鞘氨醇激酶1在小鼠早期妊娠子宫中的表达

论文摘要

鞘氨醇类代谢产物,在调节细胞活动中发挥重要作用,维持鞘脂代谢的平衡,对细胞的生长和发育具有至关重要的作用。鞘氨醇激酶(Sphingosine kinase;SK)是保持鞘脂平衡的重要调节因子,在细胞的增殖、迁移、侵袭以及血管生成中起着重要作用。SK1具有促进细胞生存和增殖的功能。胚胎着床过程中主要涉及细胞增殖、迁移和血管生成,因此SK1可能参与胚胎着床过程。本研究通过建立小鼠早期正常妊娠模型、假孕模型、人工蜕膜化模型、延迟着床和激活着床模型,采用免疫荧光的方法检测SK1在小鼠各模型子宫组织中的定位表达情况,应用Western blot的方法检测小鼠正常妊娠模型中SK1的表达量。在体外诱导小鼠子宫基质细胞发生蜕膜化,通过实时定量PCR的方法,检测SK1 mRNA在体外蜕膜化细胞中的表达量,进一步确定SK1的表达与蜕膜化的相关性。免疫荧光结果显示,在小鼠早期妊娠模型中,妊娠1～4天时SK1主要在基质区域表达,而子宫腔上皮和腺上皮无表达,妊娠5～8天时SK1主要表达在次级蜕膜区域。亚细胞定位显示SK1在蜕膜细胞的细胞质中表达。在小鼠假孕妊娠模型中,SK1主要表达在基质区域,假孕第5天的表达低于正常妊娠第5天的表达。在延迟着床模型和激活着床模型中同样检测到SK1的表达,且分别与正常妊娠第4天和第5天的表达情况相似。在人工蜕膜化模型和体外诱导的小鼠子宫蜕膜化细胞中均检测到SK1的表达。Western blot结果显示SK1在妊娠5～8的表达量逐渐升高。实时定量PCR结果显示,培养72 h和96 h的基质细胞中,发生蜕膜化的细胞中SK1的表达量高于其对照组。综上实验结果,SK1在小鼠子宫中的表达呈现时空特异性的变化,SK1小鼠早期妊娠过程中的表达与活化胚泡相关,在体内及体外实验中均与蜕膜化相关,表明SK1参与小鼠早期妊娠的胚胎着床过程。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
•   1.1 鞘氨醇激酶概述
•     1.1.1 鞘氨醇激酶和1-磷酸鞘氨醇
•     1.1.2 SK1的结构
•     1.1.3 SK1的表达调控及作用机制
•     1.1.4 SK1与疾病的关系
•   1.2 胚胎着床过程和分子机制
•     1.2.1 母体子宫容受性的建立
•     1.2.2 着床过程中的母胎信息交流
•     1.2.3 着床过程中的母胎信息交流
•   1.3 本实验研究的目的和意义
• 2 小鼠妊娠模型制备
•   2.1 实验材料
•     2.1.1 实验动物
•     2.1.2 实验仪器及器具
•     2.1.3 实验试剂
•     2.1.4 实验药品配制
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 实验前仪器处理
•     2.2.2 制备小鼠妊娠模型
•   2.3 模型制备结果与分析
•     2.3.1 小鼠正常妊娠模型的建立
•     2.3.2 小鼠假孕模型的建立
•     2.3.3 小鼠人工蜕膜化模型的建立
•     2.3.4 小鼠延迟着床模型和激活着床模型的建立
•   2.4 本章小结
• 3 SK1在小鼠子宫组织中的表达检测
•   3.1 实验材料
•     3.1.1 实验动物模型
•     3.1.2 实验设备和器具
•     3.1.3 实验试剂
•     3.1.4 实验试剂配制
•   3.2 实验方法
•     3.2.1 实验材料
•     3.2.2 检测SK1在小鼠子宫组织中的表达情况
•   3.3 实验结果与分析
•     3.3.1 SK1荧光信号在小鼠各妊娠模型中的表达情况
•     3.3.2 小鼠正常妊娠模型中SK1的表达量
•   3.4 本章小结
• 4 SK1mRNA在小鼠子宫基质细胞中的表达
•   4.1 实验材料
•     4.1.1 实验动物
•     4.1.2 实验仪器及器具
•     4.1.3 实验试剂
•     4.1.4 仪器处理
•     4.1.5 试剂配制
•   4.2 实验方法
•     4.2.1 激素诱导小鼠子宫基质细胞发生蜕膜化
•     4.2.2 实时荧光定量PCR检测SK1 mRNA
•   4.3 实验结果与分析
•     4.3.1 激素诱导小鼠基质细胞成为蜕膜细胞
•     4.3.2 SK1 mRNA在小鼠蜕膜化细胞中的表达
•   4.4 本章小结
• 5 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢
• 附件

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王秋吉

导师: 单春华

关键词: 小鼠,妊娠子宫组织

来源: 东北林业大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 东北林业大学

分类号: Q344

DOI: 10.27009/d.cnki.gdblu.2019.000209

总页数: 63

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