微RNA-27a介导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制

论文摘要

目的研究微RNA-27a（miR-27a）介导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的作用机制。方法将3T3-L1细胞诱导分化为脂肪细胞,采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）法建立3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗模型,检测miR-27a对3T3-L1细胞葡萄糖摄取的影响,蛋白质印迹法（Western Blot）检测miR-27a对胰岛素信号通路的影响。实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（qPCR）及双荧光素酶报告基因检测法检测miR-27a的作用靶点。结果 miR-27a介导了3T3-L1脂肪细胞的胰岛素抵抗[正常对照组,模型组,miR-27a mimics+模型组,miR-27a inhibitor+模型组四组的吸光度值分别为（2.03±0.20）,（1.28±0.27）,（1.43±0.20）,（1.97±0.18）,P<0.01],蛋白质印迹法显示miR-27a抑制了胰岛素信号通路中胰岛素受体底物1（IRS1）及Akt蛋白的磷酸化。qPCR显示miR-27a抑制了过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）的表达[对照组和mir-27a组的相对值分别为（1.00±0.08）和（0.59±0.14）,P=0.0048],双荧光素酶报告基因检测验证了PPARγ为miR-27a的作用靶点[PPARγWT+miR-NC,PPARγWT+miR-27a,PPARγMut+miR-NC,PPARγMut+miR-27a四组的相对荧光值分别为（5.37±0.80）、（3.17±0.57）、（4.94±0.63）、（4.68±0.74）,P<0.01]。结论 miR-27a通过抑制胰岛素信号通路及靶向PPARγ介导3T3-L1细胞胰岛素抵抗。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型的建立及miR-2 7 a对葡萄糖摄取的影响
•     1.2.2 蛋白质印迹法（Western Blot）检测胰岛素信号通路相关蛋白的表达变化
•     1.2.3 实时荧光定量多聚核苷酸链式反应（qPCR）检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisomeproliferator-activated receptorγ，PPARγ）的表达
•     1.2.4 双荧光素酶报告基因法检测miR-27a的靶点
•   1.3 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 miR-27a对胰岛素抵抗模型葡萄糖摄取的影响
•   2.2 miR-27a对胰岛素信号通路的影响
•   2.3 qPCR验证miR-27a对PPARγ的影响
•   2.4 双荧光素酶报告基因法验证miR-27a的靶点
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谢军,韩造木,尹琬凌

关键词: 代谢综合征,胰岛素抵抗,外泌体,抵抗素,脂细胞,脂肪细胞

来源: 安徽医药 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 内分泌腺及全身性疾病

单位: 华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院后湖院区老年科

基金: 湖北省科技厅科技计划项目(2017CFB386),武汉市卫生计生科研基金(WX17Q04)

分类号: R587.1

页码: 2378-2381

总页数: 4

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