基于聚合酶螺旋反应技术快速检测铜绿假单胞菌

论文摘要

【背景】铜绿假单胞菌是一种重要的水源和食源性致病菌,可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。加强铜绿假单胞菌的快速检测,对保障食品安全具有重要的意义。【目的】建立聚合酶螺旋反应(Polymerasespiralreaction,PSR)方法快速检测铜绿假单胞菌。【方法】针对铜绿假单胞菌外毒素A调控基因——ETA基因(toxA)设计引物,通过引入加速引物、优化反应条件和筛选颜色指示剂,建立快速检测铜绿假单胞菌的PSR方法,并研究方法的特异性、敏感性和可靠性。【结果】建立的方法在等温65°C条件下,40 min内可完成PSR反应,且可通过钙黄绿素和羟基萘酚蓝直接判读结果。方法特异性强、灵敏度高,最低检出限分别为20 CFU/mL细菌和1.011 5 pg/μL基因组DNA。可视化PSR方法检测包装饮用水来源的分离菌株与传统生化方法检测结果一致。【结论】研究建立的可视化PSR方法为铜绿假单胞菌DNA快速检测提供了一种可行的有效手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌种
•     1.1.2 主要试剂和仪器
•   1.2 方法
•     1.2.1 引物设计
•     1.2.2 细菌基因组DNA提取
•     1.2.3 PSR反应体系的建立及优化
•     1.2.4 PSR反应结果的可视化研究
•     1.2.5 PSR反应特异性和灵敏度检测
•     1.2.6 PCR和PSR反应在包装饮用水中的灵敏度检测
•     1.2.7 PSR反应在实际样本检测中的应用
• 2 结果与分析
•   2.1 PSR反应体系的建立及优化
•   2.2 PSR反应结果的可视化研究
•   2.3 PSR反应特异性和灵敏度检测
•   2.4 PCR和PSR反应在包装饮用水中的灵敏度检测
•   2.5 PSR反应检测样本分离株
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱渊,戴云山,王俊虎,王萍,吕凤霞,顾秋琴

关键词: 铜绿假单胞菌,聚合酶螺旋反应,等温扩增,快速检测

来源: 微生物学通报 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 泰州市食品药品检验所,泰州市食品药品监督管理局,南京农业大学食品学院

基金: 江苏省食品药品监督管理局科研项目(技术类)(20170227),泰州市科技支撑计划(社会发展)(TS201811)~~

分类号: TS207.4

DOI: 10.13344/j.microbiol.china.180775

页码: 1246-1256

总页数: 11

文件大小: 2372K

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