沉默Notch-1基因影响人膀胱癌RT4细胞生物学行为的体外实验研究

论文摘要

目的:研究沉默Notch-1基因对人膀胱癌RT4细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化等生物学行为的影响。方法:设计并构建Notch-1 shRNA,选取RT4细胞作为研究对象分别进行转染。实验细胞分为Notch-1阴性对照组（shRNA NC）,Notch-1干扰组（Notch-1 shRNA）。细胞转染48 h后,MTT法检测细胞增殖水平变化;Transwell检测细胞侵袭力的改变;流式细胞术检测细胞凋亡水平情况;RT-PCR和Western blot检测凋亡相关蛋白（Bax、Bid、Bcl-2）及上皮间充质转化（EMT）因子（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin）在mRNA和蛋白水平上的改变。结果:与shRNA NC组相比,Notch-1 shRNA组细胞增殖率明显下降（t=4.629,P=0.010）,侵袭力减弱（t=8.193,P=0.001）,细胞凋亡率明显升高（t=–18.441,P<0.001）,Bad（t=–12.521,P<0.001;t=–6.983,P=0.002）、Bid（t=–9.231,P<0.001;t=–8.871,P=0.001）、E-cadherin（t=–13.457,P<0.001;t=–5.610,P=0.005）mRNA和蛋白表达量增多,Bcl2（t=10.651,P<0.001;t=6.973,P=0.002）、N-cadherin（t=6.505,P<0.001;t=10.132,P=0.001）、Vimentin（t=9.135,P<0.001;t=5.630,P=0.005）mRNA和蛋白表达量显著降低。结论:沉默Notch-1的表达能够抑制人膀胱癌RT4细胞的增殖和侵袭迁移,促进其细胞凋亡,其机制可能与诱导Bad、Bid、E-cadherin,抑制Bcl2、N-cadherin、Vimentin的表达有关。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 细胞的复苏、培养
•   1.3 质粒的构建及转染
•   1.4 MTT检测细胞增殖变化
•   1.5 Transwell法检测细胞侵袭能力变化
•   1.6 流式细胞术检查细胞凋亡的变化
•   1.7 RT-PCR检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Bcl-2、Bad、Bid mRNA表达情况
•   1.8 Western blot检
•   1.9 统计学分析
• 2 结果
•   2.1 Notch-1 shRNA载体构建
•   2.2 两组细胞Notch-1的表达变化
•   2.3 沉默Notch-1对膀胱癌RT4细胞增殖率的影响
•   2.4 沉默Notch-1对人膀胱癌RT4细胞的侵袭能力的影响
•   2.5 沉默Notch-1促进膀胱癌RT4细胞的凋亡
•   2.6 沉默Notch-1对膀胱癌RT4细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Bcl-2、Bad、Bid mRNA表达的影响
•   2.7 沉默Notch-1对膀胱癌RT4细胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Bcl-2、Bad、Bid蛋白的影响
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郑克文,潘悦,黄航,陈洪德,卢湧湧,吴可明,邓哲宪,翁志梁,余志贤,陈伟

关键词: 膀胱癌,凋亡,侵袭,上皮间质转化

来源: 中国中西医结合外科杂志 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 泌尿科学,肿瘤学

单位: 温州医科大学附属第一医院温州医科大学第一临床学院泌尿外科

基金: 温州市公益性科技计划项目（Y20160336）,浙江省自然科学基金（LQ17H050002)

分类号: R737.14

页码: 868-875

总页数: 8

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