王吉华沈忱（辽宁省辽阳市食品药品检验所111000）
【摘要】目的建立牛黄镇惊丸中牛黄含量测定的检测方法。方法采用高效液相色谱法测定牛黄中胆红素的含量。结果胆红素在0.009968～0.4984μg范围内，,进样量与峰面积线性关系良好（r=0.9999）；平均加样回收率98.4%（RSD=0.9%）。结论该方法操作简便、结果准确、重现性好，可用于牛黄镇惊丸中牛黄的含量测定。
【关键词】牛黄镇惊丸牛黄胆红素HPLC
【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）38-0136-02
【Abstract】Objective:ToestablishanmethodforthedeterminationofcalculusbovisinNiuhuangZhenJingpill.Methods:HPLCanalysiswasusedtodeterminethecontentofbilirubinincalculusbovis.Results:Thismethodhadgoodlinearityintherangeof0.009968～0.4984μg（r=0.9999）;Theaveragerecoverywas98.4%（RSD=0.9%）.Conclusion:Themethodwasshowntobeconvenient,accuratewithgoodrepeatability,soitwassuitabletodeterminethecontentofCalculusbovisinNiuhuangZhenJingpill.
【Keywords】NiuhuangZhenJingpillCalculusBovisBilirubinHPLC
牛黄为牛科动物牛的干燥胆结石，具有清心、豁痰、开窍、凉肝、息风、解毒的功效，属于贵细药材。现我国牛黄分为天然牛黄、体外培育牛黄、人工牛黄，大部分药品制剂中使用的均为人工牛黄。天然牛黄仅在极少中成药中使用，牛黄镇惊丸配方中使用的就为天然牛黄。牛黄镇惊丸质量标准为《中国药典》2010年版第一增补本，未对处方中牛黄质量进行控制。为保障其质量，本文采用HPLC法定量检测牛黄中胆红素含量，专属性强，精密度和重复性好。
1仪器与试剂
1.1仪器
色谱仪：高效液相色谱仪（日本岛津公司）包括LC-10ATvp输液泵，SPD10Avp可变波长紫外检测器，TA-130柱温箱，ANASTAR色谱数据处理系统；BP211-D电子天平。
1.2试药
乙腈为色谱纯，三氯甲烷、甲醇、磷酸、醋酸为分析纯，胆红素对照品（批号100077-200805，含量为98.5%）由中国食品药品检定研究院提供。
2方法与结果
2.1色谱操作条件及系统适用性
采用色谱柱：DimamosilC185μ250×4.6mm，流动相为乙腈-1%醋酸溶液（95:5），流速为1.0ml/min，检测波长450nm，进样量为5μl；理论板数按胆红素峰计算应不低于7000。
2.2.溶液的制备（避光操作）
2.2.1样品溶液配制：取样品适量，剪碎，混匀，取约0.15g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇-磷酸（75：25:0.18）混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率200W,频率40KHz）20min，冷却至室温，再称定重量，用上述混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.2对照品溶液配制：取胆红素对照品约适量,精密称定，加三氯甲烷制成每1ml含20μg的溶液，即得。
2.3线性关系考察
精密称取胆红素对照品20.24mg置100ml棕色量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。
精密量取对照品储备溶液0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置于10ml棕色量瓶中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，进行线性回归分析，回归方程为Y=6E+06X-1864.6,r=0.9999(n=7)，表明胆红素在0.009968～0.4984μg范围内，线性关系良好。
3.讨论
3.1供试品提取时间考察：取样品适量，剪碎，混匀，取约0.15g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇-磷酸（75：25:0.18）混合溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率200W,频率40KHz）10、20、30min，放冷，照上述方法进行测定，考察提取时间对测定结果的影响。结果表明超声提取20min，即可将样品中胆红素提取完全。
3.2流动相的选择：根据文献[3]，采用甲醇-三氯甲烷-1%醋酸体系，胆红素与样品中其他成分分离效果不理想，柱效低，采用乙腈-1%醋酸溶液（95:5），分离效果好，柱效高。
3.3结论：该方法操作简便，结果可靠，重现性好，为牛黄镇惊丸中牛黄质量的考察提供了参考方法。
参考文献
[1].《中国药典》2010年版一部.
[2].《中国药典》2010年版第一增补本.
[3].李珂、齐永秀等，HPLC法测定3种牛黄中胆红素的含量，今日药学，2010年3月第20卷第3期.
[4].黄海萍、舒毕琼，HPLC法测定牛黄解毒片中胆红素含量，中国药事，2008年第22卷第9期.