导读:本文包含了干细胞集落培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,因子,干细胞,粒细胞,白细胞,巨噬细胞,树突。
干细胞集落培养论文文献综述
胡万盛[1]（2019）在《叁维培养高传代脂肪干细胞与内皮集落形成细胞治疗慢性放射性溃疡的实验研究》一文中研究指出背景和目的:干细胞是体内一种可以自我增殖、多向分化以及具有强大的旁分泌功能的细胞。而脂肪干细胞因其大量体内脂肪组织来源,其强大的自我增殖及旁分泌能力可应用于临床,治疗多种疾病,例如糖尿病足的难愈性创面[1]。但干细胞经过体外的培养扩增过程中,细胞会出现衰老,形态会发生改变,其增殖分化潜能会明显的降低,并且细胞更容受到外界的环境影响而死亡[2]。这无疑大大影响了细胞的治疗效果。对于提升干细胞治疗潜能的方法有很多,例如人工支架材料[3]、异种生物材料[4]等。这些方法都不可避免的引入了外来材料,或者加入可能对机体有害的化学试剂[5]。本身存在相对更高的治疗成本,更是引入了相对潜在的危险因素,可能对机体造成损害。根据研究团队成员之前的实验发现可以知道,本身存在于细胞外基质中的成分透明质酸可以用于叁维的细胞培养[6]。其具有非常安全的生物性能。通过叁维培养微球的方式可以增加干细胞的干细胞潜能,细胞的干细胞标志物明显发生上调,细胞存活率大大增加[7],其增殖分化旁分泌功能得到明显提升。同时来自于外周血中的内皮细胞集落形成细胞,其具有非常强的自我增殖潜能。其中高增值潜能的内皮细胞集落形成细胞单个细胞具有集落形成能力。其与脂肪干细胞存在相互作用。一方面可以增加其干细胞潜能。另一方面可以增加脂肪干细胞的存活[8]。本实验的目的在于通过利用透明质酸叁维培养经过反复传代后的衰老脂肪干细胞和内皮细胞集落形成细胞构建叁维空间结构,从而增加脂肪干细胞的干细胞潜能,减少其在体内过快死亡,增加对疾病的治疗效果。实验方法:1、获取经过反复传代的衰老脂肪干细胞常规用直径3.5mm多侧孔吸脂针对健康女性病人腹部脂肪进行抽脂。将获取的脂肪注入血袋中,在冰水混合物中静置直至血水与上层脂肪明显分层。放出下层血水,留置上层脂肪分装于50ml离心管至一半。加入25ml磷酸缓冲盐溶液到离心管中,充分摇匀后离心机1200g离心3分钟。弃去下层液体,保留中层的脂肪,倒除上层过多的油滴。配置0.075%胶原酶I溶液消化脂肪组织,放置在37度水浴摇床30分钟。用全培中和胶原酶I,离心后去上层油滴和未消化完的脂肪组织,取下层细胞团接种于培养皿上。反复培养至第八代(即为是衰老脂肪干细胞)。2、获取内皮细胞集落形成细胞抽取健康女性外周血20毫升,1:1混合磷酸盐溶液后加入淋巴细胞分离液。低速离心30分钟。取中间白色云雾状细胞层,即血液中的单个核细胞。接种于胶原I铺板的培养皿中直至细胞集落出现。细胞个数约为2000个时传代。3、本课题实验选取的实验动物为裸鼠,自制小型圆柱形铅柱,中间留一缝隙揪出裸鼠皮肤,透明胶带固定。麻醉裸鼠后固定在放射源下,辐照15格雷。静待一个月使裸鼠皮肤发生慢性纤维化,此时用剪出剪出一个7mm的全层皮肤创面。用叁维培养后的细胞与对照组治疗创面。对照组划分为:第八代脂肪干细胞、叁维培养第八代脂肪干细胞和内皮细胞集落形成细胞、内皮细胞集落形成细胞。4、实验结果叁维培养内皮细胞集落形成细胞和脂肪干细胞的组出现类似于血管结构的空间结构,尝试单纯用第八代的脂肪干细胞叁维培养存在大量无法形成空间结构的单个细胞,其漂浮于透明质酸中发生死亡。随着创面治疗时间的推移,所有的实验组和对照组创面都趋于愈合。然而,叁维培养内皮细胞集落形成细胞和脂肪干细胞的组治疗效果最佳,其余叁组之间无明显差异。叁维培养组能更好的组织中存活下来,并且参与组成血管结构,而单纯脂肪干细胞组在宿主体内大量被代谢掉仅少量残存在间质中,也未能参与机体组织结构组成。组织的再生情况也明显不如叁维培养组。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-04-18）
李丹丹[2]（2017）在《肺腺癌患者外周血单个核细胞集落培养的实验研究》一文中研究指出背景:肿瘤干细胞(tumor stem cells,TSC)学说提示肿瘤组织中存在极少部分肿瘤干细胞,其主要特点是自我更新、无限增殖的潜能和强致瘤性,肿瘤干细胞与肿瘤的发生、耐药、复发及转移的恶性生物学行为密切相关。肺癌是目前中国发病率最高的恶性肿瘤,其中肺腺癌占肺癌总数的30%-40%,是肺癌最常见的组织类型之一。有研究者发现肺腺癌起源于气道干细胞,气道干细胞属于气道末段细支气管肺泡导管连接处的细支气管肺泡干细胞,肺腺癌被认为是一种干细胞疾病,研究者认为靶向杀灭肺癌干细胞才可能是根治肺癌的有效治疗手段。尤其是近10余年的研究发现,肿瘤干细胞可以扮演转移灶的“种子”细胞角色,研究者认为“转移肿瘤细胞=肿瘤干细胞”。目前从血液循环中检测出肿瘤细胞已经是被认可的临床技术,并且可从中分离培养出肿瘤干细胞。虽然该技术可检测与分离出循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),但费用昂贵,这限制了其在科研和临床的应用与推广,目前尚缺乏简单便宜的分离培养方法,而且也缺乏后续干细胞扩增培养的技术。由于肺腺癌的肿瘤干细胞起源于正常组织的干细胞,两者生物学特性有许多相似之处,因此,本研究尝试采用人造血干细胞甲基纤维素半固体培养基对肺腺癌患者外周血单个核细胞进行集落培养,并尝试进行集落细胞的体外培养,为明确肿瘤干细胞特点提供前期实验基础。目的:本研究采用人造血干细胞甲基纤维素半固体培养基营造干细胞集落生长环境,对肺腺癌患者外周血单个核细胞进行集落培养及采用DMEM培养基对集落细胞进行体外培养,以求达到以下目的:(1)探索肺腺癌患者外周血非造血干细胞存在的可能性;(2)探索采用人造血干细胞甲基纤维素培养基培养出非造血干细胞集落的可能性及集落培养的情况;(3)探索采用dmem液体培养基对肺腺癌患者外周血非造血干细胞集落细胞的体外培养情况。方法:选取肺腺癌患者10例,患者病情的临床tnm分期为t2n1m1a-t4n3m1c。对各例患者均抽取外周血10ml,利用ficoll-paquetmplus分离出外周血单个核细胞,用甲基纤维素半固体培养基(含重组人干细胞因子等适合干细胞的生长因子)对其进行培养,动态观察细胞、集落的生长情况,描述集落生长形态和生长曲线,辨析出非造血干细胞克隆类型,并挑选非造血干细胞集落进行流式细胞术检测,检测指标为cd34与cd44,挑取非造血干细胞集落,机械分离后,在体外完全培养基条件下进行细胞传代培养,并观察其体外培养情况。结果:本研究共进行10例肺腺癌患者外周血单个核细胞集落培养研究,每一份培养物加入细胞量为(2.2±0.149)×105个细胞,经过2周左右培养,每一份培养物的细胞集落平均为120.70±27.893个,细胞集落生长曲线显示:在培养第5-7天细胞开始聚集成团状,第8-10天小型、初步细胞集落形成,第14-16天细胞集落形成,集落类型主要为bfu-e样、cfu-g样和cfu-gemm样集落,其中,bfu-e样与cfu-gemm样集落周边出现“铺路石”状细胞集落,呈密集片状,细胞间界限不清,挑取该细胞集落进行流式细胞术cd34与cd44双标检测,发现该细胞群体是cd34lowcd44high特点的细胞群体。进一步挑取上述不同类型集落进行体外完全培养基的培养,并连续8周观察,均未发现贴壁细胞的生成与增殖。结论:(1)在肺腺癌患者外周血单个核细胞中,非造血干细胞存在的可能性是有的;(2)采用人造血干细胞甲基纤维素培养基培养出非造血干细胞集落的可能性非常大,可能是源于“循环肿瘤细胞”;(3)很可能存在的非造血干细胞的体外培养需要进一步在培养基成分调整、实验技术提高的情况下进行。(本文来源于《广西医科大学》期刊2017-06-01）
王晓婧,梅晓冬[3]（2014）在《不同浓度粒巨细胞集落刺激因子及白介素-4对树突状细胞体外诱导培养的影响》一文中研究指出目的探讨不同浓度小鼠粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)对小鼠骨髓源性树突状细胞培养的影响,探索树突状细胞诱导培养的适宜条件。方法采用细胞裂解法分离得到Balb/c小鼠骨髓单个核样细胞,分为多组,分别加入不同浓度GM-CSF和IL-4,并设置空白对照组,共培养7 d,每天观察各组细胞形态,隔天拍照。第7天收集细胞,使用流式细胞法检测细胞表面树突状细胞标志分子CD11c的表达率。结果低浓度GM-CSF及IL-4可培养出高纯度小鼠骨髓源性树突状细胞,高浓度GM-CSF及IL-4可导致细胞死亡,GM-CSF和IL-4的合理细胞诱导浓度范围分别为5~100μg/L和2.5~50μg/L。结论合适浓度的GM-CSF及IL-4可诱导小鼠骨髓单个核样细胞向树突状细胞分化,获得大量树突状细胞。(本文来源于《中国临床保健杂志》期刊2014年02期）
许海涛[4]（2012）在《人重组粒细胞集落刺激因子对体外培养大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制的研究》一文中研究指出本文通过试验研究了粒细胞集落刺激因子（G-CSF）对视网膜神经节细胞（retinalganglion cells, RGCs）体外存活的影响，以及对损伤后RGCs的保护作用，并探讨其可能的作用机制。实验中我们首先体外培养了RGC-5细胞系，观察其形态及性状，应用MTT法、流式细胞术、Western Blot方法检测rhG-CSF干预后RGC-5活性和增殖的变化及其机制。结果表明G-CSF能够增强体外培养RGC-5的活性、促进RGC-5的增殖、诱导RGC-5中STAT3的磷酸化，并且G-CSF-R参与STAT3的活化过程。提示G-CSF可以通过G-CSFR途径诱导RGC-5中STAT3的活化来达到促进其活性和增殖的目的。为了更加明确的说明G-CSF对视神经的保护作用，本实验选用了特异性的Thy1.1单克隆抗体联合无血清的神经基质培养基（NEUROBASALTMMedium）纯化培养大鼠视网膜神经节细胞，得到细胞纯度可高达95%。随后我们应用无血清的神经基质培养基与含血清的DMEM同时培养RGCs，进行对比观察RGCs形态学变化，应用MTT法、流式细胞术检测两组细胞的存活率及凋亡率，结果显示无血清的神经基质培养基可明显提高RGCs体外存活率及存活时间，降低RGCs体外凋亡率。这提示我们Thy-1.1单克隆抗体与NEUROBASALTMMedium联合应用于RGCs的体外纯化与培养，可明显维持体外RGCs的活性并延长其在体外的存活时间。因此利用以上方法体外培养视网膜神经节细胞，在Cocl2诱导的缺氧情况下加入rhG-CSF，应用rt-PCR及Wetern Blot方法检测RGCs上GAP-43、MAP-2、RhoA、Rock、Bcl-2、Caspase3和Bax蛋白及mRNA表达量的变化，同时应用流式细胞术检测RGCs的凋亡率，结果显示G-CSF可能通过下调RhoA、Rock表达来增加GAP-43、MAP-2蛋白及mRNA的表达量，从而促进细胞突起的生长与修复，通过上调Bcl-2的表达，下调Caspase3和Bax的表达来明显减低RGCs的凋亡率。说明G-CSF通过抗凋亡途径及增加细胞生长发育相关蛋白表达量来保护损伤后的RGCs。本文的创新点如下：1证明了G-CSF可以通过G-CSFR途径诱导RGC-5中STAT3的活化来达到促进RGC-5活性和增殖的目的。2G-CSF可能通过下调RhoA、Rock表达量及增加GAP-43、MAP-2的表达量来促进RGCs突起的再生与修复。(本文来源于《吉林大学》期刊2012-06-01）
刘晋辉,何吉,陈舒,秦斐,王芳[5]（2012）在《不同培养体系对脐血造血干细胞粒细胞-巨噬细胞集落形成单位的影响》一文中研究指出目的比较H4534与GF-H4434两种甲基纤维素培养基对脐血生成粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的影响。方法从新鲜脐血标本中分离出造血干细胞,接种于H4534和GF-H4434培养基,于37℃、5%二氧化碳饱和湿度条件下培养14～16d。结果在样本中CD34+细胞百分率和有核细胞总数检测结果相似的情况下,H4534与GF-H4434培养条件下CFU-GM集落数分别为(55.71±28.24)/105与(66.28±31.99)/105,两者比较差异有统计学意义(u=4.16,P<0.05)。GF-H4434培养条件下还产生了红细胞爆裂型集落形成单位(64.89±34.95)/105和粒细胞-红细胞-巨噬细胞-单核细胞集落形成单位(2.53±2.08)/105。结论 GF-H4434甲基纤维素培养基中脐血样本CFU-GM集落形成能力更强,更适合脐血质量鉴定。(本文来源于《中华移植杂志(电子版)》期刊2012年02期）
华烨,丁海霞,肖杭,沈丽华,董海蓉[6]（2010）在《粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的大鼠海马神经元氧糖剥夺后凋亡的影响》一文中研究指出目的探讨粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对体外培养大鼠海马神经元氧糖剥夺(OGD)后凋亡的影响。方法体外培养乳鼠海马神经元并分为正常对照组、OGD组、GM-CSF1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml和100ng/ml组;制备OGD模型,并给与相应剂量的GM-CSF干预。应用流式细胞仪及Annexin V/PI双染色法检测神经元凋亡率,测定上清液乳酸脱氢酶(LDH)活性了解神经元细胞膜损伤程度,RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA表达。结果与正常对照组相比,OGD组细胞凋亡率及LDH活性明显升高(均P<0.01);与OGD组相比,除GM-CSF1ng/ml组外,GM-CSF各浓度组神经元凋亡率及LDH活性明显降低(均P<0.01),其中GM-CSF20ng/ml组对神经元凋亡影响最显着。与正常对照组比较,OGD组Bcl-2 mRNA表达明显下降,Bax mRNA表达显着升高,Bcl-2/Bax降低(均P<0.01);与OGD组比较,GM-CSF20ng/ml组Bcl-2 mRNA表达升高,Bax mRNA表达降低,Bcl-2/Bax增加(均P<0.01)。结论 GM-CSF能够有效地抑制OGD后海马神经元的凋亡,20ng/ml抗凋亡的效果最佳。其神经保护作用机制可能与其调节凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达有关。(本文来源于《临床神经病学杂志》期刊2010年03期）
包洪卫,孙继芾,王青[7]（2010）在《巨噬细胞集落刺激因子/核因子κB受体激活物配体体外诱导培养高纯度破骨细胞:最佳剂量探讨》一文中研究指出背景:巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stlimulating factor,M-CSF)/核因子κB受体激活物配体(receptor activatorof nuclear kappa B ligand,RANKL)两种细胞因子协同诱导骨髓干细胞形成破骨细胞是一种较新的,可以获取较高纯度和数量破骨细胞的诱导培养法,但尚缺乏统一的培养标准。目的:建立有效的M-CSF/RANKL诱导小鼠骨髓干细胞诱导分化破骨细胞的培养体系。方法:分离小鼠四肢骨获取骨髓干细胞。将小鼠骨髓干细胞在含有M-CSF的α-MEM培养基中培养24h,调整细胞浓度为107,108,109L-1。然后在培养基中同时加入10μg/LM-CSF和不同质量浓度(20,50,100μg/L)RANKL。行抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察干细胞向破骨细胞的转变过程及细胞形态和染色情况,并对各组染色阳性的破骨细胞进行计数,比较不同诱导条件对破骨样细胞数量的影响。结果与结论:培养3d后可见少量破骨样细胞,胞质内含许多红色抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性颗粒,细胞内可见淡染的双核;培养6d后可见大量染色阳性破骨样细胞;培养9d后出现多核巨型染色阳性破骨样细胞,细胞明显增大,细胞核可达到3个以上。在固定细胞接种浓度条件下,RANKL质量浓度为100μg/L时诱导分化形成的破骨样细胞数量较另两质量浓度增多(P<0.05);在固定RANKL质量浓度条件下,细胞浓度为108L-1时诱导分化形成的破骨样细胞数量较另两细胞接种浓度增多(P<0.05);细胞接种浓度为108L-1,RANKL质量浓度为100μg/L时诱导分化形成的破骨样细胞数量高于其他条件组合(P<0.05)。说明在M-CSF/RANKL诱导小鼠骨髓干细胞分化培养破骨细胞的体系中,RANKL最佳质量浓度为100μg/L,最佳细胞接种浓度为108L-1。(本文来源于《中国组织工程研究与临床康复》期刊2010年02期）
钱红,金作林,顾泽旭,段银钟,陈学鹏[8]（2009）在《白细胞介素-10对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1表达的影响》一文中研究指出目的:研究白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1(colonystimulatingfactor-1,CSF-1)表达的影响。方法:体外培养人牙囊细胞,取第5代细胞加入25ng/mlIL-10作用0、1、3、6、9、12h,用RT-PCR法检测CSF-1mRNA表达的变化。然后取第5代细胞,加入25ng/mlIL-10作用0、2、4、6、8h,用ELISA法检测上清液中CSF-1蛋白的含量。结果:牙囊细胞经IL-10作用后,CSF-1mRNA表达在3～12h降低,蛋白分泌在6～8h减少。结论:IL-10通过降低CSF-1的表达,间接地对单核细胞进入牙囊并在其中聚集发挥抑制作用,从而抑制破骨细胞吸收牙槽骨和牙齿萌出通道的形成。(本文来源于《实用口腔医学杂志》期刊2009年03期）
李闻颖,邓锋,王豫蓉,陈允嘉,胡辉[9]（2009）在《不同浓度粒巨噬细胞集落刺激因子在未成熟树突状细胞培养中的效果研究》一文中研究指出目的:探讨不同浓度细胞因子在培养小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞(Dendriticcells,DC)中的作用,寻找培养所需最佳细胞因子浓度。方法:分别用低、中、高剂量粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor,GM-CSF)联合或不联合白细胞介素4(Interlenkin-4,IL-4)培养小鼠骨髓源性未成熟DC,对其进行形态学观察和细胞表型检测。结果:培养第7d,低剂量组DC数量最少、突起细小,CD80、CD86及主要组织相容(Major histo compatibilitycomplex,MHCⅡ)类分子表达低,如联合IL-4培养可提高DC数量;中等剂量组与高剂量组DC较低剂量组为多,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达亦较前者提高,但二组无明显差异,有无联合IL-4培养的差异亦不显着。结论:GM-CSF低剂量时,可诱导出纯度较高的未成熟DC,而GM-CSF中等剂量和高剂量时,无论是否联合诱导IL-4培养,诱导未成熟DC的产量及纯度无明显差异。(本文来源于《重庆医科大学学报》期刊2009年04期）
刘卫[10]（2009）在《巨噬细胞集落刺激因子及其受体在糖尿病大鼠视网膜的表达及对体外培养小胶质细胞的作用研究》一文中研究指出目的:通过巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)及其受体(CSF-1R)在糖尿病大鼠视网膜表达及对体外培养小胶质细胞的作用研究,探讨糖尿病视网膜病变中微环境的变化对视网膜小胶质细胞激活的影响及小胶质细胞的激活机制及作用。方法:体内部分采用一次性腹腔注射链脲佐菌霉素(streptozotocin,STZ)方法建立成年SD(Sprague-Dawley)大鼠糖尿病动物模型。在建模后2,4,8,12周,随机取8只糖尿病大鼠视网膜,冰冻切片行免疫组织化学,激光共聚焦显微镜下观察M-CSF及其受体CSF-1R在视网膜的表达情况,免疫荧光双标染色观察视网膜小胶质细胞(CD11b/C)、星形胶质细胞(GFAP)、M(u|¨)ller细胞(Vimentin)、神经节细胞(NeuN)中的共表达情况。Real-time PCR、Western blot法测量各组大鼠视网膜M-CSF和CSf-1R的mRNA及蛋白质表达量的变化。均采用同龄大鼠5只作为对照。此外,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定22例增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)患者玻璃体样本中M-CSF的蛋白含量,22例特发性黄斑裂孔的玻璃体样本作为对照。体外部分原代视网膜小胶质细胞培养鉴定。采用糖基化人体白蛋白(GA)刺激小胶质细胞,光镜、免疫荧光染色观察作用前后小胶质细胞的形态及激活标志Ibal、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)—1β的表达变化。ELISA法测量激活的小胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β和M-CSF的蛋白含量变化情况。免疫荧光染色法、Real-time PCR、Western blot及免疫沉淀法测量GA激活的视网膜小胶质细胞CSF-1R的表达变化。ELISA法分别测量M-CSF组、M-CSF抗体组、CSF-1R抗体组、GA+M-CSF组、GA+M-CSF抗体组、GA+CSF-1R抗体组TNF-α和IL-1β蛋白含量的变化,单独GA组的小胶质细胞作为对照。结果:体内部分正常大鼠视网膜上可持续低水平表达M-CSF及受体CSF-1R。在糖尿病大鼠2周,视网膜上M-CSF及其受体CSF-1R mRNA、蛋白的表达水平均较同龄对照组明显上调(p＜0.005),并随时问推移继续增加。免疫荧光双标染色显示M-CSF的免疫活性上调主要发生在糖尿病大鼠视网膜的神经纤维层,与GFAP共表达。上调的CSF-1R免疫活性主要在OX-42标记的小胶质细胞。NeuN标记的神经节细胞持续表达CSF-1R。ELISA结果显示PDR病人玻璃体中M-CSF的蛋白含量明显高于对照组(p＜0.005)体外部分体外培养的视网膜小胶质经GA刺激后从杆状静息状态转变为胞体更大、类圆型的阿米巴样激活状态。激活后的小胶质Ibal表达明显增强,并从胞桨转移到胞膜皱褶上。GA刺激后小胶质细胞释放TNF-α和IL-1β(P＜0.05),呈剂量依赖方式,GA浓度为250μg/ml时达到释放峰值。免疫荧光、Real-time PCR及免疫沉淀显示GA激活的小胶质细胞表达CSF-1R明显上调(P＜0.05),而未经GA刺激的小胶质细胞仅表达基线水平的CSF-1R。抗体中和试验显示M-CSF抗体或CSF-1R抗体中和可明显降低GA激活的小胶质细胞释放TNF-α和IL-1β(P＜0.001)。M-CSF本身不能诱导小胶质细胞TNF-α和IL-1β的释放,但M-CSF+GA组TNF-α和IL-1β的含量明显高于单纯GA刺激组(p＜0.05)。结论:1.糖尿病早期视网膜上M-CSF/CSF-1R信号明显上调,星型胶质细胞是M-CSF上调的主要来源,小胶质细胞激活并特性高表达CSF-1R,该信号可能是糖尿病视网膜病变中神经元、胶质细胞及小胶质细胞之间重要的信号调控通路2.糖基化白蛋白体外能直接诱导视网膜小胶质细胞激活,释放TNF-α、IL-1β等致炎介质3.激活的视网膜小胶质细胞高表达CSF-1R,通过自分泌或旁分泌M-CSF,扩大了GA诱导的小胶质细胞炎症(本文来源于《复旦大学》期刊2009-04-01）
干细胞集落培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:肿瘤干细胞(tumor stem cells,TSC)学说提示肿瘤组织中存在极少部分肿瘤干细胞,其主要特点是自我更新、无限增殖的潜能和强致瘤性,肿瘤干细胞与肿瘤的发生、耐药、复发及转移的恶性生物学行为密切相关。肺癌是目前中国发病率最高的恶性肿瘤,其中肺腺癌占肺癌总数的30%-40%,是肺癌最常见的组织类型之一。有研究者发现肺腺癌起源于气道干细胞,气道干细胞属于气道末段细支气管肺泡导管连接处的细支气管肺泡干细胞,肺腺癌被认为是一种干细胞疾病,研究者认为靶向杀灭肺癌干细胞才可能是根治肺癌的有效治疗手段。尤其是近10余年的研究发现,肿瘤干细胞可以扮演转移灶的“种子”细胞角色,研究者认为“转移肿瘤细胞=肿瘤干细胞”。目前从血液循环中检测出肿瘤细胞已经是被认可的临床技术,并且可从中分离培养出肿瘤干细胞。虽然该技术可检测与分离出循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),但费用昂贵,这限制了其在科研和临床的应用与推广,目前尚缺乏简单便宜的分离培养方法,而且也缺乏后续干细胞扩增培养的技术。由于肺腺癌的肿瘤干细胞起源于正常组织的干细胞,两者生物学特性有许多相似之处,因此,本研究尝试采用人造血干细胞甲基纤维素半固体培养基对肺腺癌患者外周血单个核细胞进行集落培养,并尝试进行集落细胞的体外培养,为明确肿瘤干细胞特点提供前期实验基础。目的:本研究采用人造血干细胞甲基纤维素半固体培养基营造干细胞集落生长环境,对肺腺癌患者外周血单个核细胞进行集落培养及采用DMEM培养基对集落细胞进行体外培养,以求达到以下目的:(1)探索肺腺癌患者外周血非造血干细胞存在的可能性;(2)探索采用人造血干细胞甲基纤维素培养基培养出非造血干细胞集落的可能性及集落培养的情况;(3)探索采用dmem液体培养基对肺腺癌患者外周血非造血干细胞集落细胞的体外培养情况。方法:选取肺腺癌患者10例,患者病情的临床tnm分期为t2n1m1a-t4n3m1c。对各例患者均抽取外周血10ml,利用ficoll-paquetmplus分离出外周血单个核细胞,用甲基纤维素半固体培养基(含重组人干细胞因子等适合干细胞的生长因子)对其进行培养,动态观察细胞、集落的生长情况,描述集落生长形态和生长曲线,辨析出非造血干细胞克隆类型,并挑选非造血干细胞集落进行流式细胞术检测,检测指标为cd34与cd44,挑取非造血干细胞集落,机械分离后,在体外完全培养基条件下进行细胞传代培养,并观察其体外培养情况。结果:本研究共进行10例肺腺癌患者外周血单个核细胞集落培养研究,每一份培养物加入细胞量为(2.2±0.149)×105个细胞,经过2周左右培养,每一份培养物的细胞集落平均为120.70±27.893个,细胞集落生长曲线显示:在培养第5-7天细胞开始聚集成团状,第8-10天小型、初步细胞集落形成,第14-16天细胞集落形成,集落类型主要为bfu-e样、cfu-g样和cfu-gemm样集落,其中,bfu-e样与cfu-gemm样集落周边出现“铺路石”状细胞集落,呈密集片状,细胞间界限不清,挑取该细胞集落进行流式细胞术cd34与cd44双标检测,发现该细胞群体是cd34lowcd44high特点的细胞群体。进一步挑取上述不同类型集落进行体外完全培养基的培养,并连续8周观察,均未发现贴壁细胞的生成与增殖。结论:(1)在肺腺癌患者外周血单个核细胞中,非造血干细胞存在的可能性是有的;(2)采用人造血干细胞甲基纤维素培养基培养出非造血干细胞集落的可能性非常大,可能是源于“循环肿瘤细胞”;(3)很可能存在的非造血干细胞的体外培养需要进一步在培养基成分调整、实验技术提高的情况下进行。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
干细胞集落培养论文参考文献
[1].胡万盛.叁维培养高传代脂肪干细胞与内皮集落形成细胞治疗慢性放射性溃疡的实验研究[D].南方医科大学.2019
[2].李丹丹.肺腺癌患者外周血单个核细胞集落培养的实验研究[D].广西医科大学.2017
[3].王晓婧,梅晓冬.不同浓度粒巨细胞集落刺激因子及白介素-4对树突状细胞体外诱导培养的影响[J].中国临床保健杂志.2014
[4].许海涛.人重组粒细胞集落刺激因子对体外培养大鼠视网膜神经节细胞的保护作用及机制的研究[D].吉林大学.2012
[5].刘晋辉,何吉,陈舒,秦斐,王芳.不同培养体系对脐血造血干细胞粒细胞-巨噬细胞集落形成单位的影响[J].中华移植杂志(电子版).2012
[6].华烨,丁海霞,肖杭,沈丽华,董海蓉.粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对体外培养的大鼠海马神经元氧糖剥夺后凋亡的影响[J].临床神经病学杂志.2010
[7].包洪卫,孙继芾,王青.巨噬细胞集落刺激因子/核因子κB受体激活物配体体外诱导培养高纯度破骨细胞:最佳剂量探讨[J].中国组织工程研究与临床康复.2010
[8].钱红,金作林,顾泽旭,段银钟,陈学鹏.白细胞介素-10对体外培养人牙囊细胞集落刺激因子-1表达的影响[J].实用口腔医学杂志.2009
[9].李闻颖,邓锋,王豫蓉,陈允嘉,胡辉.不同浓度粒巨噬细胞集落刺激因子在未成熟树突状细胞培养中的效果研究[J].重庆医科大学学报.2009
[10].刘卫.巨噬细胞集落刺激因子及其受体在糖尿病大鼠视网膜的表达及对体外培养小胶质细胞的作用研究[D].复旦大学.2009
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