基于RNA干扰抗病毒免疫的小分子化合物研究

论文摘要

RNA干扰（RNAi）是一种在进化上保守的转录后基因沉默机制,在真菌、植物、无脊椎动物和哺乳动物中均起到抗病毒天然免疫作用,这就为开发以增强RNAi为靶标的抗病毒药物提供了新的思路。之前的研究发现一种已获得FDA批准的抗生素-依诺沙星（Enoxacin）具有RNAi增强活性。在此基础上,我们发现Enoxacin处理能显著抑制寨卡病毒（ZIKV）与DENV（DENV）在埃及伊蚊Aag2细胞中的复制与感染,并且Enoxacin的抗病毒效果是通过增强细胞中RNAi抗病毒免疫来实现的。本文研究了具有增强RNAi活性的小分子化合物的抗病毒活性及机制,通过增强RNAi达到抗病毒效果。在本研究中,感染ZIKV或DENV的Aag2细胞,在用Enoxacin处理之后,ZIKV和DENV的RNA复制量明显下降,说明在Aag2细胞中,Enoxacin抑制ZIKV和DENV感染。在293T细胞中进行Enoxacin增强RNAi机制研究发现,Enoxacin增强RNAi并不依赖Dicer切割活性,而是通过促进TRBP与siRNA结合增强RNAi。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 研究背景
•   1.昆虫天然免疫研究概况
•     1.1 宿主识别病原
•     1.2 Toll通路
•       1.2.1 Toll通路激活
•       1.2.2 Toll通路下游NF-κB类似因子
•       1.2.3 Toll通路调控
•       1.2.4 Toll样受体（Toll like receptors，TLRs）
•     1.3 Imd通路
•       1.3.1 Imd通路的激活
•       1.3.2 Imd通路的调控
•       1.3.3 Toll通路和Imd通路比较
•     1.4 RNA干扰
•       1.4.1 RNAi激活
•       1.4.2 Dicer
•       1.4.3 Argonaute
•       1.4.4 Loquacious
•       1.4.5 R2D2
•     1.5 昆虫中病毒与宿主的相互作用
•       1.5.1 果蝇与病毒的相互作用
•       1.5.2 蚊子与病毒的相互作用
•   2.小分子药物抗病毒研究概况
•     2.1 抗病毒小分子药物的应用
•     2.2 Enoxacin研究现状
•   3. 虫媒病毒研究现状
•     3.1 登革病毒
•     3.2 寨卡病毒
• 第二章 Enoxacin增强RNAi抗病毒研究
•   1.引言
•   2.材料与方法
•     2.1 实验材料
•       2.1.1 仪器
•       2.1.2 耗材
•       2.1.3 试剂盒
•       2.1.4 试剂
•       2.1.5 酶和抗体
•       2.1.6 溶液及其配方
•       2.1.7 质粒、细胞及技术性服务
•     2.2 实验方法
•       2.2.1 质粒构建
•       2.2.2 重组蛋白的表达与纯化
•       2.2.3 凝胶阻滞实验
•       2.2.4 Western blot
•       2.2.5 Northern blot
•       2.2.6 RNA免疫共沉淀（RNA-IP）
•       2.2.7 抽提RNA
•       2.2.8 荧光定量PCR
•       2.2.9 细胞活力测定
•   3.实验结果
•     3.1 ZIKV和DENV感染Aag2细胞
•     3.2 Enoxacin的细胞毒性检测
•     3.3 Enoxacin在Aag2细胞中抑制ZIKV和DENV感染
•     3.4 Enoxacin增强RNAi
•     3.5 Enoxacin增强RNAi并不依赖Dicer切割活性
•     3.6 TRBP及PACT表达载体构建
•     3.7 Enoxacin通过促进TRBP与siRNA结合增强RNAi
•   4.结论
•   5.讨论
• 参考文献
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 吕宝

导师: 周溪

关键词: 小分子化合物,抗病毒药物

来源: 武汉大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 武汉大学

分类号: Q939.91

总页数: 63

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