Pb胁迫对矮牵牛幼苗叶片气孔形态的影响 |
| 3.9 Pb胁迫对矮牵牛幼苗光合气体交换参数及水分利用效率的影响 |
| 3.10 Pb胁迫对矮牵牛叶片ROS含量的影响 |
| 3.11 Pb胁迫对矮牵牛叶片抗氧化酶活性的影响 |
| 3.12 Pb胁迫对矮牵牛叶片渗透性调节物与丙二醛含量的影响 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 矮牵牛对Pb转移能力的分析 |
| 4.2 铅胁迫对矮牵牛幼苗生长的影响 |
| 4.3 铅胁迫对矮牵牛幼苗光合作用的影响 |
| 4.4 铅胁迫对矮牵牛幼苗叶氧化应激及其抗氧化应激的影响 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 主要结论 |
| 5.2 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 主要符号对照表 |
| 致谢 |
| 个人简历、在校期间发表的学术论文及研究成果 |
（2）矮牵牛梅林愈伤组织诱导与植株再生（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 试验方法 |
| 1.2.1 不同激素组合对叶片愈伤诱导及芽分化的影响 |
| 1.2.2 不同部位外植体对诱导丛生芽的影响 |
| 1.2.3 继代增殖培养 |
| 1.2.4 生根培养 |
| 1.3 数据统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 不同激素组合对叶片愈伤诱导及芽分化的影响 |
| 2.2 不同部位外植体对诱导丛生芽的影响 |
| 2.3 继代增殖培养 |
| 2.4 生根培养 |
| 3 讨论与结论 |
（3）通过混池转化快速筛选目标菊花脑MYB基因的方法初探（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1.引言 |
| 1.1 菊花育种的研究现状 |
| 1.2 MYB基因的研究现状 |
| 1.3 菊花MYB基因的研究进展 |
| 1.4 混池转化的研究方法 |
| 1.5 本研究的目的及意义 |
| 1.6 可行性分析 |
| 1.7 技术路线 |
| 2.实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 主要仪器设备与耗材 |
| 2.3 主要化学试剂及试剂盒 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 植物材料的处理和种植 |
| 2.4.2 菊花脑MYB基因的克隆 |
| 2.4.3 目标DNA片段与克隆载体PC414 连接 |
| 2.4.4 大肠杆菌Top10 感受态的制备 |
| 2.4.5 PCR产物转大肠杆菌感受态细胞 |
| 2.4.6 阳性克隆的培养与鉴定 |
| 2.4.7 重组质粒连PGWB402Ω载体 |
| 2.4.8 农杆菌介导的矮牵牛遗传转化 |
| 2.4.9 转基因植株的验证 |
| 2.4.10 基因结构分析 |
| 2.4.11 系统进化发育分析 |
| 2.4.12 qPCR |
| 2.4.13 细胞周期的测定 |
| 2.4.14 拟南芥的遗传转化 |
| 2.4.15 植物表皮细胞的观察 |
| 2.4.16 叶绿素含量的测定 |
| 3.结果与分析 |
| 3.1 菊花MYB家族基因的克隆 |
| 3.2 矮牵牛遗传转化体系的建立 |
| 3.3 混池转化 |
| 3.4 T0 代过表达矮牵牛的鉴定 |
| 3.5 转基因矮牵牛播种成活率及阳性植株比例 |
| 3.6 转基因矮牵牛G3-1 和G3-2 的表型变化 |
| 3.7 MYB158 序列比对 |
| 3.8 MYB158 基因结构 |
| 3.9 MYB158 基因的进化树分析 |
| 3.10 MYB158 基因在菊花脑中的组织特异性表达 |
| 3.11 MYB158 矮牵牛植株的特征 |
| 3.11.1 转基因矮牵牛158-1和158-2 的表型变化 |
| 3.11.2 转基因矮牵牛倍性的确定 |
| 3.11.3 转基因4 倍体矮牵牛的细胞变化 |
| 3.11.4 MYB158 基因在转基因矮牵牛植株中的表达量分析 |
| 3.11.5 转基因4 倍体和2 倍体矮牵牛叶绿素含量的测定 |
| 3.11.6 转基因矮牵牛2 倍体与4 倍体的比较 |
| 3.11.7 PCA分析 |
| 3.12 MYB158 过表达拟南芥 |
| 3.12.1 转基因拟南芥的鉴定及表型分析 |
| 3.12.2 转基因拟南芥叶绿素的测定 |
| 4.讨论 |
| 4.1 矮牵牛遗传转化体系的优化 |
| 4.2 MYB60 基因对植物的影响 |
| 4.3 多倍化矮牵牛的产生 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（4）miR319靶TCPs基因突变和超表达对矮牵牛植株再生的影响及再生相关基因表达分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 矮牵牛概述 |
| 1.2 miR319 基因及其功能 |
| 1.3 miR319靶TCPs基因及其功能 |
| 1.4 植物离体再生的研究 |
| 1.4.1 植物离体再生不定根研究 |
| 1.4.2 植物离体再生不定芽研究 |
| 1.5 内参基因概述 |
| 1.5.1 内参基因研究进展 |
| 1.5.2 内参基因筛选方法 |
| 第2章 引言 |
| 2.1 研究目的与意义 |
| 2.2 技术路线 |
| 第3章 miR319 及其靶TCPs基因对矮牵牛叶片外植体再生的影响 |
| 3.1 实验材料与试剂 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 菌株与载体 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.1.4 主要试剂 |
| 3.1.5 主要试剂和常用培养及配置 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 植物材料的处理与种植 |
| 3.2.2 转基因植株基因型鉴定 |
| 3.2.3 叶片外植体再生方法 |
| 3.2.4 超量表达TCP6 基因载体的构建 |
| 3.2.5 农杆菌介导的矮牵牛遗传转化 |
| 3.2.6 超量表达TCP6 基因对再生不定芽的影响 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 超表达miR319 促进矮牵牛叶片外植体再生不定芽 |
| 3.3.2 PhTCP5、PhTCP6、PhTCP9、PhTCP10 单基因突变对矮牵牛叶片外植体再生不定芽的影响 |
| 3.3.3 PhTCP5、PhTCP6、PhTCP10 三基因突变促进矮牵牛叶片外植体再生不定芽 |
| 3.3.4 超量表达PhTCP6 基因转基因植株的获得 |
| 3.3.5 超量表达PhTCP6 基因抑制矮牵牛叶片外植体再生不定芽 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第4章 再生过程中miR319 靶基因TCPs及再生相关基因的表达变化 |
| 4.1 实验材料与试剂 |
| 4.1.1 植物材料 |
| 4.1.2 主要仪器设备 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 矮牵牛叶片外植体离体培养条件下内参基因的筛选 |
| 4.2.2 矮牵牛叶片外植体再生不定芽过程中TCPs基因表达分析 |
| 4.2.3 细胞分裂素处理条件下基因表达分析 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 内参基因的筛选 |
| 4.3.2 细胞分裂素处理条件下MD中 TCPs基因表达分析 |
| 4.3.3 细胞分裂素处理条件下再生相关基因表达分析 |
| 4.3.4 细胞分裂素处理条件下A类RR类基因表达分析 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 第5章 总结 |
| 5.1 主要结果 |
| 5.2 下一步计划 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 发表论文及参加项目 |
（5）黄耆苯丙氨酸解氨酶基因（AmPAL）参与植物抗逆性的功能解析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 盐碱及干旱胁迫对植物影响的研究进展 |
| 1.1.1 盐碱及干旱胁迫对种子萌发的影响 |
| 1.1.2 盐碱和干旱胁迫对植物生长的影响 |
| 1.1.3 盐碱及干旱胁迫对植物生理生化的影响 |
| 1.2 盐碱及干旱胁迫相关功能基因的研究进展 |
| 1.2.1 盐碱胁迫相关基因 |
| 1.2.2 干旱胁迫相关基因 |
| 1.3 黄耆研究现状 |
| 1.3.1 黄耆资源的分布 |
| 1.3.2 黄耆繁殖、栽培技术研究 |
| 1.3.3 黄耆育种研究 |
| 1.3.4 黄耆的园林应用 |
| 1.3.5 其它 |
| 1.4 PAL的研究现状 |
| 1.4.1 PAL的分布与基因家族 |
| 1.4.2 PAL蛋白的特性和功能 |
| 1.4.3 PAL的调节机制 |
| 1.4.4 PAL的作用 |
| 1.5 本研究的目的和意义 |
| 2 AmPAL基因表达特性及蛋白亚细胞定位 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 主要试剂及药品 |
| 2.1.3 质粒 |
| 2.2 试验方法 |
| 2.2.1 AmPAL基因克隆 |
| 2.2.2 构建黄耆PAL系统进化树 |
| 2.2.3 AmPAL基因表达特性分析 |
| 2.2.4 AmPAL蛋白亚细胞定位研究 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 AmPAL基因克隆 |
| 2.3.2 AmPAL结构域和系统进化树 |
| 2.3.3 盐碱、ABA、PEG6000胁迫下AmPAL表达特性分析 |
| 2.3.4 AmPAL蛋白亚细胞定位 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 AmPAL基因对烟草的遗传转化 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 植物材料 |
| 3.1.2 试剂及药品 |
| 3.1.3 遗传转化的菌株和二元植物载体 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 引物设计 |
| 3.2.2 AmPAL植物表达载体的构建 |
| 3.2.3 重组pCXSN-AmPAL质粒的农杆菌转化及分子鉴定 |
| 3.2.4 农杆菌介导法转化烟草 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 AmPAL基因的植物表达载体构建 |
| 3.3.2 PCR检测转化株系 |
| 3.3.3 Southern鉴定 |
| 3.3.4 Northern转录表达水平鉴定 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 过表达AmPAL基因烟草对盐碱及干旱胁迫的抗性研究 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 过表达AmPAL基因烟草2叶龄幼苗抗盐(NaCl)性分析 |
| 4.2.2 过表达AmPAL基因烟草5叶龄幼苗抗盐碱及干旱分析 |
| 4.3 本章小结 |
| 5 异源超表达AmPAL基因烟草表型分析 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 异源超表达AmPAL基因烟草形态学变化观测 |
| 5.2.2 异源超表达AmPAL基因烟草的生长发育状况 |
| 5.3 本章小结 |
| 6 NtPAL基因启动子序列分析及其蛋白功能分析 |
| 6.1 材料 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 黄耆PAL基因与烟草PAL基因同源性比对 |
| 6.2.2 烟草PAL基因启动子顺式作用元件分析 |
| 6.2.3 Tbtools可视化作图 |
| 6.2.4 转录因子预测分析 |
| 6.2.5 蛋白互作预测网络构建及功能分析 |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 黄耆PAL基因与烟草PAL基因同源性比对 |
| 6.3.2 烟草NtPAL基因启动子区域软件预测分析 |
| 6.3.3 转录因子预测 |
| 6.3.4 NtPAL蛋白互作网络分析 |
| 6.4 本章小结 |
| 7 AmPAL基因对矮牵牛和细叶百合的遗传转化 |
| 7.1 试验材料 |
| 7.1.1 植物材料 |
| 7.1.2 菌株与试剂 |
| 7.2 试验方法 |
| 7.2.1 AmPAL植物表达载体的构建及农杆菌转化 |
| 7.2.2 工程菌的培养 |
| 7.2.3 受体材料的获得 |
| 7.2.4 pCXSN-AmPAL转化矮牵牛 |
| 7.2.5 pCXSN-AmPAL转化细叶百合 |
| 7.2.6 抗性转化植株的分子检测 |
| 7.3 结果与分析 |
| 7.3.1 转化矮牵牛的再生植株 |
| 7.3.2 转AmPAL基因细叶百合的抗性筛选 |
| 7.3.3 转AmPAL矮牵牛植株的PCR检测 |
| 7.3.4 转AmPAL细叶百合植株的PCR检测 |
| 7.3.5 qPCR检测AmPAL在转基因细叶百合中的表达量 |
| 7.4 本章小结 |
| 8 讨论 |
| 8.1 AmPAL基因表达特性及蛋白亚细胞定位 |
| 8.2 AmPAL基因对烟草的遗传转化 |
| 8.3 过表达AmPAL基因烟草对盐碱及干旱胁迫的抗性研究 |
| 8.4 异源超表达AmPAL基因烟草表型分析 |
| 8.5 NtPAL启动子、转录因子预测及互作蛋白网络预测 |
| 结论 |
| 建议 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）适宜转蓝色色素合成相关基因的仙客来受体品种筛选及其再生体系建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 仙客来的种质资源研究 |
| 1.2 仙客来的育种研究 |
| 1.2.1 仙客来杂交育种 |
| 1.2.2 仙客来诱变育种 |
| 1.2.3 仙客来转基因育种 |
| 1.3 植物蓝色花的形成机理及其育种研究 |
| 1.3.1 飞燕草色素主导蓝色花的形成 |
| 1.3.2 DFR对飞燕草色素后期合成的影响 |
| 1.3.3 辅助因素对蓝色花形成的影响 |
| 1.3.4 蓝色花的育种研究 |
| 1.4 仙客来的再生体系构建技术研究 |
| 1.4.1 仙客来再生体系研究进展 |
| 1.4.2 仙客来再生体系构建的意义 |
| 1.5 研究目的意义 |
| 第二章 适宜转蓝色色素合成相关基因的仙客来受体品种筛选 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 研究材料 |
| 2.1.2 仙客来花期相关性状调查 |
| 2.1.3 仙客来花色测定及花瓣二氢杨梅素饲喂培养 |
| 2.1.4 仙客来花瓣经二氢杨梅素饲喂培养后的飞燕草素苷提取及测定 |
| 2.1.5 仙客来花瓣总黄酮及液泡pH值测定 |
| 2.1.6 仙客来转蓝色色素合成相关基因受体品种筛选 |
| 2.1.7 数据处理及分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 仙客来花期表现 |
| 2.2.2 二氢杨梅素饲喂后的仙客来花瓣颜色变化 |
| 2.2.3 仙客来花瓣飞燕草素苷生成、总黄酮含量及液泡pH值检测 |
| 2.2.4 适宜转蓝色色素合成基因仙客来品种的综合筛选 |
| 2.3 结论与讨论 |
| 2.3.1 仙客来基因型影响飞燕草素苷的生成 |
| 2.3.2 总黄酮含量及液泡pH值与仙客来基因型有关 |
| 2.3.3 ‘八重玫瑰’最适宜作为蓝色色素合成相关基因的仙客来受体品种 |
| 第三章 仙客来的离体再生体系建立 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 研究材料 |
| 3.1.2 培养基与培养条件 |
| 3.1.3 外植体灭菌 |
| 3.1.4 愈伤组织诱导培养 |
| 3.1.5 愈伤组织分化培养 |
| 3.1.6 愈伤组织的液体培养基预培养 |
| 3.1.7 无根再生苗的生根培养 |
| 3.1.8 组培苗的炼苗移植 |
| 3.1.9 数据处理及分析 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 灭菌方式对2种仙客来外植体污染和褐化的影响 |
| 3.2.2 不同诱导培养基对2种仙客来愈伤组织发生的影响 |
| 3.2.3 不同分化培养基对2种仙客来愈伤组织分化的影响 |
| 3.2.4 液体预培养对2种仙客来愈伤组织分化的影响 |
| 3.2.5 不同生根培养基对2种仙客来无根再生苗的生根影响 |
| 3.2.6 仙客来组培苗的炼苗和移植 |
| 3.3 结论与讨论 |
| 3.3.1 仙客来外植体灭菌采用复合灭菌剂效果更优 |
| 3.3.2 仙客来的基因型对组织培养效果有影响 |
| 3.3.3 ‘八重玫瑰’离体再生体系成功建立 |
| 总结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间完成的科研成果 |
| 致谢 |
（7）满天星快速繁殖与农杆菌转化体系的建立（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 满天星研究与应用进展 |
| 1.1.1 满天星的应用与产业潜力 |
| 1.1.2 满天星的植物学特性 |
| 1.1.3 满天星的生活习性 |
| 1.1.4 满天星传统繁殖方法及其存在的问题 |
| 1.1.5 满天星组织培养研究 |
| 1.1.6 试管苗玻璃化的预防与恢复 |
| 1.2 农杆菌介导植物转基因研究进展 |
| 1.2.1 农杆菌遗传转化的原理 |
| 1.2.2 农杆菌转化的培养基添加物 |
| 1.2.3 植物材料的受伤处理 |
| 1.2.4 筛选物质的选择 |
| 1.3 基因工程在观赏植物中的应用 |
| 1.4 满天星转基因的研究进展 |
| 1.5 本研究的目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 满天星品种 |
| 2.1.2 菌株和质粒 |
| 2.1.3 试剂 |
| 2.1.4 培养基 |
| 2.1.5 主要试剂配制 |
| 2.1.6 数据分析 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 技术路线 |
| 2.2.2 满天星温室苗的种植管理 |
| 2.2.3 满天星的扦插繁殖 |
| 2.2.4 满天星的快速繁殖 |
| 2.2.5 农杆菌介导满天星遗传转化 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 满天星植物培养和观察 |
| 3.1.1 植物材料培养 |
| 3.1.2 重瓣花形态观察 |
| 3.2 扦插繁殖 |
| 3.3 快速繁殖 |
| 3.3.1 外植体消毒条件比较 |
| 3.3.2 愈伤组织和丛生芽的诱导 |
| 3.3.3 6-BA浓度对丛生芽增殖的影响 |
| 3.3.4 生长素诱导试管苗生根 |
| 3.3.5 快速繁殖体系 |
| 3.4 农杆菌介导的满天星遗传转化 |
| 3.4.1 转农杆菌阳性克隆PCR检测 |
| 3.4.2 潮霉素筛选压力的确定 |
| 3.4.3 草胺膦筛选压力的确定 |
| 3.4.4 侵染条件对芽尖再生情况的影响 |
| 3.4.5 预培养或恢复处理对芽尖再生情况的影响 |
| 3.4.6 满天星丛生芽转化再生的各阶段培养基 |
| 3.4.7 农杆菌介导的满天星转化体系 |
| 3.4.8 转基因阳性苗的PCR检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 外植体的选择与消毒 |
| 4.2 外源激素在快速繁殖中的影响 |
| 4.3 满天星转基因体系的建立 |
| 4.3.1 筛选药剂的确定 |
| 4.3.2 外植体处理与侵染条件的影响 |
| 4.4 展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（8）矮牵牛愈伤组织诱导及原生质体分离培养（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 矮牵牛概述 |
| 1.1.1 生长习性 |
| 1.1.2 繁殖方法 |
| 1.1.3 杂交育种 |
| 1.1.4 园林应用 |
| 1.2 矮牵牛组织培养研究进展 |
| 1.2.1 外植体选取 |
| 1.2.2 培养基选取 |
| 1.2.3 组织培养条件及应用 |
| 1.3 矮牵牛原生质体分离研究进展 |
| 1.3.1 原生质体的简介 |
| 1.3.2 原生质体的分离 |
| 1.3.3 原生质体的培养 |
| 1.3.4 原生质体技术的发展与应用 |
| 1.4 本研究的目的和意义 |
| 第二章 矮牵牛愈伤组织的诱导 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 材料 |
| 2.1.2 方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 穴盘播种育苗 |
| 2.2.2 种子培育无菌苗 |
| 2.2.3 愈伤组织的诱导 |
| 2.2.4 愈伤组织的显微观察 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 不同播种时期对穴盘育苗的影响 |
| 2.3.2 不同外植体对愈伤组织诱导的影响 |
| 2.3.3 不同激素组合对愈伤组织诱导的影响 |
| 2.3.4 愈伤组织的异常生长状态 |
| 2.3.5 不同继代时间的愈伤组织显微结构 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 矮牵牛原生质体的分离及培养 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 矮牵牛原生质体的分离 |
| 3.2.2 矮牵牛原生质体的培养 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 愈伤组织培养时间对原生质体分离的影响 |
| 3.3.2 酶解时间对原生质体分离的影响 |
| 3.3.3 酶液组合对原生质体分离的影响 |
| 3.3.4 渗透压浓度对原生质体分离的影响 |
| 3.3.5 酶解材料对原生质体分离的影响 |
| 3.3.6 不同处理对矮牵牛原生质体培养的影响 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 总结与展望 |
| 4.1 研究总结 |
| 4.2 展望 |
| 图版 |
| 英文缩略词表 |
| 附表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 |
（9）抑菌剂及接种条件在矮牵牛开放式快速繁殖中的效果（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 抑菌剂筛选 |
| 1.2.2 接种条件的筛选 |
| 1.2.3 统计与分析 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 抑菌剂种类及浓度对矮牵牛快速繁殖的影响 |
| 2.2 接种条件对矮牵牛外植体生长及分化的影响 |
| 3 结论与讨论 |
四、矮牵牛的组织培养及快速繁殖的研究（论文参考文献）
- [1]铅胁迫对矮牵牛生理特性的影响[D]. 李嘉敏. 西北师范大学, 2021(12)
- [2]矮牵牛梅林愈伤组织诱导与植株再生[J]. 张洁,郑益平,杨成龙,林觅,林智敏. 福建农业科技, 2021(05)
- [3]通过混池转化快速筛选目标菊花脑MYB基因的方法初探[D]. 陈澜. 山东农业大学, 2021(01)
- [4]miR319靶TCPs基因突变和超表达对矮牵牛植株再生的影响及再生相关基因表达分析[D]. 徐小晶. 西南大学, 2021(01)
- [5]黄耆苯丙氨酸解氨酶基因（AmPAL）参与植物抗逆性的功能解析[D]. 范丽娟. 东北林业大学, 2020
- [6]适宜转蓝色色素合成相关基因的仙客来受体品种筛选及其再生体系建立[D]. 何佳越. 云南大学, 2020(08)
- [7]满天星快速繁殖与农杆菌转化体系的建立[D]. 童雨嘉. 华中农业大学, 2019(02)
- [8]矮牵牛愈伤组织诱导及原生质体分离培养[D]. 王梦茹. 上海交通大学, 2018(02)
- [9]抑菌剂及接种条件在矮牵牛开放式快速繁殖中的效果[J]. 曾云英,万强,马存琛. 江苏农业科学, 2016(05)
- [10]矮牵牛组织培养及不同基质对生根的影响[J]. 祁宏英,徐洪国,张志. 北方园艺, 2012(15)