抗体纯化论文_周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川

导读:本文包含了抗体纯化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:抗体,蛋白,旋毛虫,基因,纤毛,黄曲霉,分枝。

抗体纯化论文文献综述

周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川[1](2019)在《莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备》一文中研究指出目的为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构建原核表达载体pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,诱导表达得到带有麦芽糖结合蛋白(MBP)和6×His标签的融合蛋白,用纯化后的带有6×His标签的融合蛋白免疫新西兰白兔,经耳源静脉采血,分离得到抗血清,间接ELISA法测得抗血清的效价,Western印迹法和免疫荧光实验对所制备抗体的特异性进行检测。结果成功构建了原核表达质粒pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4。6×His-BBS4和MBP-BBS4融合蛋白的相对分子质量分别为4.5×104和8.5×104,经纯化后得到纯度>85%、浓度>0.5 mg/ml的目的蛋白用于免疫,测定效价为51 200,经Western印迹法对C. reinhardtii CC-125检测有较高的特异性,实现了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备。结论成功制备了莱茵衣藻BBS4的多克隆抗体,为BBS4在纤毛病中作用的深入研究奠定了基础。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2019年06期)

吴秀秀,蒋顺,于峰,曹建中,汪龙[2](2019)在《水稻中类受体蛋白激酶FERONIA-like Receptor 1的表达纯化及抗体制备》一文中研究指出类受体蛋白激酶参与调控植物的器官发育和抗逆性,是一种重要的蛋白激酶。通过对水稻中类受体蛋白激酶家族成员FERONIA-like receptor 1 (FLR1)进行蛋白质结构预测分析,发现FLR1蛋白具有跨膜结构,其N端在细胞膜外(FLR1-BW, 1~450 aa), C端在细胞膜内(FLR1-BN, 474~892 aa)。为了得到FLR1抗体用于其功能分析,将FLR1的N端和C端分别构建到原核表达载体pET-32a、pGEX-4T-1、pET-22b、pTriEx-4上,比较FLR1-BW和FLR1-BN在不同载体和不同条件下的表达效果。结果显示:FLR1-BW在pET-32a及pGEX-4T-1中能够有效表达,最优条件为16℃/16 h、0.5 mmol/L IPTG;而FLR1-BN蛋白表达后会对大肠杆菌产生细胞毒性,但在293细胞中能够表达。进一步利用纯化的FLR1-BW蛋白制备FLR1多克隆抗体,结果显示该抗体特异识别FLR1蛋白。本研究为类受体蛋白激酶的抗体制备提供了良好的思路并为研究FLR1功能奠定了基础。(本文来源于《生命科学研究》期刊2019年05期)

郭浩然,贾艳娥,吉艳红,李郁[3](2019)在《禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备》一文中研究指出自2015年以来,国内鸡(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵体肝炎、心包积液的病例呈逐年上升趋势。为制备反应原性良好的FAdV-4血清学诊断抗原,本研究根据密码子优化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列进行了体外扩增,再将其克隆入p Cold表达载体,构建原核表达载体pCold-Fiber2。pCold-Fiber2重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) PGTf2感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalac toside, IPTG)诱导表达后纯化Fiber2蛋白,用该蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制备了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验(indirected immunofluorescence assay, IFA)结果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体纯化后可与Fiber2蛋白和FAdV-4发生特异性反应,证明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。建立的FAdV-4抗体间接ELISA检测方法显示该方法检测灵敏性为96%,特异性为100%。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的多克隆抗体,建立了FAdV-4抗体间接ELISA检测方法,该方法反应特异性好、灵敏度高、操作简单、反应结果稳定可靠,适用于鸡群抗体水平的监测、评估和发现早期隐性感染,为研制FAdV-4的血清学诊断技术和防控该病提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年10期)

袁媛,陈志,罗卫星,蔡惠芬[4](2019)在《RERG基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的:为了制备抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG基因(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor)上蛋白的相关测定,填补RERG多克隆抗体的研究空白。方法:试验使用已经在实验室中克隆的RERG基因序列用于原核表达载体,构建原核表达载体pET32a-RERG;随后进行RERG蛋白的原核表达;完成RERG蛋白的纯化以及大白兔RERG多克隆抗体的制备与纯化。结果:通过Western-blot鉴定发现RERG的目的条带单一;使用ELISA检测纯化后的抗体效价,说明其效价达到合格抗体标准。结论:试验制作的RERG抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG蛋白的相关测定,填补了RERG的多克隆抗体的研究空白。(本文来源于《黑龙江医药科学》期刊2019年05期)

杨文静,李玉鹏,梁冬梅,王倩,杨升[5](2019)在《猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列(GenBank登录号:XM_003124236.4)设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,获得重组质粒pET-32a-NLRP6,经抗性筛选阳性菌、双酶切鉴定、PCR及测序分析后,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定。对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析,经变性、镍柱亲和纯化、复性后得到纯化的融合蛋白,将其免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,试验成功克隆大小约为576 bp的NLRP6基因序列,经鉴定重组质粒pET-32a-NLRP6构建正确,通过IPTG诱导获得大小约34 ku的NLRP6重组融合蛋白,Western blotting分析表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。可溶性分析结果显示,NLRP6重组融合蛋白以包涵体形式存在,约占95%。纯化的NLRP6重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,经Western blotting分析显示出特异性反应。本试验成功制备了具有免疫原性的NLRP6蛋白及其鼠源多克隆抗体,为NLRP6蛋白生物学功能及相关疾病致病机制研究提供了基础材料。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年09期)

张胜兰,刘琰,李岩松,刘晓雷,白雪[6](2019)在《旋毛虫Ts-Sp-7蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出为给旋毛虫病的诊断及疫苗研制提供备选抗原,对本实验室获得的旋毛虫Ts-Sp-7基因(GenBank登录号EU263332.1)进行PCR扩增,构建原核表达载体,进行表达纯化,Western-blot分析。制备多克隆抗体进行间接免疫荧光分析。通过PCR扩增出1 372 bp的Ts-Sp-7基因。SDS-PAGE结果显示,该蛋白大小为46 ku左右,与理论分子质量一致。Western-blot结果显示,该目的蛋白与10 000条/头感染剂量不同感染时间的猪阳性血清均呈现特异性条带。制备的多克隆抗体效价为1∶350 000。Ts-Sp-7多克隆抗体的间接免疫荧光鉴定结果显示,Ts-Sp-7蛋白在旋毛虫肌幼虫期存在于虫体表面。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年11期)

陆丽婷,石文婷,祁苏娴,张海涛,徐剑宏[7](2019)在《两步超滤法纯化抗黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的研究》一文中研究指出以提高溶液中抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体纯度为目的,采用来自小鼠腹水、经辛酸-饱和硫酸铵法提取的粗品单抗溶液为原料,通过单因次和响应面优化试验,建立了两步超滤法的纯化工艺。第一次超滤采用200 kD截留分子量的超滤膜。第二次超滤采用50 kD截留分子量的超滤膜,超滤温度25℃、超滤压力0.12 MPa、浓缩倍数6倍。取两步超滤的中间截留液,单抗纯度可达80.5%,而提取率仅下降8.7%。纯化工艺对单抗效价没有影响,基本脱除了溶液中的硫酸铵。该工艺可用于大规模制备高质量的抗AFB1单克隆抗体。(本文来源于《粮食与食品工业》期刊2019年04期)

刘芳,卢婷,蔡梦迪,吴芳草,陈相好[8](2019)在《Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备》一文中研究指出目的:获得高纯度Cas9蛋白,制备Cas9蛋白特异性抗体。方法:以Cas9基因序列为模板,设计特异性引物,PCR扩增获得Cas9基因全长序列,利用无缝拼接技术构建pET28a-Cas9重组表达载体;转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达Cas9蛋白,并利用His-Tag技术分离纯化Cas9蛋白;将纯化获得的Cas9蛋白免疫新西兰大白兔,制备Cas9蛋白多克隆抗体。结果:pET28a-Cas9重组表达载体转化的E.coli BL21(DE3)可表达Cas9蛋白,纯化的Cas9蛋白免疫家兔得到的多克隆抗体效价>1∶256 K。结论:本研究获得了高质量Cas9蛋白及多克隆抗体,为后续CRISPR-Cas9基因编辑的应用奠定了良好的基础。(本文来源于《贵州医科大学学报》期刊2019年07期)

林伟东,隋修锟,王召阳,贾红,房立春[9](2019)在《牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备》一文中研究指出为制备能够特异性识别牛分枝杆菌(M.bovis)抗酸蛋白酶(MarP)的特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用大肠杆菌表达系统表达了MarP蛋白的胞浆区,并以β-casein为底物、DTT为抑制剂检测MarP的丝氨酸蛋白酶活性。以具有活性的MarP蛋白免疫小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,并加入饲养层细胞轻轻摇匀分装于96孔培养板,置于37℃、5%CO_2培养箱内培养10 d,通过IFA和间接ELISA筛选阳性细胞株进行亚克隆,制备能分泌针对MarP MAb的杂交瘤细胞株,并通过Western blotting和ELISA检测MAb与重组表达和天然的MarP蛋白的反应性。结果显示,重组表达的MarP具有良好的丝氨酸蛋白酶活性,能够在12 h内将30μg的β-casein酶解完全,DTT能够抑制MarP的酶活性。具有活性的MarP蛋白免疫小鼠后,获得5株针对MarP的MAb,均能够特异性识别重组和牛分枝杆菌天然表达的MarP蛋白的线性表位,而不与大肠杆菌(E.coli)和耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)的蛋白反应。本研究成功制备了MarP蛋白及MAb,为进一步研究MarP的作用底物及其在牛分枝杆菌抗酸胁迫中作用机制提供了必备材料。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年06期)

王中亮,胡悦,郁建锋,陈珏,马丽晨[10](2019)在《鸡HNF4α蛋白的原核表达、纯化及特异性抗体制备》一文中研究指出肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α, HNF4α)是核受体超家族成员之一,广泛地调控葡萄糖、胆固醇及脂肪酸代谢途径中多种基因的表达。为了获得鸡(Gallus gallus) HNF4α特异性抗体,本研究首先根据大肠杆菌(Escherichia coli)的密码子偏好性,优化并合成鸡HNF4α基因,构建原核重组表达载体pET-30a(+)-HNF4α。其次,将该重组表达载体转化至E. coli BL21 (DE3)进行诱导表达,并对诱导温度和异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside, IPTG)浓度进行优化,表达产物利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl dulfate polyacrylamide gel electropheresis, SDS-PAGE)进行鉴定。最后,将HNF4α重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱纯化后免疫新西兰大白兔(Oryctolagus cuniculus),制备抗鸡HNF4α的特异性抗体。利用间接酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗体效价,并用所得抗体进一步分析HNF4α在鸡各组织的表达情况。结果表明,经密码子优化后构建的原核重组表达载体pET-30a(+)-HNF4α可在E. coli BL21 (DE3)中高效表达,在37℃、0.5 mmol/L IPTG、诱导4 h的条件下,在上清液中有较多可溶性蛋白表达。利用SDS-PAGE检测发现,通过Ni-NTA琼脂糖凝胶纯化获得了大小约为51.6 k D的融合蛋白且纯度达90%以上;ELISA检测抗体效价可达1∶512 000。利用该抗体分析鸡各组织蛋白表达谱发现,HNF4α在肝脏和肾脏中高表达,在小肠、睾丸中少量表达,而在其他组织几乎不表达。综上所述,本研究成功制备了效价高、特异性强的鸡HNF4α抗体,为进一步研究鸡HNF4α基因功能提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年05期)

抗体纯化论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

类受体蛋白激酶参与调控植物的器官发育和抗逆性,是一种重要的蛋白激酶。通过对水稻中类受体蛋白激酶家族成员FERONIA-like receptor 1 (FLR1)进行蛋白质结构预测分析,发现FLR1蛋白具有跨膜结构,其N端在细胞膜外(FLR1-BW, 1~450 aa), C端在细胞膜内(FLR1-BN, 474~892 aa)。为了得到FLR1抗体用于其功能分析,将FLR1的N端和C端分别构建到原核表达载体pET-32a、pGEX-4T-1、pET-22b、pTriEx-4上,比较FLR1-BW和FLR1-BN在不同载体和不同条件下的表达效果。结果显示:FLR1-BW在pET-32a及pGEX-4T-1中能够有效表达,最优条件为16℃/16 h、0.5 mmol/L IPTG;而FLR1-BN蛋白表达后会对大肠杆菌产生细胞毒性,但在293细胞中能够表达。进一步利用纯化的FLR1-BW蛋白制备FLR1多克隆抗体,结果显示该抗体特异识别FLR1蛋白。本研究为类受体蛋白激酶的抗体制备提供了良好的思路并为研究FLR1功能奠定了基础。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

抗体纯化论文参考文献

[1].周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川.莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备[J].国际药学研究杂志.2019

[2].吴秀秀,蒋顺,于峰,曹建中,汪龙.水稻中类受体蛋白激酶FERONIA-likeReceptor1的表达纯化及抗体制备[J].生命科学研究.2019

[3].郭浩然,贾艳娥,吉艳红,李郁.禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备[J].农业生物技术学报.2019

[4].袁媛,陈志,罗卫星,蔡惠芬.RERG基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备[J].黑龙江医药科学.2019

[5].杨文静,李玉鹏,梁冬梅,王倩,杨升.猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J].中国畜牧兽医.2019

[6].张胜兰,刘琰,李岩松,刘晓雷,白雪.旋毛虫Ts-Sp-7蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备[J].中国兽医科学.2019

[7].陆丽婷,石文婷,祁苏娴,张海涛,徐剑宏.两步超滤法纯化抗黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的研究[J].粮食与食品工业.2019

[8].刘芳,卢婷,蔡梦迪,吴芳草,陈相好.Cas9蛋白的克隆表达、分离纯化及多克隆抗体制备[J].贵州医科大学学报.2019

[9].林伟东,隋修锟,王召阳,贾红,房立春.牛分枝杆菌MarP蛋白的表达纯化及其单克隆抗体制备[J].中国畜牧兽医.2019

[10].王中亮,胡悦,郁建锋,陈珏,马丽晨.鸡HNF4α蛋白的原核表达、纯化及特异性抗体制备[J].农业生物技术学报.2019

论文知识图

的原核重组表达利用镍柱纯化单链抗体后SDS–PAGE电泳...分析表达的模拟抗体Fig4...可溶性蛋白的亲和层析纯化图谱腹水抗体的纯化及SDS-PAGE分析一5.琼脂双扩散实验侧定咒B12一I号兔抗...

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