K.paraultunense角蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

论文摘要

将角蛋白降解菌Keratinibaculum paraultunense（K.paraultunense）所产角蛋白酶的粗酶液,依次通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换以及Superdex 75凝胶色谱层析等分离纯化,最终得到一种电泳纯的角蛋白酶。其纯化倍数为14.55,回收率为7.24%。SDS-PAGE分析结果表明该酶的相对分子质量约为29 KDa。酶学性质研究表明,该酶最适作用温度为80℃;最适pH为7.5,在pH 6.0～9.0范围内酶活力较为稳定;当以酪蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为4.37 mg·mL-1,Vm为14 556 U·（mg·min）-1,而当以羊毛角蛋白为底物时,该酶的动力学常数Km为15.66 mg·mL-1,Vm为2610 U·（mg·min）-1;Ca2+对酶活有明显的促进作用,但苯基甲基磺酰氟（PMSF）对酶活有较强的抑制作用。

论文目录

• 引言
• 1 材料与方法
•   1.1 材料与试剂
•     1.1.1 菌株
•     1.1.2 主要材料与化学试剂
•     1.1.3 培养基
•   1.2 仪器和设备
•   1.3 方法
•     1.3.1 角蛋白酶酶活的测定
•     1.3.2 可溶性蛋白含量的测定
•     1.3.3 角蛋白酶的分离纯化
•       （1） 硫酸铵沉淀
•       （2） DEAE-Sepharose-FF阴离子交换色谱纯化
•       （3） Superdex 75凝胶色谱高度纯化
•     1.3.4 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS-PAGE） 测定角蛋白酶的相对分子质量
•     1.3.5 角蛋白酶的酶学性质研究
•       （1） 角蛋白酶的最适温度和温度稳定性
•       （2） 角蛋白酶的最适pH值及pH稳定性
•       （3） 金属离子、抑制剂和表面活性剂对角蛋白酶酶活力的影响
•       （4） 底物特异性测定
•       （5） 角蛋白酶的动力学参数测定
• 2 结果与讨论
•   2.1 角蛋白酶的分离纯化
•   2.2 角蛋白酶酶学性质
•     2.2.1 角蛋白酶的最适温度和温度稳定性
•     2.2.2 角蛋白酶的最适pH值及pH稳定性
•     2.2.3 金属离子、抑制剂和表面活性剂对角蛋白酶酶活力的影响
•     2.2.4 底物特异性研究
•     2.2.5 角蛋白酶的动力学参数测定
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 羊希,李霞,姜河,廖学品,石碧

关键词: 角蛋白酶,分离纯化,酶学性质

来源: 皮革科学与工程 2019年03期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 四川大学生物质与皮革工程系,四川大学皮革化学与工程教育部重点实验室,四川大学制革清洁技术国家工程实验室

基金: 国家重点基础材料技术提升与产业化项目(2017YFB0308500)

分类号: TQ925.2

DOI: 10.19677/j.issn.1004-7964.2019.03.001

页码: 5-11

总页数: 7

文件大小: 1506K

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