Dfg5在酿酒酵母细胞壁合成中的功能分析

论文摘要

酿酒酵母中合成的糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白（GPI-APs）一半停留在细胞膜上,另一半被转运至细胞壁的β-1,6-葡聚糖上形成GPI锚定细胞壁蛋白（CWPs）。有分析指出,Dfg5和Dcw1是定位于细胞膜的GPI锚定蛋白,可能以同工酶的形式参与GPI-APs转运。但这两个同源蛋白的分子作用机制尚不清楚。为探究Dfg5的作用机制,本研究构建了dfg5△PMET3DCW1条件突变菌株。研究发现在DCW1表达抑制型突变株中Cwp1在细胞膜上大量积累。对Dfg5中与甘露糖苷酶催化活性相关保守氨基酸位点分别定点突变,产生的突变蛋白Dfg5W71A、Dfg5D122A、Dfg5D123A无法回补条件突变株的生长缺陷。然而截断Dfg5前导肽的分泌型Dfg5则可回补条件突变株的生长缺陷。上述结果可推测在GPI-APs锚定至细胞壁中,Dfg5至少具有糖苷酶,可将Cwps从细胞膜上的GPI锚中释放出来。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•     1.1.1 质粒构建
•     1.1.2 主要试剂和仪器
•     1.1.3 培养基和溶液配制
•     1.1.4菌株构建
•   1.2 菌株表型验证
•   1.3 蛋白质提取
•     1.3.1 细胞膜蛋白质提取
•     1.3.2 细胞壁GPI-CWP1蛋白质提取
•     1.3.3细胞外蛋白质提取
•   1.4 蛋白质免疫印迹电泳
•   1.5 生长曲线测定
• 2 结果与讨论
•   2.1 MET3启动子调控下的突变株表型验证
•   2.2 Dcw1和Dfg5对细胞壁蛋白质合成的影响
•   2.3 Dfg5活性位点分析和保守氨基酸突变
•   2.4 过表达可溶性Dfg5蛋白质对dfg5△PMET3DCW1生长的影响
• 3 结语

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 田贵花,王宁,高晓冬,藤田盛久,喜多岛敏彦

关键词: 酿酒酵母,启动子

来源: 食品与生物技术学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 江南大学生物工程学院,江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目（31400693）,江苏省自然科学基金项目（BK20140141）,中央高校基本科研业务费（JUSRP51508）

分类号: TS261.11

页码: 25-32

总页数: 8

文件大小: 1729K

下载量: 34