导读:本文包含了杆状病毒表达载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:杆状,病毒,载体,细胞,蛋白,疫苗,昆虫。
杆状病毒表达载体论文文献综述
荣芮,李婷婷,张玉云,顾颖,夏宁邵[1]（2019）在《昆虫杆状病毒表达载体系统在疫苗研究中的应用进展》一文中研究指出昆虫杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)已成功应用于多种蛋白的表达,并为疫苗开发提供了充足的原材料。相比其他表达系统,BEVS具有许多优势:杆状病毒专一寄生于无脊椎动物,安全性高;重组蛋白表达水平高;可对重组蛋白进行正确折迭和翻译后修饰,获得具有生物活性的蛋白;适应于多基因表达如病毒样颗粒(Virus-like particle)的复杂设计;适用于大规模无血清培养等。为了更好地理解BEVS在疫苗研究中的应用前景,文中将从BEVS的发展及其在疫苗研究中的应用等方面进行综述。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年04期）
徐国,梁海英,曾智勇,王彬,黄涛[2]（2018）在《V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建》一文中研究指出试验旨在利用真核表达系统构建V5标记的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的表达载体。采用基因工程技术将V5标签引入到PCV2 ORF2基因C末端,并将标记基因定向克隆入pFastBacHTA载体,将pFastBacHTA-ORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使用脂质体介导法将鉴定后的重组杆状病毒质粒转染于Sf9细胞中;运用间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE和Western blotting试验对Sf9细胞中V5标记Cap蛋白的表达进行验证。结果显示,本试验成功将V5标签引入到PCV2 ORF2基因末端,pFastBacHTAORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后获得了Bacmid-ORF2-V5重组杆状病毒质粒;IFA、SDS-PAGE和Western blotting试验结果显示,在Sf9细胞中能检测到重组杆状病毒V5标记的PCV2Cap蛋白,具有良好的反应原性,说明本试验成功获得一株rAcMNPV Cap-V5重组杆状病毒。试验结果为PCV2标记亚单位疫苗的研制提供一定的理论依据。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2018年07期）
唐琦,邱立鹏,李东,吴鹏,李国辉[3]（2018）在《杆状病毒表达载体的应用现状》一文中研究指出杆状病毒是一类具有囊膜的双链环状DNA病毒,主要感染无脊椎动物,在病毒生活周期中会产生两种不同形态的病毒粒子:出芽型病毒粒子(BV),主要负责细胞之间的感染;包埋型病毒粒子(ODV),主要负责虫体之间的感染。随着对杆状病毒研究的不断深入,人们对杆状病毒的应用也越来越广泛,通过对病毒基因组的改造使其成为一种新颖的真核表达载体,现已被广泛应用于蛋白生产中;其次,由于杆状病毒特有的形态,可将靶蛋白展示在病毒粒子表面,进而被应用于诸如医药、临床和生物等多个研究领域中;此外,杆状病毒不能在哺乳动物细胞中进行复制,也不会在这类细胞中增殖和扩散。因此,杆状病毒不会刺激哺乳动物产生强烈的免疫应答,也不会对它们造成功能性的损伤,这些特性使其成为一种极具应用前景的基因治疗载体,给肿瘤治疗、组织再生和靶向给药等民生领域带来福音。本文就杆状病毒在蛋白表达、表面展示和基因治疗方面的研究进行综述,为杆状病毒的分子改造和临床应用提供依据。(本文来源于《微生物学通报》期刊2018年02期）
李果[4]（2016）在《嵌合型轮状病毒与肠道病毒71型病毒样颗粒的重组杆状病毒表达载体的构建》一文中研究指出人轮状病毒(Human rotavirus, HRV)是引起婴幼儿腹泻的最主要病原体之一,几乎所有5岁以下儿童都被感染过至少一次,是造成发展中国家婴幼儿死亡的重要病因。这两种病毒严重威胁着人类健康和公共安全。这两种疾病目前尚无有效的治疗药物,使用减毒活疫苗和灭活疫苗进行免疫仍是预防和控制这两种疾病的主要措施。但是,减毒活疫苗可能会发生基因重组和毒力返强,灭活疫苗则很少甚至无法诱导产生细胞免疫,而且存在着灭活不彻底的潜在风险,使得这两种疫苗都无法达到理想的效果。因此,开发针对轮状病毒与肠道病毒71型的新型基因工程疫苗具有十分重要的意义。病毒样颗粒(Virus-like particles, VLPs)由病毒结构蛋白自我组装形成,在形态结构上与真实病毒粒子高度相似,可以高效的诱导体液免疫和细胞免疫,而且由于不含病毒核酸而具有良好的安全性,因此VLPs近年来已经成为一种理想的候选基因工程疫苗。这些发现为研发新的嵌合型轮状病毒与肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗奠定了理论基础。实验室前期研究已经证实,轮状病毒的VP2、VP6和VP7同时在Sf9细胞中表达会组装成叁层病毒样颗粒,并且具有良好的免疫效果。此外,有研究发现,轮状病毒的VP4可以帮助VLPs有效地进入肠道细胞,EV71的主要抗原VP1展示于VLPs表面可以诱导产生高水平的抗体,并具有良好的免疫保护效果。实验首先利用PCR技术扩增获得轮状病毒的VP2、VP4、VP6、VP7基因和肠道病毒71型的VP1基因,并利用融合PCR技术将EV71 VP1基因通过柔性接头与截短的RVVP2基因相融合,得到融合基因ER1,2。将测序验证正确的病毒结构基因分别克隆入转移载体pFBDM-IM和pUCDM-XIGP中,得到的重组转移载体通过Tn7和Cre-LoxP重组至杆状病毒Bacmid中,然后将重组Bacmid转染Sf9细胞获得重组病毒。重组病毒再次感染Sf9细胞72小时后用荧光显微镜进行观察,发现Sf9细胞出现明显的细胞病理变化,如细胞明显变大,细胞增殖不明显或者不增值,有细胞脱落的现象,倒置荧光显微镜下观察有较多的荧光,证实了重组杆状病毒的成功构建。提取重组杆状病毒基因组DNA并用RV和EV71病毒基因的特异性引物进行PCR鉴定,结果表明外源病毒基因已经成功重组至杆状病毒基因组中。随后用SDS-PAGE电泳和Western blot检测外源基因的表达情况,结果显示VP2、VP6、 VP7、ER1,2蛋白大小分别为104KDa、46KDa、38KDa、127KDa。蛋白条带较为单一且蛋白大小与预期一致,由此可见病毒样颗粒的相关基因已正确表达,这为以后疫苗的研究和开发奠定了基础。(本文来源于《南阳师范学院》期刊2016-11-03）
于永利[5]（2015）在《昆虫杆状病毒表达载体系统与疫苗研制的30年回顾》一文中研究指出1983年12月,一篇关于用昆虫杆状病毒感染昆虫细胞表达重组人β干扰素文章的发表,标示了杆状病毒表达载体系统(Baculovirus expression vector system,BEVS)的诞生。迄今为止,已采用BEVS表达生产了数千种重组蛋白,其中7种已被成功用于商品化人用或兽用疫苗的抗原。仅对30年来基于BEVS的疫苗研制作一论述。(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2015年04期）
欧艳梅[6]（2015）在《抗宿主细胞凋亡策略以优化杆状病毒表达载体》一文中研究指出杆状病毒表达载体利用杆状病毒极晚期基因启动子多角体基因(polh)或p10基因的启动子,能高效地表达外源蛋白。且杆状病毒-昆虫细胞表达系统能进行蛋白翻译后修饰,因此被广泛用于表达具有生物活性的蛋白质。但在实际应用中很多蛋白的产量并不理想,因此,我们希望构建一个更为高效的杆状病毒表达载体,为蛋白质结构功能的研究提供一个新型的更为有力的研究工具。本研究先敲除AcMNPV Bacmid上的几丁质酶基因(Chitinase,chiA)和组织蛋白酶基因(v-cathepsin,v-cath),同时在敲除的位点插入rpsL-AMP片段,为后续的反筛实验奠定基础。随后,将表达Sf-caspase-1全长双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)的序列构建到pBac5上,与AcMNPV Bacmid共转染Sf9细胞,得到重组杆状病毒vAcMNPV-dsCasp。结果表明,重组杆状病毒vAcMNPV-dsCasp感染细胞后会使细胞中Sf-caspase-1 mRNA的含量下降,而抑制细胞凋亡。此外,我们根据Sf-caspase-1序列分别设计了叁个shRNA(short hairpin RNA),用来干扰Sf-caspase-1基因的表达。先在pTriExGFP上分别构建了叁段表达Sf-caspase-1shRNA的基因序列,再与AcMNPV Bacmid共转染Sf9细胞,得到的重组杆状病毒vAc MNPV-124/422/783,这些重组病毒能表达sh RNA,干扰Sf-caspase-1基因,从而抑制Sf9细胞凋亡。PI染色检测Sf9细胞凋亡,结果表明124片段抑制Sf9细胞凋亡效果最明显。为了构建能表达Sf-caspase-1 shRNA的杆状病毒载体,把表达Sf-caspase-1shRNA的反向互补序列反筛到AcMNPV Bacmid骨架上构成AcMNPV Bacmid-124/422/783,并与pTriEx-Fluc共转染Sf9细胞产生重组病毒。本实验通过表达Sf-caspase-1 shRNA或全长dsRNA干扰Sf-caspase-1基因的表达,检测其抑制Sf9细胞凋亡效果。并把表达Sf-caspase-1 shRNA的反向互补序列敲入到AcMNPV bacmid骨架上,使得在表达外源蛋白的同时能够抑制Sf9细胞凋亡并延长蛋白表达时限。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
李登科,刘新生,方玉珍,潘丽,吕建亮[7]（2014）在《A型口蹄疫病毒多抗原表位杆状病毒表达载体的构建及表达》一文中研究指出为构建A型口蹄疫病毒(FMDV)多抗原表位杆状病毒表达载体,将A型FMDV上5个B细胞表位(VP1140-160aa、VP270-80aa、VP352-67aa、3B29-42aa和3D16-30aa)和4个辅助性T细胞表位(VP1200-213aa、VP420-34aa、3A21-35aa和3D346-370aa)通过人工合成的方法串联起来构建复合多表位基因B。然后将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB。将酶切和测序鉴定正确的阳性重组质粒pFastBac HTB-B转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将PCR鉴定正确的重组杆状病毒质粒利用CellfectinⅡReagent转染至Sf9细胞。通过间接免疫荧光试验和Western-blot检测表达情况。结果显示,能够得到与A型FMDV猪抗阳性血清结合的蛋白,大小约为22.3ku,与预期结果相符。结果表明,成功构建了A型FMDV多抗原表位杆状病毒表达载体,并在昆虫细胞中正确表达,为下一步蛋白纯化奠定了基础。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2014年09期）
王智权,李轶女,张志芳,易咏竹,吴润[8]（2014）在《用杆状病毒表达载体在家蚕中表达犬γ干扰素及产物的抗病毒活性》一文中研究指出利用杆状病毒表达载体在家蚕5龄幼虫体内高效表达犬γ干扰素(CaIFNγ)。将优化、合成的犬γ干扰素基因克隆到杆状病毒转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游,与orf1629基因缺损的亲本病毒Bm-Bacmid DNA共转染BmN细胞进行同源重组,将获得的重组病毒接种家蚕5龄幼虫。Western blot检测感病幼虫的血淋巴中有分子质量约19 kD的目的蛋白质条带。用微量细胞病变抑制法在MDCK/VSV-GFP系统测定重组犬γ干扰素具有抗病毒活性,效价>5×106U/mL。研究结果为进一步研究犬γ干扰素的抗病毒活性和利用家蚕生物反应器生产犬γ干扰素奠定了一定的基础。(本文来源于《蚕业科学》期刊2014年03期）
刘晖,王鑫,蔡辉霞,曹建平,沈玉娟[9]（2013）在《抗菌肽attacin重组杆状病毒表达载体构建》一文中研究指出抗菌肽广泛存在于动、植物中,在生物体内发现的抗菌肽已超过2 000种,昆虫抗菌肽已多达200多种[1],其中一些抗菌肽的基因、结构、生物学效应及作用机制已经阐明。抗菌肽抗菌谱广,对肿瘤细胞、病毒、真菌等均有杀伤作用,甚至对弓形虫等原虫也有抑制作用[2],但对正常的真核细胞无毒或低毒,且不易产生耐药性[3]。因此抗菌肽有望成为一类新型抗菌、抗肿瘤和抗寄生虫药物。抗菌肽因成分复杂,提取、纯化及化学合成昂贵,且不易标准化,是制约其商品化的主要问题,因此通过基因工程规模生产备受关注。基因工程规模生产抗菌肽,稳定、高效的表达系统是关键。昆虫细胞-杆状病毒表达系统作为一种高效、大容量、表达产物具有生物活性(本文来源于《中国公共卫生》期刊2013年12期）
王安平,朱善元,吴双,王永娟,左伟勇[10]（2013）在《禽腺联病毒VP基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建》一文中研究指出根据禽腺联病毒VP基因序列设计引物,扩增出VP基因,将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac1,经酶切鉴定筛选出阳性重组转移载体pFastBac-VP,并对阳性质粒进行测序及序列分析;将pFastBac-VP转化到DH10Bac感受态细胞中,与Bacmid发生位点特异性转座作用,经抗性和蓝白斑筛选,获得含VP基因的重组穿梭载体rBacmid-VP。研究结果为进一步在昆虫细胞中表达VP基因,开发研制重组禽腺联病毒载体奠定了基础。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2013年08期）
杆状病毒表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
试验旨在利用真核表达系统构建V5标记的猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的表达载体。采用基因工程技术将V5标签引入到PCV2 ORF2基因C末端,并将标记基因定向克隆入pFastBacHTA载体,将pFastBacHTA-ORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,使用脂质体介导法将鉴定后的重组杆状病毒质粒转染于Sf9细胞中;运用间接免疫荧光试验(IFA)、SDS-PAGE和Western blotting试验对Sf9细胞中V5标记Cap蛋白的表达进行验证。结果显示,本试验成功将V5标签引入到PCV2 ORF2基因末端,pFastBacHTAORF2-V5重组转移载体转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞后获得了Bacmid-ORF2-V5重组杆状病毒质粒;IFA、SDS-PAGE和Western blotting试验结果显示,在Sf9细胞中能检测到重组杆状病毒V5标记的PCV2Cap蛋白,具有良好的反应原性,说明本试验成功获得一株rAcMNPV Cap-V5重组杆状病毒。试验结果为PCV2标记亚单位疫苗的研制提供一定的理论依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
杆状病毒表达载体论文参考文献
[1].荣芮,李婷婷,张玉云,顾颖,夏宁邵.昆虫杆状病毒表达载体系统在疫苗研究中的应用进展[J].生物工程学报.2019
[2].徐国,梁海英,曾智勇,王彬,黄涛.V5标记的猪圆环病毒2型Cap蛋白重组杆状病毒表达载体的构建[J].中国畜牧兽医.2018
[3].唐琦,邱立鹏,李东,吴鹏,李国辉.杆状病毒表达载体的应用现状[J].微生物学通报.2018
[4].李果.嵌合型轮状病毒与肠道病毒71型病毒样颗粒的重组杆状病毒表达载体的构建[D].南阳师范学院.2016
[5].于永利.昆虫杆状病毒表达载体系统与疫苗研制的30年回顾[J].微生物学免疫学进展.2015
[6].欧艳梅.抗宿主细胞凋亡策略以优化杆状病毒表达载体[D].西北农林科技大学.2015
[7].李登科,刘新生,方玉珍,潘丽,吕建亮.A型口蹄疫病毒多抗原表位杆状病毒表达载体的构建及表达[J].中国兽医科学.2014
[8].王智权,李轶女,张志芳,易咏竹,吴润.用杆状病毒表达载体在家蚕中表达犬γ干扰素及产物的抗病毒活性[J].蚕业科学.2014
[9].刘晖,王鑫,蔡辉霞,曹建平,沈玉娟.抗菌肽attacin重组杆状病毒表达载体构建[J].中国公共卫生.2013
[10].王安平,朱善元,吴双,王永娟,左伟勇.禽腺联病毒VP基因的克隆及杆状病毒表达载体的构建[J].江苏农业科学.2013
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