中华鳖figlα基因的克隆及其在性腺中的表达分析

中华鳖figlα基因的克隆及其在性腺中的表达分析

论文摘要

为解析中华鳖figlα基因功能及其对配子生成的作用机制,本研究开展了中华鳖figlα基因的cDNA序列克隆及其mRNA表达模式分析。克隆获得的figlα基因cDNA序列为714 bp,包含长72个碱基的3’UTR和长642个碱基的开放阅读框(open reading frame, ORF),共编码213个氨基酸。中华鳖Figlα蛋白序列与西部锦龟Figlα蛋白的同源性高达93%,且包含一个Figlα蛋白高度保守的bHLH (basic helix-loop-helix)结构域,因此被命名为PSFiglα。同时,NJ系统进化树分析显示中华鳖Figlα蛋白与哺乳类、鸟类的聚为一支。荧光定量PCR分析发现中华鳖figlα基因主要在性腺中表达:在卵巢中表达最强,精巢中表达较弱,而在其它体组织中均未检测到明显的表达。冰冻切片原位杂交分析表明:中华鳖figlαmRNA在其卵子发生过程的各期卵泡中均有表达,在初级卵母细胞(Ⅱ~Ⅴ期)中表达最强且主要分布在卵母细胞的胞质中;在生长卵母细胞(Ⅵ~Ⅸ期)及成熟卵母细胞(Ⅹ期)中,figlαm RNA主要分布在卵母细胞胞质及其周边的滤泡细胞中。在精巢中,中华鳖figlαmRNA在初级精母细胞中表达最强,在次级精母细胞和精子细胞中表达较强,在精原细胞中表达较弱,而在体细胞中几乎检测不到信号。研究结果表明figlα基因可能主要调控中华鳖卵泡的形成及其卵巢的发育,同时可能在中华鳖精子发生过程中也有一定的调控作用。本研究为进一步开展中华鳖及其它爬行动物配子生成以及性腺发育分化的研究奠定了基础。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 中华鳖figlαcDNA序列分析
  •   1.2 中华鳖figlα表达的组织特异性分析
  •   1.3 中华鳖figlαmRNA在性腺组织中的细胞分布
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 实验材料
  •   3.2 总RNA提取和第一链cDNA合成
  •   3.3 figlαcDNA序列的分离鉴定
  •   3.4 荧光定量PCR(qRT-PCR)
  •   3.5 原位杂交RNA探针制备
  •   3.6 切片制备及原位杂交
  • 作者贡献
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 赵岩岩,李伟,吴栩灵,朱新平,徐红艳

    关键词: 中华鳖,基因,表达分析,卵子发生,精子发生

    来源: 基因组学与应用生物学 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

    专业: 水产和渔业

    单位: 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业部热带亚热带水产资源利用与养殖重点实验室,上海海洋大学水产与生命学院

    基金: 广东省科技计划项目协同创新与平台环境建设(2016A050502029),广东省海洋渔业科技与产业发展专项重点项目(A201501A01),中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(2016HY-ZC04)共同资助

    分类号: S917.4

    DOI: 10.13417/j.gab.038.004430

    页码: 4430-4438

    总页数: 9

    文件大小: 3378K

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