导读:本文包含了溶栓剂基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:尿激酶,血小板,基因,抗体,溶栓,原人,载体。
溶栓剂基因论文文献综述
颜宏利,贺艳,陆一鸣,赵专有,高远舰[1]（2004）在《膜联蛋白B1-尿激酶原导向溶栓剂的基因构建、表达及活性分析》一文中研究指出血栓性疾病,如急性心肌梗塞(AMI)、脑血栓、深静脉血栓等,发病凶险,死亡率和致残率都极高。溶栓疗法是治疗血栓性疾病的主要手段。第一代溶栓剂以链激酶(SK)、尿激酶(UK)为代表,无纤维蛋白特异性,用药量大,易诱发全身纤溶的激活导致严重出血;第二代溶栓剂主要包括单链尿激酶(scu-PA)、组织型纤溶酶原激活剂((?)-PA)、甲氧苯甲酰纤溶酶原激活剂(APSAC)等,一定程度的纤维蛋白特异性,但半衰期短,临床应用时仍需大(本文来源于《首届长叁角科技论坛——长叁角生物医药发展论坛论文集》期刊2004-10-01）
胡华[2]（2003）在《溶栓剂基因的克隆与载体构建及苯噻草胺与旱地植物DNA相互作用的研究》一文中研究指出通过查阅大量文献，确定开展溶栓剂基因克隆与表达及除草剂与旱地植物DNA的相互作用研究，取得了如下成果。 1．纤溶酶原可在溶纤酶激活剂作用下被激活，形成具有生物活性、可催化血栓纤维蛋白水解的纤溶酶，从而消除血栓，治疗疾病。本实验室尝试采用转基因技术，将溶栓剂基因转入植物，利用植物反应器来生产溶栓药物。本论文进行了该项目的前期工作，运用DNA重组技术，将本实验室设计的溶栓剂基因亚克隆于穿梭质粒pBI121中，构建了溶栓剂基因表达载体pBI121-zzq，并将它转化大肠杆菌DH5α。穿梭质粒pBI121含有编码卡那霉素抗性的新霉素磷酸转移酶基因，用含有Km的培养基筛选菌株。从菌株中提取的重组质粒pBI121-zzq用琼脂糖凝胶电泳检测鉴定。在200bp左右有一大小与溶栓剂基因大小相符的条带，表明大肠杆菌转化体中含有溶栓剂的亚克隆质粒。pBI121-zzq转化LBA4404用Str和Km双抗培养基筛选，经琼脂糖电泳实验证实，pBI12l-zzq在农杆菌LBA4404中成功表达，为开发新型药用植物奠定了基础。 2．用紫外分光光度法研究了玉米和狗尾草等旱地植物DNA与除草剂的作用。首先优化了提取DNA的条件。 (1) 采用SDS法提取西红柿(含玉米)DNA。影响提取西红柿(含玉米)DNA的产率和纯度的因素主要有提取液用量、酚／氯仿／异戊醇溶液用量及酚与氯仿／异戊醇的比例、氯仿／异戊醇溶液用量、异丙醇用量以及饱和KCI溶液的用量。实验结果证实，提取西红柿、玉米DNA最优条件为：细胞提取液4.0ml，饱和KCI溶液1.5ml，酚／氯仿／异戊醇溶液为样液体积的0.8倍，其中酚与氯仿／异戊醇的比值为24：25：1，氯仿／异戊醇溶液为样液体积的0.7倍，异丙醇为样液体积的0.9倍。对于富含多糖的狗尾草DNA的最优提取条件为：细胞提取液用量为4.0ml，无水乙醇与样液体积比为1：10，水浴时间为60min，NaAc溶液为1.0ml，酚／氯仿／异戊醇溶液、氯仿／异戊醇溶液和异丙醇均为样液体积的1.0倍，酚／氯仿／异戊醇溶液中酚：氯仿：异戊醇为26：23：1。经琼脂糖凝胶电泳实验证实，西红柿、玉米及狗尾草的DNA均只呈现出一个条带，表明所提取西红柿、玉米及狗尾草的DNA纯度高，没有断裂降解。 (2) 采用紫外光谱法研究了玉米DNA和狗尾草DNA与除草剂苯噻草胺的相互作用。首次揭示苯噻草胺可使DNA双链解链，抑制DNA的复制，从而杀除杂草。苯唆草胺除草的最佳浓度在5.4 x 10，mol/L一1.8 x10，mol/L范围之间;当浓度小于5.4 x 10一o1/L时，苯唾草胺对杂草的DNA没有影响;当浓度大于1.8 x10、o1/L时，苯唆草胺破坏作物的DNA，造成药害。(本文来源于《湖南大学》期刊2003-12-18）
张曼,方巧君,胡美浩[3]（1999）在《重组抗人活化血小板单链抗体-尿激酶原导向溶栓剂的基因构建及表达》一文中研究指出为了获得特异性高的导向溶栓药物,应用PCR技术,得到抗人活化血小板单抗(SZ-51)的Fab′基因片段。再用酶切方法,将Fab′中CH1基因片段替换成合成的连接分子(linker)基因,构建成单链抗体基因,并插入到人尿激酶原分泌肽基因及低分子量单链尿激酶(scu-PA-32k)之间,最终构建成重组抗人活化血小板单链抗体-尿激酶原融合蛋白基因。此融合蛋白基因在昆虫细胞中得到表达。纯化的表达产物SDS-PAGE鉴定,其分子量约为60kD,与预期值相符。其比活为9000IU/mg蛋白。ELISA法初步证明此重组的融合蛋白具有与活化血小板抗原结合特异性。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊1999年05期）
杨嘉树,蒋朋宸,茹炳根[4]（1999）在《一种导向性溶栓剂的基因构建及其在大肠杆菌中的表达》一文中研究指出以针对人活化血小板表面糖蛋白ＧＭＰ１４０的单克隆抗体ＳＺ５１的单链抗体作为导向分子，以单链尿激酶３２ｋｄ变体（ｓｃｕＰＡ３２ｋ）作为效应分子，构建了一种新型的导向性溶栓剂。通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ），分别从ＳＺ５１的Ｆａｂ片段基因中扩增出ＶＫ和ＶＨ区；从尿激酶原基因中扩增出ｓｃｕＰＡ３２ｋ基因。通过合适的ｌｉｎｋｅｒ及酶切位点，将ＶＫ，ＶＨ及ｓｃｕＰＡ３２ｋ基因相连接并装入表达载体ｐＥＴ５ａ中的ＮｄｅＩ位点，在大肠杆菌中经ＩＰＴＧ诱导表达了重组蛋白。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ检测到在８ｍｏｌ／Ｌ尿素存在下，该重组蛋白与抗尿激酶的多克隆抗体之间仍有弱的结合反应。表达产物经变复性处理和部分分离纯化后，在纤维蛋白平板上表现有较好的纤溶活性，且这种活性是通过激活纤维蛋白溶酶原为纤溶酶而实现的。重组蛋白纤溶活性的比活达到１７５００ＩＵ／ｍｇ，较好地保留了尿激酶的纤溶活性，重组蛋白的产率约每１００ｇ湿菌为１５ｍｇ。(本文来源于《北京大学学报(自然科学版)》期刊1999年04期）
刘征辉,万海英,王斌,李佩霞,茹炳根[5]（1998）在《重组抗体-尿激酶导向溶栓剂的基因构建及表达》一文中研究指出为了获得高效、高特异性溶栓药物，应用基因工程技术，成功的表达了由人源化抗人活化血小板单抗和单链尿激酶组成的抗体导向溶栓剂（ＳＺ５１Ｈｕ－ｓｃｕＰＡ）。通过基因重组ＰＣＲ方法将ｓｃｕＰＡ全长ｃＤＮＡ的Ｎ末端连接在ＳＺ５１重链恒区ＣＨ３末端，构建了含有目的蛋白融合基因的真核表达载体αｌｙｓ３０－ＳＺ５１ＶＨ／Ｈｕ－ｓｃｕＰＡ。采用脂转染法将表达载体导入分泌ＳＺ５１ＶＫ／Ｈｕ轻链的小鼠骨髓瘤细胞中，筛选出三株能持续分泌ＳＺ５１Ｈｕ－ｓｃｕＰＡ的高表达细胞株。培养上清中ＳＺ５１Ｈｕ－ｓｃｕＰＡ表达量约达５ｍｇ／Ｌ。纯化的表达产物在非还原条件下分子量为１６０ｋＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证实ＳＺ５１Ｈｕ－ｓｃｕＰＡ与亲本鼠源单抗ＳＺ５１具有相同的抗原结合特异性，酶活力为３９０００ＩＵ／ｍｇ总蛋白。上述结果表明，我们已成功地获得一个兼具抗体特异性和纤溶酶原激活特性的新型抗体导向溶栓剂，为进一步进行体内外导向溶栓研究奠定了基础。(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊1998年06期）
溶栓剂基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过查阅大量文献，确定开展溶栓剂基因克隆与表达及除草剂与旱地植物DNA的相互作用研究，取得了如下成果。 1．纤溶酶原可在溶纤酶激活剂作用下被激活，形成具有生物活性、可催化血栓纤维蛋白水解的纤溶酶，从而消除血栓，治疗疾病。本实验室尝试采用转基因技术，将溶栓剂基因转入植物，利用植物反应器来生产溶栓药物。本论文进行了该项目的前期工作，运用DNA重组技术，将本实验室设计的溶栓剂基因亚克隆于穿梭质粒pBI121中，构建了溶栓剂基因表达载体pBI121-zzq，并将它转化大肠杆菌DH5α。穿梭质粒pBI121含有编码卡那霉素抗性的新霉素磷酸转移酶基因，用含有Km的培养基筛选菌株。从菌株中提取的重组质粒pBI121-zzq用琼脂糖凝胶电泳检测鉴定。在200bp左右有一大小与溶栓剂基因大小相符的条带，表明大肠杆菌转化体中含有溶栓剂的亚克隆质粒。pBI121-zzq转化LBA4404用Str和Km双抗培养基筛选，经琼脂糖电泳实验证实，pBI12l-zzq在农杆菌LBA4404中成功表达，为开发新型药用植物奠定了基础。 2．用紫外分光光度法研究了玉米和狗尾草等旱地植物DNA与除草剂的作用。首先优化了提取DNA的条件。 (1) 采用SDS法提取西红柿(含玉米)DNA。影响提取西红柿(含玉米)DNA的产率和纯度的因素主要有提取液用量、酚／氯仿／异戊醇溶液用量及酚与氯仿／异戊醇的比例、氯仿／异戊醇溶液用量、异丙醇用量以及饱和KCI溶液的用量。实验结果证实，提取西红柿、玉米DNA最优条件为：细胞提取液4.0ml，饱和KCI溶液1.5ml，酚／氯仿／异戊醇溶液为样液体积的0.8倍，其中酚与氯仿／异戊醇的比值为24：25：1，氯仿／异戊醇溶液为样液体积的0.7倍，异丙醇为样液体积的0.9倍。对于富含多糖的狗尾草DNA的最优提取条件为：细胞提取液用量为4.0ml，无水乙醇与样液体积比为1：10，水浴时间为60min，NaAc溶液为1.0ml，酚／氯仿／异戊醇溶液、氯仿／异戊醇溶液和异丙醇均为样液体积的1.0倍，酚／氯仿／异戊醇溶液中酚：氯仿：异戊醇为26：23：1。经琼脂糖凝胶电泳实验证实，西红柿、玉米及狗尾草的DNA均只呈现出一个条带，表明所提取西红柿、玉米及狗尾草的DNA纯度高，没有断裂降解。 (2) 采用紫外光谱法研究了玉米DNA和狗尾草DNA与除草剂苯噻草胺的相互作用。首次揭示苯噻草胺可使DNA双链解链，抑制DNA的复制，从而杀除杂草。苯唆草胺除草的最佳浓度在5.4 x 10，mol/L一1.8 x10，mol/L范围之间;当浓度小于5.4 x 10一o1/L时，苯唾草胺对杂草的DNA没有影响;当浓度大于1.8 x10、o1/L时，苯唆草胺破坏作物的DNA，造成药害。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
溶栓剂基因论文参考文献
[1].颜宏利,贺艳,陆一鸣,赵专有,高远舰.膜联蛋白B1-尿激酶原导向溶栓剂的基因构建、表达及活性分析[C].首届长叁角科技论坛——长叁角生物医药发展论坛论文集.2004
[2].胡华.溶栓剂基因的克隆与载体构建及苯噻草胺与旱地植物DNA相互作用的研究[D].湖南大学.2003
[3].张曼,方巧君,胡美浩.重组抗人活化血小板单链抗体-尿激酶原导向溶栓剂的基因构建及表达[J].中国生物化学与分子生物学报.1999
[4].杨嘉树,蒋朋宸,茹炳根.一种导向性溶栓剂的基因构建及其在大肠杆菌中的表达[J].北京大学学报(自然科学版).1999
[5].刘征辉,万海英,王斌,李佩霞,茹炳根.重组抗体-尿激酶导向溶栓剂的基因构建及表达[J].生物化学与生物物理学报.1998
论文知识图
