2型猪链球菌细胞分裂蛋白GpsB的原核表达及其鉴定

论文摘要

目的利用原核表达系统诱导表达2型猪链球菌（Streptococcus suis 2,S.suis 2）分裂相关因子GpsB重组蛋白,为后续研究奠定基础。方法以S.suis 2菌株05ZYH33全基因组DNA为模板,经PCR扩增得到目的基因片段。目的基因经双酶切后连接至表达载体pET32a,转化大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）DH5α感受态细胞。重组质粒经测序鉴定正确后转化E.coli BL21感受态细胞。获得的重组表达菌经IPTG诱导表达目的蛋白。利用Ni离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。利用重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果成功构建出重组表达载体pET32agpsB,并经IPTG诱导表达出目的蛋白。重组蛋白主要存在于表达菌裂解液上清中,分子质量约30 kD,与预期大小一致。Western blot检测发现,该蛋白能被His-Tag单克隆抗体特异性识别。制备的多克隆抗体能特异性识别重组GpsB蛋白（rGpsB）。结论成功表达和纯化了rGpsB并获得了该蛋白的多克隆抗体,为进一步研究该蛋白在S.suis 2分裂过程中的作用鉴定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株
•   1.2 试剂
•   1.3 目的基因gpsB生物信息学分析
•   1.4 gpsB基因的扩增
•   1.5 表达载体的构建与鉴定
•   1.6 rGpsB的表达纯化及鉴定
•   1.7 GpsB鼠多抗血清制备及效价测定[11]
• 2 结 果
•   2.1 GpsB生物信息学分析
•   2.2 gpsB基因的扩增
•   2.3 重组质粒pET32agpsB双酶切鉴定
•   2.4 rGpsB 的诱导及表达形式鉴定
•   2.5 rGpsB的鉴定
•   2.6 GpsB鼠多抗血清效价
• 3 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 侯红芬,张会芳,胡丹,郑峰,朱旭辉,王长军,潘秀珍,曹祥荣

关键词: 型猪链球菌,原核表达,多克隆抗体

来源: 中国人兽共患病学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 南京师范大学生命科学学院,南京军事医学研究所

基金: 国家自然科学基金(Nos.81571965,1172794,81071317),江苏省自然科学基金项目(No.BK20151091),江苏省333工程科研资助项目(No.BRA2014363)~~

分类号: S852.611

页码: 201-205

总页数: 5

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