（长沙医学院;湖南长沙410200）
【摘要】目的：以中医理论“精血同源”为基础，观察加味当归补血汤对综合造模方法包括负重游泳劳倦、眼眶放血、控制饮食诱发的血虚小鼠各项指标的恢复程度。方法：采用综合造模法诱导小鼠血虚，加味当归补血汤对血虚小鼠连续灌胃，给药12天后收集不同组小鼠外周血中白细胞计数（WBC/109·L－1）、红细胞计数（RBC/1012·L－1）、血红蛋白（Hb/g·L－1）等指标。结果：与模型组相比，加味当归补血汤组小鼠的血红细胞和血红蛋白数量明显增加，小鼠的精神状态、行为反应、运动情况、皮毛光泽、眼睑唇鼻等方面的变化情况恢复良好。结论：加味当归补血汤组能明显改善小鼠血虚。
【关键词】加味当归补血汤；血虚
【中图分类号】R2【文献标号】A【文章编号】2095-9753（2018）10-0299-02
当归补血汤始载于金元时期李东垣《内外伤辨惑沦》，是补气生血的经典名方，自其问世后，便在临床上应用广泛。它是以黄芪、当归按5:1配伍而成，主治血虚发热证，包括肌热面赤，烦渴欲饮，脉洪大而虚，重按无力。亦治妇人经期、产后血虚发热疼痛，或疮疡溃后，久不愈合者。方中虽仅含两味药，但组方原则较严谨、临床疗效确切，方中重用黄芪，取其量大力宏，补气固表，以急固浮阳退热，且补气又助生血，使阳生阴长，气旺血生，故为君药。配以少量当归养血和营，并得黄芪生血之助，使阴血渐充，则浮阳秘敛，虚热自退。故本课题将以当归补血汤为基础方，根据中医理论，熟地黄具有补血滋阴、益精填髓的功效，现代医学研究也发现，熟地水煎剂可促进贫血动物的红细胞、血红蛋白的恢复[1]。为了观察血虚小鼠在补精血方剂下各项指标的恢复程度，我们在传统方剂当归补血汤中加入了熟地，用于该研究中补精血药的配伍成分。并且确定了临床日用量为黄芪30g、当归6g、熟地12g。通过参考《中药药理实验方法学》将其换算成小鼠等效剂量，即6.24g/kg，该方具有滋阴补血，补气养血的功效。
本研究将以“精血同源”理论为基础，观察当归补血汤加熟地对血虚证小鼠相关指标的影响，为临床治疗血虚证用药提供参考。
实验材料
1．1动物小鼠(SPF级KM小鼠)，22±2g，60只，由长沙医学院实验动物中心提供。
1.2受试药物加味当归补血汤由黄芪30g、当归6g、熟地12g组成，由长沙医学院第一附属医院提供。采用传统水煎法制备：蒸馏水预先浸泡1h，加热煎煮2次，第一次保持微沸30min，滤出药液；药渣加温水再煮沸，仍保持微沸30min，滤出药液；合并2次滤液，小火浓缩成生药含量为1g/ml[2]。
2．实验方法
2.1实验分组及模型的建立实验动物分为正常组、模型组和对照组（加味当归补血汤组）。随机选取健康状况、生理条件基本相似的健康小鼠36只，雌雄各半。分为正常组12只、模型组12只、对照组12只。
综合造模方法[3-4]包括负重游泳劳倦、眼眶放血、控制饮食，造模时间共持续2周（14d）。
负重游泳劳倦具体方法是指：每天上午10:00和16:00进行负重游泳，负重重量为体重的10％。强迫小鼠在温水池中游泳2次，每次游泳时间不限定，以小鼠整体下沉于水面6s为限，持续2周（14d）。温水池水温控制在19℃，水深控制在20cm。
眼眶放血具体方法是指：用左手固定小鼠，轻轻对颈部施加压力，使头部静脉淤血后，在突出的眼球旁找出后眼眶静脉，然后将少量10％可卡因滴入小鼠眼眶内，使眼部局部麻醉；右手持消毒的毛细吸管自内侧眼角平行鼻侧眼眶向喉头方向轻压，刺破后眼眶静脉丛，血液自然吸入管内，放血6～8滴（约0.5ml），放血后拔出毛细吸管，给予小鼠头部冷水刺激，血液自然停止。然后用棉签将小鼠眼部周围的血迹擦拭干净，防止血腥味引发小鼠间撕咬。隔日重复一次。
控制饮食具体方法是指：自造模之日起控制小鼠的进食量，按照每日75g/kg体重喂料。
2.2观察内容体重：各组连续造模两周（14d），测量造模时每天的小鼠体重，计算并比较造模变化。造模成功并给药治疗，记录每天小鼠体重。
一般情况：造模期间，观察正常组及各模型组小鼠的精神状态、行为反应、运动情况、皮毛光泽、眼睑唇鼻等方面的变化情况。对比正常小鼠神气矫健，行动敏捷，皮毛光泽而密，紧贴皮肤，眼睛明亮，色泽粉红，鼻唇清洁湿润，呈淡粉红色，尾粗圆呈粉红色，腰背平直，双上肢抬举频繁的状态。
血常规：各组小鼠均于造模的第三天（d3）、d6、d9、d12、d14，经眼球取血20μl后，将血液放入抗凝液中，混匀后用全自动血球记数仪进行检测，主要包括外周血中白细胞计数（WBC/109·L－1）、红细胞计数（RBC/1012·L－1）、血红蛋白（Hb/g·L－1）、网织红细胞四项指标，分析对比各组小鼠各项指标的数据变化，检验造模是否成功。造模成功后，各组小鼠均于给药的d3、d6、d9、d12，以如上方法检验并对比各项指标。
2.3数据处理实验数据采用SPSS19.0进行统计分析，组间多项数据比较采用单因素方差分析，数据以?x±s表示，P<0.05表示有统计学差异。
3．结果
3.1动物的一般体征
模型组小鼠在造模第3天即出现明显的血虚表现，小鼠的眼睛呆滞、行动缓慢、爬行无力、皮毛欠缺光泽、眼睑唇鼻血色暗红。加味当归补血汤组小鼠行动敏捷、皮毛光柔顺，眼睑唇鼻呈淡红色，与正常组小鼠无明显区别。
3.2对各组小鼠外周血象的观察
与正常对照组比较，模型组小鼠外周血象各项指数均显著降低(P＜0．01)。与模型组比较，加味当归补血汤组能明显提高小鼠红细胞数(P＜0．01)和血红蛋白含量等各项指数(P＜0．05)。见表1。
表1加味当归补血汤对血虚小鼠外周血象的影响
4.分析与讨论
目前关于制作血虚证模型的方法主要有放射线辐照法、环磷酰胺化学损伤法以及乙酰苯肼和环磷酰胺复合法三种[5-7]。本课题采用综合放血法，模拟小鼠失血，使“有形之血不能速生”，并结合温水游泳，每日限食等措施，使得小鼠“无形之气不能固益”，血液亏损且新血化生不足，表现为外周血象血细胞数明显降低，从而复制小鼠血虚证模型。综合放血法所致的血虚模型与传统中医理论契合，是补血实验常用模型[8]。采用这种方法造模,模型组的动物存活率比较高,血虚状态的持续时间相对较长,有利于中药药效的表达,以检验药物的作用与作用机理。此外中医认为血虚大多伴有一定气虚症状,本实验中模型组小鼠外观出现行动迟缓、团缩成一团、毛蓬没有光泽、喜闭目、唇绀、耳和尾苍白而凉。由于缺血缺氧降低了机体的新陈代谢,能量减少,因此还显示出小鼠游泳时间缩短，体重减轻，外周血象指数下降。本实验采用此模型对加味当归补血汤的作用进行了研究，是在原方当归补血汤的基础上加入了熟地这一味药，并且以黄芪为君，熟地作为臣药。熟地黄药性甘，微温，归肝、肾二经，具有补血滋阴，益精填髓之功效。现代药理学研究表明熟地水煎液能促进失血性贫血小鼠红细胞、血红细胞的恢复。取黄芪大补脾肺元气,当归补血养血，熟地滋肾养阴。在实验中,当归补血汤能显著增加血虚模型小鼠的红细胞、白细胞数,降低网织红细胞在外周血红细胞中过高的比例，能有效地增加正常红细胞的数量,使血虚模型动物的外周血细胞质量趋向正常。加味当归补血汤对血虚证的治疗为中医理论“精血同源”提供了有力的论据。
参考文献:
[1]姚楠,黄雪君,杜铁良,等.加味当归补血汤对血虚小鼠EPO和GM-CSF表达的影响[J].广东药学院学报,2013,29(2):177-180.
[2]聂健,詹素琼,梁歌,等.当归补血汤对小鼠造血功能和生长性能的影响[J].四川畜牧兽医,2013,40(1):30-31.
[3]霍超,马增春,王穆,等.综合放血法所致血虚证小鼠模型及四物汤反证的代谢组学研究[J].中国中药杂志,2010,35(23):3194-3198.
[4]史旭芹,唐于平,李伟霞,等.大鼠慢性失血性血虚模型造模方法的研究与评价[J].中国药理学通报,2013,29(3):437-441.
[5]霍超,王穆,马增春,张琪,颜贤忠,张伯礼,高月.辐射损伤所致血虚证小鼠模型及四物汤反证的代谢组学研究[J].天津中医药,2010,(03):233-235.
[6]朱映黎,张建军,黄银峰,等.白芍和赤芍对环磷酰胺致血虚小鼠的补血作用及对IL-3、TNF-α影响的比较研究[J].中华中医药杂志,2014(4):1058-1060.
[7]朱敏,段金廒,唐于平,等.采用化学药物联合致小鼠血虚模型评价四物汤及其配伍组成的作用特点[J].中国中药杂志,2011,36(18):2543.
[8]张建军,黄银峰,王丽丽,等.白芍、赤芍及芍药苷、芍药内酯苷对综合放血法致血虚小鼠补血作用的比较研究[J].中国中药杂志,2013,38(19):3358-3362.