1.湖南吉首大学医学院，湖南吉首416000；2.湖南省吉首大学医学院第一附属医院儿科，湖南吉首416000
摘要：目的比较流感病毒快速抗原检测方法（荧光免疫层析法）与RTPCR检测方法在儿童早期流感病毒检测中的诊断价值。方法采用荧光免疫层析法对2016年4月-2017年1月收集的800份流感样患儿标本进行流感病毒快速抗原检测，并对其中170份进行RTPCR检测从而验证快速抗原检测方法的正确率。结果荧光免疫层析方法检测到样本中甲型流感病毒阳性38例，乙型流感病毒45例，RTPCR法检测到甲型流感病毒40例，乙型流感病毒48例，荧光免疫层析法对甲型流感病毒与乙型流感病毒的诊断灵敏度分别为95.0%,93.8%；特异度分别为100.0%,100.0%；耗时30min，明显少于RTPCR法的3h。结论荧光免疫层析法与RTPCR法的一致性较好，可用于儿童早期流感病毒的诊断。
关键词：流感；荧光免疫层析法；儿童；快速检测
Fluorescenceimmunochromatographyandreal-timeRTPCRinearlydiagnosisofchildhoodinfluenza
YANYRong1SHIMin1,2LUOJia-Shun1
1.SchoolofMedicine,JishouUniversity,Hunan,Jishou416000,China;2.DepartmentofPediatrics,theFirstAffiliatedHospitalofJishouUniversityMedicalCollege,HunanProvince,Jishou416000,China
Abstract:ObjectiveTocomparethediagnosticvalueofinfluenzavirusrapidantigendetectionmethod(fluorescenceimmunochromatography)andRTPCRdetectionmethodinearlychildhoodinfluenzavirusdetection.MethodsFluorescenceimmunochromatographywasusedtodetecttherapidantigendetectionof800influenza-infectedchildrencollectedfromApril2016toJanuary2017,and170ofthemweretestedbyRTPCRtoverifythecorrectmethodofrapidantigendetection.rate.ResultsFluorescenceimmunochromatographydetected38casesofinfluenzaAviruspositiveand45casesofinfluenzaBvirus.40casesofinfluenzaAvirusand48casesofinfluenzaBvirusweredetectedbyRTPCR.ThediagnosticsensitivitiesofinfluenzaAandinfluenzaBviruseswere95.0%and93.8%,respectively;thespecificitywas100.0%and100.0%,respectively;thetimewas30min,whichwassignificantlylessthan3hofRTPCR.ConclusionFluorescenceimmunochromatographyisconsistentwithRTPCRandcanbeusedforthediagnosisofearlychildhoodinfluenzavirus.
Keywords:influenza;fluorescenceimmunochromatography;children;rapiddetection
流行性感冒（influenza，简称流感），是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。季节性流感病毒分为甲型和乙型，其中甲型分为甲1型（H1N1）和甲3（H3N2），乙型分为B/Yamagata（BY）和B/Victoria系（BV）。根据国家卫计委信息显示，目前我国三种型别的流感病毒同时流行，包括H1N1、H3N2和乙型BY系，以乙型BY系为主。流感病毒的易变性和传播速度快给流感的诊断和防控造成很大的困难，精确而又快速的诊断对疾病的防控至关重要[1]。儿童是流感的高发人群以及重症病例的高危人群，在流感流行季节，可有超过40%的学龄前儿童及30%的学龄儿童罹患流感，可导致较高的死亡率，并可能造成沉重的社会负担，因此临床上需要快速、操作简便、准确和适用于临床的流感病毒病原诊断方法，以便对出现流感样症状的患儿及早做出正确的病原诊断，采取恰当的治疗方案，这足以说明流感病毒快速抗原检测对于儿童早期流感病毒诊断的重要性。目前常见的流感病毒实验室检测主要包括病毒抗原检测、核酸检测、血清学检测法和病毒培养等，现阶段国家疾病预防控制中心推荐的流感病毒早期诊断方法主要为核酸检测法和病毒抗原检测法[2]。本文对荧光免疫层析法和RTPCR法进行比较，从而验证了荧光免疫层析法检测儿童早期流感病毒的特异性、灵敏度，明确了其在早期临床中的诊断价值。
1资料与方法
1.1研究对象
收集2016年4月—2017年1月湘西州人民医院儿科住院期间（0—12岁）疑似流感样病例患儿共800例，其中男性454例，女性346例，行流感病毒快速抗原检测，同时对其中的170例样本进行RTPCR检测。
1.2主要试剂与仪器
本研究中采用的快速检测试剂为美国Quidel公司的SofiaInfluenzaA+BFIA,配套Sofia荧光免疫分析仪，利用免疫层析原理检测鼻咽部拭子标本中甲、乙型流感病毒抗原。
1.3荧光免疫层析法检测
对疑似流感样病例患儿采集鼻咽拭子，将其内容物溶解于试剂管后静置大约1min，取样120uL至测试条样本孔中，运用免疫分析仪检测。检测试
剂为美国Quidel公司的SofiaInfluenzaA+BFIA（甲/乙型流感病毒抗原检测试剂盒）及其配套的Sofia荧光免疫分析仪。
1.4RTPCR检测方法参照郭纯等[2]文献中所用的方法。
1.5统计学分析
采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1荧光免疫层析法检测不同年龄段及不同性别患儿的感染情况
对800例疑似流感样患儿标本进行荧光免疫层析法检测，结果甲型流感病毒阳性患儿210例，其中男119例，女91例，差异无统计学意义（χ2=3.733，P=0.625）；<6个月患儿46例，6个月-1岁患儿68例，1岁-6岁患儿61例，6岁-12岁患儿35例，差异有统计学意义（χ2=26.076，P=0.028）；乙型流感病毒阳性患儿301例，其中男185例，女116例，差异无统计学意义（χ2=15.817，P=0.101）<6个月患儿78例，6个月-1岁患儿105例，1岁-6岁患儿77例，6岁-12岁患儿41例，差异有统计学意义（χ2=38.036，P=0.012），不管是甲型流感还是乙型流感，1岁以下患儿的感染率都是最高的，随着年龄的增加，感染率逐渐降低。
见表1:
2.2荧光免疫层析法检测与real-timeRTPCR法检测结果，对800例疑似流感样患儿标本进行荧光免疫层析法检测，并对其中170例进行RTPCR法检测，流感病毒检测结果两种方法之间差异均无统计学意义（P>0.05）。
见表2。
2.3两种流感病毒检测方法检测性能的分析荧光免疫层析法和RTPCR法的灵敏度和特异度相近，但荧光免疫层析法检测用时仅30min明显少于RTPCR法用时的3h，170例标本中，免疫荧光层析法检测出甲型流感病毒38例，乙型流感病毒45例，余阴性。阴性标本中，经RTPCR法检测出2例甲型流感病毒，3例乙型流感病毒，其他检测结果均与RTPCR法检测结果一致，甲型流感病毒检测符合率为98%,乙型流感病毒检测符合率为97%。
见表3
3讨论
在全球的感染性疾病中，流感算是传染性比较强的感染性疾病之一。流感病毒的表面有血凝素和神经氨酸酶，这两种物质极易发生变异，所以即使接种了流感疫苗的人群也有可能感染新型流感病毒，并造成新的流行。目前流感的诊断主要从两个方面考虑，一是临床诊断，二是实验室诊断。但是由于流感病毒的亚型众多，毒力差别很大，所以临床表现也千差万别，高致病性流感病毒很难与其他类似症状的传染病区别。而且流感的临床症状和病理变化会因人的年龄、病程长短、并发症及感染毒株毒力等不同而有所不同，可能缺乏特征性症状和剖检变化，这给流感的诊断和防治带来极大的困难。因此，单靠临床诊断常常难以定性，实验室诊断是确诊流感的唯一有效途径[4-5-6]。至今仍认为病毒分离培养是诊断流感的金标准，但此法需要进行细胞或鸡胚分离培养，耗时长，一般为3-7天左右。核酸检测法需对病毒核酸进行提取、逆转录和目的基因的扩增及检测，并且需要在符合条件的实验室进行，一般耗时3小时左右。ELISA法易受加样等诸多因素影响，且操作步骤多，已被新方法逐渐替代。胶体金法显色需较高浓度的标记物，在病毒滴度较低时容易出现假阴性[7-8]。因此流感病毒早期抗原诊断非常重要，及时确诊有利于正确的治疗。
据粗略统计，在全世界范围内，每年有大约有50万人死于流感，以儿童居多，我国疾病预防控制中心2001-2003年的监测报告显示，各年龄阶段流感样疾病的感染，5岁以下儿童感染占第一位（43%-65%）[9-10]。这么多年来儿童感染流感病毒的比率一直居于首位，本研究采用的荧光免疫层析法，受抗原变异影响小，反应了对于早期流感病毒诊断具有较好的覆盖面。本研究通过对不同年龄阶段患儿的流感感染率进行分析发现，不同年龄段患儿流感感染率明显不一样，其中1岁以下婴儿感染率最高，达到了68.1%（297/436)，感染率随着年龄的增长反而逐渐减低，这是由于婴儿机体免疫力低下，属于流感病毒易感人群，因此对于该年龄阶段患儿流感的监测极其重要。
本研究所采用的新型流感病毒快速测试剂盒（荧光免疫层析法），与real-timeRTPCR法相比，荧光免疫层析法检测甲型流感病毒的灵敏度为95%，特异度为100%，检测乙型流感病毒的灵敏度为93%，特异度为100%，差异无统计学意义，这与国外报道的荧光免疫层析法灵敏度及特异性较好的结果一致。但是两种方法在检测耗时方面相差明显，荧光免疫层析法检测耗时30min，而RTPCR法检测耗时大约3h左右，且RTPCR法技术要求高，需特定设备。而荧光免疫层析法操作简便，耗时短，价格低廉，准确率高，因此采用荧光免疫层析法检测早期流感病毒，在时间上有明显的优势，更加适用于流感病毒的早期筛查，从而采取针对性治疗。
[参考文献]
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