导读:本文包含了成虫文库论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:文库,基因,抗原,旋毛虫,细胞核,血吸虫,特异性。
成虫文库论文文献综述
蔡艳[1]（2018）在《长足大竹象发育转录组文库分析及成虫觅偶行为定向信息物质研究》一文中研究指出长足大竹象Cyrtotrachelus buqueti Guerin-Meneville是我国南方重要的钻蛀性林业害虫,成虫以管状喙啄入笋箨内啄食笋肉补充营养,而幼虫则在笋组织内取食笋肉。危害多种丛生竹类,严重影响竹类产业发展。在林业有害生物无公害防治的新背景下,迫切需要开展如何利用长足大竹象觅偶行为对其进行绿色生态防治。本研究基于长足大竹象成虫觅偶定向行为,以长足大竹象各虫态为研究对象,通过顶空固相微萃取(Headspace Solid Phase Micro-Extraction,HS-SPME)、气相色谱-质谱联用(Gas Chromatograph-Mass Spectrometry,GC-MS)、触角电位(Electroantennogram responses,EAG)反应、Y型嗅觉仪(Y-tube olfactometer)生物测定及转录组(Illumina HiSeq)测序等方法,构建了长足大竹象发育转录组文库,分析各虫态的基因表达差异,系统研究了长足大竹象觅偶定向信息物质、以及植物挥发物质对其增效作用,进而推进开发利用性引诱剂诱杀(捕)成虫,实现该虫无公害综合治理和资源化利用的途径。主要结果如下:(1)长足大竹象发育转录组(卵、幼虫、蛹、雌虫、雄虫)大约有16480万条信息片段,注释为108854条Transcript序列,分别被装配在卵、幼虫、蛹、雌性、雄性和合并的24338,21597,24798,21886,24642,83115条Unigene序列中。转录Unigene在NR数据库注释21058条,NT数据库注释5890条,KO数据库注释8063条,SwissProt数据库注释14748条,PFAM数据库17105注释条,GO数据库注释17213条,KOG数据库注释10672条。Unigenes表达水平分析还表明:长足大竹象不同虫态功能基因表达存在显着差异。(2)采用顶空固相微萃取(HS-SPME)结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术,分析了长足大竹象雌雄成虫虫粪挥发性成分。结果表明:长足大竹象雌虫虫粪挥发性成分包括萜烯类、烷烃类、醇类、醛类、酮类、酯类、酚类7类26种挥发性成分;雄虫虫粪含萜烯类、烷烃类、醇类、酯类、酚类5类18种挥发性成分;初步推测,雌虫虫粪含有信息化合物成分。(3)采用GC-MS和EAG反应技术,分析了长足大竹象成虫体表挥发物的日节律变化及成虫对不同时段挥发物的EAG反应和嗅觉生测试验,结果表明:长足大竹象雌虫体表节律性挥发物质有17种;雄虫体表节律性挥发物质有15种;10:00-12:00时间段雌虫节律性挥发物提取液对未交配雄虫的引诱率最高(P<0.05),与其的EAG反应结果一致,同时发现雄虫体表挥发物可能存在一些信息化合物质,且主要分泌时间段也为10:00-12:00。(4)利用触角电位仪和Y型嗅觉仪对15种长足大竹象成虫体表挥发性成分进行电生理和行为反应测定。结果表明,长足大竹象雌雄成虫对不同虫体挥发性成分反应灵敏度不同,雄虫对邻苯二甲酸二丁酯EAG反应最强,雌成虫对苯并噻唑EAG反应最强,雄虫的EAG反应普遍高于雌虫,苯并噻唑在100μg/μL、200μg/μL,右旋萜二烯、苯酚、邻苯二甲酸二丁酯在100μg/μL浓度时,雄虫与雌虫对化合物的EAG反应呈现显着差异(P<0.05)。此外,成虫对同种化合物的不同浓度的EAG反应不同,樟脑最强EAG反应浓度为200μg/μL,角鲨烯最强EAG反应浓度在1μg/μL,其余13种化合物的最强EAG反应浓度为100μg/μL。行为生测中,发现邻苯二甲酸二丁酯、苯酚、苯并噻唑对未交配雄虫、雌虫的引诱作用较好,且邻苯二甲酸二丁酯对雄虫的引诱作用有显着差异(P<0.05)。(5)将100μg/μL浓度的单质虫体挥发物(邻苯二甲酸二丁酯、苯酚、2-壬酮)、标准品化合物混合物(苯酚:己酸乙酯:2-壬酮:壬醛:十五酸甲酯=17:19:8:26:28)中按照不同比例(9:1,7:3,5:5,3:7)添加叁种植物挥发物(芳樟醇、吲哚、苯甲醛)进行EAG反应测定和Y型嗅觉仪生测表明,邻苯二甲酸二丁酯∶苯甲醛=5:5、混合物∶苯甲醛=5:5对雄虫的引诱效果最好(P<0.05)。苯甲醛能较好提高虫体混合物、虫体单质化合物对雄虫的引诱能力,而芳樟醇和吲哚的增效作用较差。本研究明确了长足大竹象不同虫态转录组文库,提取和分析雌雄虫虫粪成分和虫体挥发物日节律物质变化情况,发现了雌雄虫信息素释放的日高峰时段,初步推测邻苯二甲酸二丁酯、苯酚等挥发物为信息化合物质,苯甲醛可能对雄虫觅偶有增效作用。(本文来源于《四川农业大学》期刊2018-06-01）
杨益[2]（2016）在《钩虫病患者血清对美洲钩虫抗原反应性分析及美洲钩虫成虫cDNA文库的构建》一文中研究指出钩虫病仍在我国广大农村流行,严重危害人民健康,是重要的公共卫生问题。有效的诊断方法对于此病的防治非常关键,粪检法仍是目前最普遍应用的诊断方法。随着防治工作的深入,人群感染率和感染度降低,此方法已不能满足防治工作需要,迫切需要快速简便的免疫学检测方法应用于现场大规模筛查或诊断,而诊断抗原是建立有效免疫学检测方法的基础。本研究以美洲钩虫成虫为材料,对其应用不同方法进行处理,得到四种可溶性粗抗原(分别记为A、B、C和D抗原),应用ELISA法对其检测效能进行评价,并选取检测效能较高的抗原应用于钩虫病人血清抗体反应性分析,以确定钩虫病人血清中优势抗体(亚)类,从而为建立敏感特异检测钩虫病的免疫检测方法提供依据；另外,本研究通过Gateway技术构建钩虫cDNA入门文库和表达文库,将应用确诊的钩虫病人混合血清对cDNA表达文库进行筛选,并对筛选到的基因进行序列分析和编码蛋白分析；诱导表达重组蛋白,应用ELISA方法对重组蛋白的诊断价值进行评价。分别以制备的A、B、C、D四种美洲钩虫成虫可溶性粗抗原作为包被抗原,以酶标记抗人IgG作为二抗,以ELISA法检测钩虫病患者血清、健康入和其它寄生虫病患者血清,其检测的敏感性分别为87.75%、86.73%、87.75%和93.87%；特异性分别为76.12%、74.63%、73.13%和80.60%；诊断效能分别为83.03%、81.82%、81.82%和88.48%。表明D抗原具有很好的免疫检测效能。选取诊断效能较高的D抗原作为包被抗原,分别以酶标记抗人IgM、IgD、IgE、IgG1、 IgG2、IgG3、IgG4和IgG作为二抗,以ELISA法检测钩虫病患者血清,其检测的敏感性依次为41.84%、2.04%、1.02%、19.39%、25.51%、17.35%、88.78%和92.93%；检测健康人和其它寄生虫病患者血清的特异性依次为77.61%、97.01%、92.54%、95.52%、92.53%、92.53%、92.53%和79.10%；诊断效能依次为56.36%、40.61%、38.18%、50.30%、52.73%、47.88%、90.30%和87.88%。表明IgG4和IgG是钩虫病血清中优势抗体(亚)类。本研究使用美洲钩虫成虫为材料构建了美洲钩虫cDNA入门文库,其平均滴度为3.0×1O5cfu/ml,库总容量为3.0×105cfu；基于构建的入门文库构建了美洲钩虫成cDNA表达文库,其平均滴度为1.9×104cfu/ml,总容量为1.9×104cfu,平均插入片段大小为1010kb,重组率为85%。应用确诊的钩虫病人混合血清筛选cDNA文库,筛选出2个强阳性克隆,经测序和序列分析,S1插入片段长度为1042bp,编码的蛋白与已报道的美洲钩虫β一微管蛋白高度同源(99%)；S2插入片段长度为937bp,编码的蛋白与已报道的美洲钩虫一未知蛋白高度同源。对S1和S2编码蛋白的二级结构进行分析预测,表明两者均具有很好的抗原性。然后对S1和S2编码基因进行了诱导表达和纯化,对纯化蛋白应用ELISA法评价了它们的诊断效能,结果显示S1和S2重组蛋白检测的敏感性分别为88.42%和91.58%；特异性分别为77.27%和95.45%,二者检测的诊断效能分别为83.85%和93.17%。这些结果表明,本项研究已成功构建了美洲钩虫成虫cDNA表达库,为筛选诊断靶分子提供了基础；筛选出的S2重组蛋白显示了很好的诊断潜能,经过进一步研究有望开发出检测钩虫病的试剂盒。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2016-06-30）
冯金涛,韩愉,袁炜,张欣,许瑞[3]（2016）在《阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库》一文中研究指出为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG叁轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析。获得了9个EST序列,其中7个EST序列与已知基因或表达序列标签同源,2个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(open reading frame,ORF)为依据,对上述7个与Gen Bank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果 7个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中3个EST具有较高的重复度,在51个有效克隆中,25个为HSP70 homolog基因,15个为Keratin9基因有重复,6个为Ornithine--oxo-acid transaminase基因。研究结果显示,HSP70 homolog基因、Keratin9基因和Ornithine--oxo-acid transaminase基因作为诊断家畜血吸虫病候选抗原基因,值得进一步开展克隆、表达和诊断效果评估方面的研究。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2016年02期）
冯金涛,刘金明,韩愉,袁炜,李浩[4]（2015）在《日本血吸虫感染家畜的IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库》一文中研究指出为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,我们用从感染日本血吸虫的绵羊、黄牛、水牛血清中纯化的IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44 d)噬菌体展示cDNA文库。每种动物IgG进行二轮筛选,经六轮筛选后,随机挑取11 0个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析,获得了54个有效EST序列,其中42条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,12个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(ORF)为依据,对上述42个与GenBank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果21个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中血吸虫MRP1(Multidrug Resistance Protein 1)序列在所有测序结果中有20个重复。本文筛选结果为今后开展诊断抗原基因的克隆、表达和诊断效果评估创造了条件。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十叁次学术研讨会论文集》期刊2015-07-25）
赵莉,石保新,李军,张壮志,马正海[5]（2015）在《细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析》一文中研究指出细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对测序结果进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果显示:对PSC-CW和PSC-AW文库进行扩增,分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR鉴定结果表明,这些克隆均插入200~1 000bp片段。测序结果显示从PSC-CW和PSC-AW SSH文库中分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个出现频率较高的基因,其余12个基因仅出现1次,其中5个为未知基因,已知基因分别编码细胞色素C氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白质。PSC-AW SSH文库中得到10个基因,其中2个出现频率较高基因,8个基因仅出现1次,4个为未知基因,6个已知基因分别编码基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白质。本研究筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运功能的相关基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2015年07期）
李丽娜,赵蕾,许士奇,王丽娜,赵香菊[6]（2013）在《旋毛虫成虫cDNA文库的建立及PCNA基因克隆和序列分析》一文中研究指出目的建立旋毛虫成虫cDNA文库,对旋毛虫增殖细胞核抗原PCNA基因进行克隆和测序分析。方法收集纯净的旋毛虫成虫,提取RNA,构建cDNA文库。根据GenBank中登录的PCNA基因的序列设计并合成引物,用PCR方法从旋毛虫成虫基因库筛选PCNA基因;将PCR产物与pUM-T载体连接,转化到感受态细胞DH5α,进行测序和同源性比较。结果成功构建旋毛虫成虫cDNA文库,克隆PCNA基因序列与GenBank登录的PCNA基因同源性为94%。结论成功构建了旋毛虫成虫cDNA文库;成功克隆了PCNA基因。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2013年03期）
李丽娜[7]（2013）在《旋毛虫成虫cDNA文库构建及特异性基因PCNA的克隆、表达及功能鉴定》一文中研究指出旋毛虫病（trichinellosis trichinosis）的病原体是旋毛形线虫（Trichinellq spiralis）简称旋毛虫，寄生于猪、野猪、鼠、熊等150种动物和人体内，成虫和幼虫分别寄生于同一宿主的小肠内。旋毛虫病是因为生食或半生食含有旋毛虫幼虫囊包的猪肉和其他动物肉类而感染，本病是世界上较常见的人兽共患病。不仅严重危害人类健康，而且对养猪业可造成巨大损失。近年来在我国17个省、市、自治区发现有多起人体感染的暴发流行。河南省为我国旋毛虫病高发区之一，仅郑州市已发生7次暴发流行，发病400多人。若不及时诊断和治疗，患者死亡率可高达3%一30%。因而旋毛虫成为我国肉食品卫生检验中的首检寄生虫，开展旋毛虫病的预防和控制工作在我国更具紧迫性和重要性，而预防和控制旋毛虫病的关键在于建立一套快速、简便、特异性高的检测手段以及采取各种有效预防措施降低动物感染率。对旋毛虫病的免疫预防的研究表明，由于旋毛虫在不同的发育期虫体抗原组分存在明显的差异并且在同一期虫体抗原结构也极其复杂，在长期寄生生活中，逐渐形成了免疫逃避机制，所以目前采用成份复杂的虫体抗原往往难以取得理想的免疫预防效果。旋毛虫抗原具有其特异性，成分极其复杂，并且不能在体外进行培养和繁殖，而且其临床表现较为复杂，因此给旋毛虫病免疫诊断及预防带来困难，故寻找旋毛虫特异性抗原基因就成为我们工作的重点。而构建cDNA文库，采用免疫学方法钓取cDNA片段，从而分析抗原蛋白的抗原表位，选取最佳抗原，是研究旋毛虫抗体的有效途径之一。目的：收集纯净的5日龄旋毛虫成虫，建立旋毛虫成虫cDNA文库并对旋毛虫增殖细胞核抗原PCNA基因进行克隆和测序，测序结果与GenBank中的PCNA基因序列比较。构建旋毛虫增殖细胞核抗原基因原核表达载体，用IPTG的方法诱导其表达目的蛋白，并用Westen鉴定其功能。方法：收集纯净的旋毛虫5日龄成虫，提取旋毛虫成虫的RNA，进一步建库。根据GenBank中登录的PCNA基因的序列设计引物，用PCR的方法从旋毛虫成虫基因库筛选这一基因，得到的PCR产物与pUM-T载体连接，转化到感受态细胞DH5a进行测序和同源性比较。分别抽提表达载体PET32a及目的基因的质粒，通过BamHI和HindIII双酶切并做产物回收的方法得到具有酶切位点的表达载体，从而连接目的基因及表达载体，构建表达重组体，将构建好的表达性重组体转化入感受态BL21。通过IPTG诱导表达出目的蛋白，经Westen鉴定此蛋白的功能。结果：1提取旋毛虫成虫RNA：在胶上可以清晰的看到28S,18S,5S叁条条带，条带亮度较好，无明显降解现象，说明RNA的完整性较好，可进行cDNA的合成，可用于文库构建。凝胶电泳图片发现，旋毛虫的18S rRNA条带亮度明显高于28S rRNA条带亮度，约为2倍，经多次重复，结果一致。2构建旋毛虫成虫cDNA文库：经过两次杂交和两次PCR，把所得到的cDNA文库进行电泳检测分析。3扩增出PCNA基因：以构建的旋毛虫cDNA文库为模版，用PCR的方法扩增出PCNA基因，其大小约为804bp。克隆基因与GenBank登录的增殖细胞核抗原的基因同源性为94%。4表达载体的构建：抽提表达载体pET32a的质粒，用BamHI和HindIII对表达载体pET32a进行酶切并做产物回收，得到了表达载体构建。5pET32a-PCNA重组表达质粒的鉴定：用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒后得到2500bp和804bp左右两条片段，与预期结果相符，表明pET32a-PCNA原核表达载体构建成功。6重组表达质粒pET32a-PCNA的表达：表达产物进行SDS-PAGE后，在30kD位置处可见明显的蛋白质条带。7Western blot做功能鉴定：用感染了旋毛虫的小鼠血清做一抗，得到明显的条带，从而鉴定了PCNA的抗原性。结论：1构建了云南株旋毛虫成虫cDNA文库；克隆了PCNA基因。2构建了云南株旋毛虫增殖细胞核抗原基因的原核表达载体。3表达了PCNA蛋白。4用Western的方法验证了增殖细胞核抗原的抗原性。(本文来源于《承德医学院》期刊2013-03-01）
王甸洪,吴伟坚,符悦冠[8]（2012）在《螺旋粉虱成虫体内细菌群落多样性的PCR-DGGE和16S rRNA文库序列分析》一文中研究指出为了解螺旋粉虱Aleurodicus dispersus体内细菌多样性和主要优势菌群结构,用PCR-DGGE和16S rRNA文库对采自于海南省番石榴上螺旋粉虱雌、雄成虫体内的细菌群落进行了分析。用PCR扩增体内细菌16S rRNA基因,构建雌、雄虫克隆文库;再用限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法从文库中筛选不同16S rRNA基因图谱,根据图谱对克隆子进行分型。从螺旋粉虱雌、雄两个样品中共获得10种分类操作单元(operational taxonomic unit,OTUs)。以16S rRNA基因为基础构建系统发育树,系统发育分析表明,螺旋粉虱雌、雄成虫体内优势菌群主要为发酵菌属Zymobacter,杀雄菌属Arsenophonus,泛菌属Pantoea和假单胞菌属Pseudomonas。Candidatus Portiera aleyrodidarum和Arsenophonus sp.可能为其体内共生菌群,在所有样品中均可稳定地检测到。这些微生物可能对螺旋粉虱生长发育、繁殖和性比调控起到重要的协同作用。(本文来源于《昆虫学报》期刊2012年07期）
侯洪烈[9]（2011）在《犬恶丝虫成虫cDNA文库的构建及免疫相关蛋白的研究》一文中研究指出犬恶丝虫(Dirofilaria immitis)属旋尾目,丝虫亚目,蟠尾科,恶丝虫亚科,恶丝虫属。犬恶丝虫病是由犬恶丝虫成虫寄生于犬的右心室、肺动脉内,使患犬形成机械性栓塞,影响心肺功能,导致呼吸衰竭、循环和泌尿系统遭受严重损伤的寄生线虫病。犬、猫科动物是本病的天然宿主,野生肉食动物、马属动物、海狸、猩猩、麝鼠、灵长类等偶见感染,还可以感染人类。该病通过蚊子摄取含微丝蚴(无鞘、长锥形尾)的血液进行传播,有超过60种的蚊子可以传播该病。迄今为止,犬恶丝虫病仍没有理想的诊断和预防措施。国内外有许多犬恶丝虫病检测方法的报道,如:微丝蚴检查、血凝试验、琼脂扩散试验、补体结合试验、荧光抗体标记技术、PCR法等,但效果均不理想。目前防治该病主要依赖化学药物,尚无理想的预防疫苗。因此本研究在构建犬恶丝虫成虫cDNA文库的基础上,筛选并获得免疫相关基因。然后利用获得的免疫相关基因制备了亚单位疫苗和核酸疫苗并确定这些疫苗刺激机体产生的免疫应答。最后以纯化的重组蛋白为诊断抗原建立了犬恶丝虫病的ELISA诊断方法。从而为犬恶丝虫病的免疫预防和诊断奠定了良好基础。犬恶丝虫成虫cDNA文库构建本研究采用Clontech公司的SMART技术提取犬恶丝虫总RNA后反转录,再合成第二链cDNA,经蛋白酶K处理和Sfi酶切后进行片段分离并连接、包装构建犬恶丝虫成虫cDNA文库。结果表明:试验成功构建了犬恶丝虫成虫cDNA表达文库,原始文库的库容量为9×10~5 pfu/mL,重组率为98%,扩增文库滴度为1.0×10~9 pfu/mL,该文库的建立为进一步筛选免疫相关基因奠定了基础。犬恶丝虫免疫相关基因筛选采用SEREX技术对文库进行筛选。首先对文库中的λ噬菌体进行平板培养,然后用IPTG诱导蛋白质表达,分别采用小鼠抗犬恶丝虫高免血清和自然感染犬血清从cDNA表达文库中进行筛选,共获得11个阳性克隆。经分析它们均编码犬恶丝虫免疫相关蛋白,分别为:犬恶丝虫副肌球蛋白部分序列、犬恶丝虫强免疫反应部分序列、犬恶丝虫表皮抗原串联重复序列、马来丝虫酪蛋白激酶(Csnk2b)部分序列、犬恶丝虫中性粒细胞趋化因子前体部分序列、犬恶丝虫18S核糖体RNA基因部分序列、马来丝虫Fip1基序家族蛋白部分序列、马来丝虫解旋酶的保守C端结构域包含的蛋白质部分序列、马来丝虫肌球蛋白尾家族蛋白部分序列、马来丝虫G蛋白路径抑制剂1部分序列以及马来丝虫ATP酶,AAA家族蛋白部分序列。本研究选取其中两个新发现的犬恶丝虫新基因作为疫苗和诊断候选抗原基因,将与马来丝虫G蛋白路径抑制剂1同源基因命名为GSP1(同源性85%);与编码马来丝虫肌球蛋白尾家族蛋白同源基因命名为MTFP(同源性88%)。GSP1和MTFP基因重组亚单位疫苗研究将GSP1与MTFP基因扩增,构建重组原核表达质粒,将其分别转化至大肠埃希菌DE3内,进行IPTG诱导表达,将原核表达产物分别免疫实验动物,通过抗犬恶丝虫特异抗体、CD4~+ T和CD8~+ T淋巴细胞百分比,检测表达蛋白是否具有免疫原性。结果表明:成功构建了pGEX-4T-1-GSP1和pGEX-4T-1-MTFP重组原核表达质粒,SDS-PAGE显示表达蛋白大小分别为36Ku和34Ku,Western Blotting显示均能被自然感染犬恶丝虫的多克隆抗体识别。两个纯化的重组蛋白分别免疫BALB/c小鼠,以犬恶丝虫可溶性蛋白做检测抗原,采用ELISA法检测小鼠的体液免疫水平:试验组血清IgG滴度逐渐升高,第叁次免疫后其抗体滴度与对照组相比差异均极显着(P<0.01);细胞免疫水平检测:试验组CD4~+ T淋巴细胞百分比与与佐剂和空白对照组相比均差异极显着,试验组CD8~+ T淋巴细胞百分比与佐剂和空白对照组相比均差异不显着(P>0.05),CD4~+与CD8~+ T淋巴细胞比值与佐剂和空白对照组相比均差异极显着(P<0.01)。GPS1与MTFP基因有望成为犬恶丝虫亚单位疫苗研究的候选基因,本研究为犬恶丝虫病的免疫预防奠定了基础。GSP1和MTFP基因核酸疫苗研究分别将GPS1与MTFP基因定向亚克隆到真核表达质粒pVAX1中,构建pVAX1-GPS1和pVAX1-MTFP重组真核表达质粒并转染HeLa细胞。将真核表达质粒分别免疫实验动物,通过抗犬恶丝虫特异抗体、CD4~+ T和CD8~+ T淋巴细胞百分比,检测表达蛋白是否具有免疫原性。结果表明:成功构建了pVAX1-GPS1和pVAX1-MTFP重组真核表达质粒并成功转染了HeLa细胞,Western Blotting显示表达蛋白均与预期大小相符,均能被自然感染犬恶丝虫的多克隆抗体识别。将重组质粒免疫BALB/c小鼠后,以犬恶丝虫可溶性蛋白做检测抗原,以ELISA法检测小鼠的体液免疫水平显示:试验组血清IgG显着高于佐剂和空白对照组(P<0.01);细胞免疫水平检测显示:试验组CD4~+ T淋巴细胞百分比显着高于佐剂和空白对照组(P<0.01),试验组CD8~+ T淋巴细胞百分比与佐剂和空白对照组相比均差异不显着(P>0.05),CD4~+与CD8~+ T淋巴细胞比值均显着高于佐剂和空白对照组(P<0.01)。本研究为犬恶丝虫病的免疫预防奠定了基础。犬恶丝虫病ELISA方法的建立以纯化重组蛋白GST-GSP1和GST-MTFP为诊断抗原建立犬恶丝虫病的ELISA诊断方法。采用方阵滴定试验确定最佳工作浓度,并通过进一步的特异性试验进行验证。结果表明:重组蛋白的最佳工作浓度分别为(GST-GSP1为5.5μg/100μL;GST-MTFP为5μg/100μL),最佳血清稀释倍数均为1:150,HRP标记羊抗犬IgG均稀释为1:2000。进一步的阻断性试验、交叉反应试验、敏感性试验、重复性试验、与参考阴阳性血清符合率试验及现场检测对比试验证明:该方法具有敏感性高(融合蛋白GST-GSP1检出犬恶丝虫的最高抗体滴度为1:1600;GST-MTFP为1:3200),特异性较强且稳定性好的特点。现场符合率试验结果表明:45只待检犬用犬恶丝虫抗原检测试剂盒检测的阳性率为20.0% ;采用融合蛋白ELISA法和PCR法进行检测的阳性率均为22.2%,且经剖检验证无假阳性。该方法的建立为犬恶丝虫病的诊断奠定了基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2011-12-01）
赵莉,张壮志,石保新,张旭,古努尔·吐尔逊[10]（2011）在《细粒棘球蚴原头蚴-成虫(PSC-AW)和原头蚴-成囊(PSC-CW)抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及生物信息学分析》一文中研究指出目的:细粒棘球绦虫原头蚴具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因。方法将SC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3 sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对序列进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果PSC-CW和PSC-AW文库扩增后分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR分析,这些克隆均插入200～1000bp片段。测序结果显示PSC-CW和PSC-AW SSH文库分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个高表达基因,12个单一基因,其中5个为未知基因,已知基因为细胞色素c氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白。PSC-AW SSH文库中得到2个高表达基因,8个单一基因,其中4个为未知基因,其中已知基因为基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白。结论筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运相关的功能基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。(本文来源于《中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集》期刊2011-11-18）
成虫文库论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
钩虫病仍在我国广大农村流行,严重危害人民健康,是重要的公共卫生问题。有效的诊断方法对于此病的防治非常关键,粪检法仍是目前最普遍应用的诊断方法。随着防治工作的深入,人群感染率和感染度降低,此方法已不能满足防治工作需要,迫切需要快速简便的免疫学检测方法应用于现场大规模筛查或诊断,而诊断抗原是建立有效免疫学检测方法的基础。本研究以美洲钩虫成虫为材料,对其应用不同方法进行处理,得到四种可溶性粗抗原(分别记为A、B、C和D抗原),应用ELISA法对其检测效能进行评价,并选取检测效能较高的抗原应用于钩虫病人血清抗体反应性分析,以确定钩虫病人血清中优势抗体(亚)类,从而为建立敏感特异检测钩虫病的免疫检测方法提供依据；另外,本研究通过Gateway技术构建钩虫cDNA入门文库和表达文库,将应用确诊的钩虫病人混合血清对cDNA表达文库进行筛选,并对筛选到的基因进行序列分析和编码蛋白分析；诱导表达重组蛋白,应用ELISA方法对重组蛋白的诊断价值进行评价。分别以制备的A、B、C、D四种美洲钩虫成虫可溶性粗抗原作为包被抗原,以酶标记抗人IgG作为二抗,以ELISA法检测钩虫病患者血清、健康入和其它寄生虫病患者血清,其检测的敏感性分别为87.75%、86.73%、87.75%和93.87%；特异性分别为76.12%、74.63%、73.13%和80.60%；诊断效能分别为83.03%、81.82%、81.82%和88.48%。表明D抗原具有很好的免疫检测效能。选取诊断效能较高的D抗原作为包被抗原,分别以酶标记抗人IgM、IgD、IgE、IgG1、 IgG2、IgG3、IgG4和IgG作为二抗,以ELISA法检测钩虫病患者血清,其检测的敏感性依次为41.84%、2.04%、1.02%、19.39%、25.51%、17.35%、88.78%和92.93%；检测健康人和其它寄生虫病患者血清的特异性依次为77.61%、97.01%、92.54%、95.52%、92.53%、92.53%、92.53%和79.10%；诊断效能依次为56.36%、40.61%、38.18%、50.30%、52.73%、47.88%、90.30%和87.88%。表明IgG4和IgG是钩虫病血清中优势抗体(亚)类。本研究使用美洲钩虫成虫为材料构建了美洲钩虫cDNA入门文库,其平均滴度为3.0×1O5cfu/ml,库总容量为3.0×105cfu；基于构建的入门文库构建了美洲钩虫成cDNA表达文库,其平均滴度为1.9×104cfu/ml,总容量为1.9×104cfu,平均插入片段大小为1010kb,重组率为85%。应用确诊的钩虫病人混合血清筛选cDNA文库,筛选出2个强阳性克隆,经测序和序列分析,S1插入片段长度为1042bp,编码的蛋白与已报道的美洲钩虫β一微管蛋白高度同源(99%)；S2插入片段长度为937bp,编码的蛋白与已报道的美洲钩虫一未知蛋白高度同源。对S1和S2编码蛋白的二级结构进行分析预测,表明两者均具有很好的抗原性。然后对S1和S2编码基因进行了诱导表达和纯化,对纯化蛋白应用ELISA法评价了它们的诊断效能,结果显示S1和S2重组蛋白检测的敏感性分别为88.42%和91.58%；特异性分别为77.27%和95.45%,二者检测的诊断效能分别为83.85%和93.17%。这些结果表明,本项研究已成功构建了美洲钩虫成虫cDNA表达库,为筛选诊断靶分子提供了基础；筛选出的S2重组蛋白显示了很好的诊断潜能,经过进一步研究有望开发出检测钩虫病的试剂盒。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
成虫文库论文参考文献
[1].蔡艳.长足大竹象发育转录组文库分析及成虫觅偶行为定向信息物质研究[D].四川农业大学.2018
[2].杨益.钩虫病患者血清对美洲钩虫抗原反应性分析及美洲钩虫成虫cDNA文库的构建[D].中国疾病预防控制中心.2016
[3].冯金涛,韩愉,袁炜,张欣,许瑞.阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库[J].中国动物传染病学报.2016
[4].冯金涛,刘金明,韩愉,袁炜,李浩.日本血吸虫感染家畜的IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库[C].中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十叁次学术研讨会论文集.2015
[5].赵莉,石保新,李军,张壮志,马正海.细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析[J].畜牧兽医学报.2015
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[8].王甸洪,吴伟坚,符悦冠.螺旋粉虱成虫体内细菌群落多样性的PCR-DGGE和16SrRNA文库序列分析[J].昆虫学报.2012
[9].侯洪烈.犬恶丝虫成虫cDNA文库的构建及免疫相关蛋白的研究[D].吉林大学.2011
[10].赵莉,张壮志,石保新,张旭,古努尔·吐尔逊.细粒棘球蚴原头蚴-成虫(PSC-AW)和原头蚴-成囊(PSC-CW)抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及生物信息学分析[C].中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集.2011
论文知识图
