降钙素基因相关肽受体单克隆抗体的制备与初步鉴定

论文摘要

目的:制备与鉴定抗降钙素基因相关肽受体（CGRPR）单克隆抗体。方法:构建GST-CGRPR胞外区融合表达载体,诱导表达后经GST亲和层析得到的重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术筛选阳性细胞株,通过腹水制备鼠源单克隆抗体,采用ELISA、SDS-PAGE、Western印迹和抗体分型试剂盒等方法进行分析鉴定。结果:纯化得到的GST-CGRPR胞外区融合蛋白纯度大于90%,筛选到2株针对CGRPR的单克隆抗体1F9、1F10,轻、重链均分别为κ型、IgG1型,细胞上清效价分别为1∶3200、1∶1600,腹水效价都达到105,抗体纯度均达到90%以上,且都以线性表位结合GST-CGRPR,亲和力常数分别为3.95×10-8、1.49×10-8mol/L。结论:获得2株具有高亲和力针对CGRPR的单克隆抗体,为偏头痛治疗药物研发奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 重组质粒构建
•   1.3 蛋白表达及纯化
•   1.4 动物免疫
•   1.5 杂交瘤细胞株建立
•   1.6 腹水制备及纯化
•   1.7 抗体亚类鉴定及效价测定
•   1.8 抗体可变区基因调取
•   1.9 抗体特异性鉴定
•   1.1 0 抗体亲和力测定
• 2 结果
•   2.1 重组表达载体构建
•   2.2 目的蛋白纯化
•   2.3 单克隆抗体筛选
•   2.4 抗体亚型分析及细胞上清效价测定
•   2.5 抗体可变区基因序列分析
•   2.6 抗体制备
•   2.7 单抗特异性鉴定
•   2.8 抗体亲和力常数测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王佳星,许永亮,付楚溪,张丹雨,薛冲,张惟材,王升厚,熊向华

关键词: 降钙素基因相关肽受体,抗原,单克隆抗体,杂交瘤

来源: 生物技术通讯 2019年06期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 沈阳师范大学生命科学学院,军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,辽宁大学生命科学学院

分类号: R392

页码: 775-779+785

总页数: 6

文件大小: 1311K

下载量: 51