滇龙胆草7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因的克隆与表达分析

论文摘要

克隆滇龙胆7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因GrDL7H,并进行表达分析,为龙胆苦苷生物合成途径的解析奠定基础。根据滇龙胆转录组GrDL7H序列,使用RT-PCR（逆转录PCR）和3′RACE（cDNA末端快速扩增）技术从滇龙胆幼叶中克隆该基因及其启动子,并进行序列分析和组织特异性表达分析。结果表明,GrDL7H基因（登录号:KT306971）全长2 154 bp,包含5个外显子和4个内含子,其中GrDL7H基因（登录号:KP340980）开放阅读框长1 542 bp,编码513个氨基酸;GrDL7H蛋白质相对分子质量为59.08 ku,等电点（pI值）为8.88,属于CYP450蛋白超家族成员,可能定位于叶绿体;GrDL7H蛋白质无信号肽,为亲水稳定蛋白质,主要由α-螺旋和环构成;GrDL7H蛋白质具有CYP450蛋白质保守结构域,功能为参与氧化还原反应;滇龙胆GrDL7H蛋白质与黄金鸡纳树CcDL7H蛋白质的亲缘关系最近;GrDL7H基因启动子主要包含6个光应答元件、1个赤霉素应答元件、6个参与茉莉酸甲酯应答的顺式调控元件和1个热胁迫应答元件等;组织特异性表达分析结果表明,GrDL7H基因主要在叶片中表达。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 试验材料
•   1.2 试验方法
•     1.2.1 GrDL7H基因的扩增
•     1.2.2 GrDL7H基因启动子的克隆
•     1.2.3 GrDL7H基因及启动子的生物信息学分析
•     1.2.4 GrDL7H基因的荧光实时定量分析
• 2 结果与分析
•   2.1 滇龙胆GrDL7H基因的克隆
•   2.2 GrDL7H基因的生物信息学分析
•     2.2.1 GrDL7H基因的ORF分析和多序列比对分析
•     2.2.2 GrDL7H蛋白质的理化特性分析
•     2.2.3 GrDL7H蛋白质的二级结构、三级结构分析
•     2.2.4 GrDL7H蛋白质序列的分析归类
•     2.2.5 GrDL7H蛋白质信号肽分析
•     2.2.6 GrDL7H蛋白质亚细胞定位分析
•     2.2.7 GrDL7H基因稀有密码子分析
•   2.3 GrDL7H基因启动子的克隆
•   2.4 GrDL7H基因的组织表达分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张晓东,李彩霞,王元忠

关键词: 滇龙胆,脱氧番木鳖酸羟化酶,基因克隆,表达分析

来源: 江苏农业科学 2019年17期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农作物

单位: 玉溪师范学院化学生物与环境学院,云南省农业科学院药用植物研究所

基金: 云南省科技计划(编号:2016FD113),云南省地方本科高校基础研究联合专项(编号:2017FH001-024),云南省自然科学基金重点项目(编号:2017FA049)

分类号: Q943.2;S567.239

DOI: 10.15889/j.issn.1002-1302.2019.17.018

页码: 76-81

总页数: 6

文件大小: 3622K

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