导读:本文包含了华蟾毒精论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,远华,凋亡,乳腺癌,蟾酥,树突,内酯。
华蟾毒精论文文献综述
曹勤洪,吴震峰,吴晓宇,陈彻,姚学权[1]（2019）在《华蟾毒精对人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞的放疗增敏作用》一文中研究指出目的探讨华蟾毒精对人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞的放疗增敏作用。方法选用SW-480、HT-29、HCT-116这3种人结直肠癌细胞株,细胞经单纯放疗和联合药物处理24 h、48 h、72 h后CCK8法检测细胞增殖,并于处理后48 h流式细胞仪测定细胞周期和凋亡。结果与单独放疗作用相比,华蟾毒精和放疗联合应用能明显抑制人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞增殖,同时诱导和促进人结直肠癌细胞的凋亡发生,调整细胞周期的变化。结论华蟾毒精可以增加人结直肠癌SW-480、HT-29、HCT-116细胞的放疗敏感性,提高放疗对人结直肠细胞的放射治疗效果。(本文来源于《中国肿瘤外科杂志》期刊2019年05期）
史磊,张耀勇,田爱霞[2]（2018）在《华蟾毒精抑制人肝癌细胞株增殖、促凋亡作用及机制探讨》一文中研究指出目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡作用,并探讨其机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实验组3(浓度为100μmol/L华蟾毒精处理)和对照组(加等体积的生理盐水),培养24h、48h后采用MTT法和流式细胞术检测对照组和实验组肝癌细胞HepG2增殖抑制率和凋亡率。培养48h后荧光定量PCR检测AKT、mTOR、Caspase3、Bax和Bcl-2 m RNA表达量,免疫印迹法检测Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:培养24h、48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞增殖抑制率均显着高于对照组(P<0.05),且实验组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);培养24h、48h实验组1、实验组2和实验组3细胞凋亡率均显着高于对照组(P<0.05),实验组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);培养48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞AKT、mTOR、Bcl-2 m RNA表达量与对照组相比均显着降低(P<0.05),Bax和Caspase-3 m RNA表达量均显着增加(P<0.05),且实验组Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达与m RNA表达结果趋势一致。结论:华蟾毒精能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并促进其凋亡,作用机制可能与通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,调控AKT/mTOR信号通路有关。(本文来源于《中西医结合肝病杂志》期刊2018年04期）
高玉雪,曹珍,吕世军,朱学涛,李峰[3]（2018）在《远华蟾毒精对体外乳腺癌4T1细胞上皮间质转化的影响》一文中研究指出目的观察远华蟾毒精对乳腺癌细胞4T1迁移、侵袭及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,并研究其相关机制。方法将鼠乳腺癌细胞系4T1细胞与不同浓度远华蟾毒精(0、0.05、0.1、0.5、1、1.25和1.5μg/ml)分别培养24h后,MTT试验检测远华蟾毒精对4T1增殖活性的影响;将实验分为对照组(0μg/ml)和实验组(0.05、0.5μg/ml),细胞划痕实验和Transwell实验检测对照组(0μg/ml)和实验组(0.05、0.5μg/ml)对细胞迁移、侵袭能力的影响;免疫荧光检测对照组(0μg/ml)和实验组(0.5μg/ml)上皮间质转化相关蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维链接蛋百(Fibronectin)相关蛋白的变化;蛋白质印迹法检测对照组(0μg/ml)和实验组(0.05、0.5μg/ml)上皮间质转化相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Fibronectin、转录因子Snail以及PI3k/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR表达的变化。结果MTT试验结果显示,低浓度远华蟾毒精(0、0.05、0.1、0.5和1μg/ml)对4T1增殖无抑制作用,高浓度远华蟾毒精(1.25和1.5μg/ml)对4T1增殖有抑制作用;细胞划痕实验结果显示,对照组与实验组细胞迁移率差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell迁移实验结果显示,对照组与实验组穿至下室的细胞数差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验结果显示,对照组与实验组穿至下室的细胞数差异均有统计学意义(P<0.05);免疫荧光结果显示,实验组与对照组相比,E-cadherin表达增强,Vimentin和Fibronectin表达减弱(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,E-cadherin表达上调,Vimentin和Fibronectin表达下调(P<0.05);转录因子Snail表达下调(P<0.05);PI3k/Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-Akt、p-mTOR表达下调(P<0.05)。结论远华蟾毒精通过Akt/mTOR/Snail信号通路抑制乳腺癌的迁移、侵袭及上皮-间质转化,为远华蟾毒精的临床应用提供了理论依据。(本文来源于《西部医学》期刊2018年06期）
朱玲[4]（2018）在《华蟾毒精诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制研究》一文中研究指出目的:本实验旨在观察华蟾毒精(Cinobufagin,CBF)对人乳腺癌MCF-7细胞株的生长影响,并研究探讨其可能的分子作用机制。方法:常规体外培养人乳腺癌MCF-7细胞株,取指数生长期的细胞传代24 h后分别加入不同浓度(0.1,0.2,0.4,0.8和1.6μM)的CBF进行处理,分别继续培养24,48,72 h后,用CCK-8法检测细胞增殖活性,紫杉醇(0.02,0.04,0.08,0.16和0.32μM)作为阳性药物对照组,同时设置阴性对照组(空白组);不同浓度(0,0.2,0.4和0.8μM)的CBF作用于MCF-7细胞48 h后,Hoechst 33258染色下,通过荧光显微镜观察MCF-7细胞的形态并分析凋亡情况;不同浓度(0,0.2,0.4和0.8μM)的CBF作用于MCF-7细胞48 h后,Annexin V-APC/7-AAD双染法下,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,PI单染下,流式细胞仪分析细胞周期;不同浓度(0,0.2,0.4和0.8μM)的CBF作用于MCF-7细胞48 h后,实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测Bax和Bcl-2基因表达变化情况,Western-blot试验检测Bax和Bcl-2蛋白表达变化情况。结果:CCK-8试验结果表明CBF可以抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05),其24,48,和72 h的IC_(50)(半抑制浓度)分别为0.94,0.44和0.22μM,紫杉醇对照组MCF-7细胞24,48,和72h的IC_(50)分别为0.20,0.08和0.02μM;Hoechst 33258染色后荧光显微镜下观察,可见空白对照组为均匀弥散的蓝色荧光,而药物组细胞呈现明显不均一的亮蓝色荧光,提示CBF作用组MCF-7细胞发生了凋亡;Annexin V-APC/7-AAD双染法后,流式细胞仪所测0.2,0.4和0.8μM药物组凋亡细胞百分比分别为22.94%、50.68%和68.29%,而空白对照组凋亡细胞百分比为5.87%,结果表明CBF明显诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05);PI单染后,流式细胞仪分析0.2,0.4和0.8μM药物组G1细胞百分比分别为49.11%,57.54%和63.75%,而空白对照组为39.45%,提示CBF作用后的MCF-7细胞呈现G1期阻滞;实时荧光定量PCR法和Western-blot试验显示CBF作用于MCF-7细胞48h后Bax基因和蛋白表达上升,Bcl-2基因和蛋白表达下降,并呈浓度依赖性,且Bax/Bcl-2比例逐渐升高(P<0.05)。结论:CBF能抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖并使细胞呈现G1期阻滞,具有时间和浓度依赖性;CBF能促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,并呈浓度依赖性,其作用机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2表达有关。CBF可能是一种潜在的以Bcl-2家族为作用靶点的抗肿瘤活性物质。(本文来源于《皖南医学院》期刊2018-05-01）
温丽敏[5]（2018）在《华蟾毒精诱导心肌细胞凋亡/自噬心脏毒性研究》一文中研究指出研究背景蟾酥是具有应用和开发前景的一味中药,其药理作用明确,但因其所含成分复杂,作用机制多样,主要有效成分蟾酥配基已明确具有心脏毒性,导致其在临床使用时安全剂量范围较小,在临床应用中屡有中毒、过敏等报道,其中以心血管不良事件发生率较高,这很大程度的限制了蟾酥作为药物使用的开发与临床应用。蟾酥的心脏毒性可能与其药理活性成分蟾蜍甾烯类物质化学成分结构与洋地黄类似有极大关系。作为蟾酥主要有效成分成分之一的华蟾毒精,其功效被逐一阐明,临床具有多方面的功效而极具作为新药开发的价值,目前研究主要集中在其强心作用、抗肿瘤及麻醉镇痛作用等药理作用,而其毒理作用、毒代动力学及其在体内的分布、吸收、代谢等研究相对较缺乏。如何减轻其毒性作用,发挥最大药用价值值得我们深入探讨研究。研究目的华蟾毒精与蟾酥具有相似的药理活性,因此具有作为新药开发的价值。本实验通过提取原代心肌细胞构建体外实验模型,观察华蟾毒精对原代心肌细胞是否具有毒性,以及从自噬及凋亡角度探讨华蟾毒精对心脏的毒性作用及其相关机制。研究方法1.采用断头法取乳鼠心脏,双酶消化法合并差速贴壁法获取纯度较高的原代心肌细胞,台盼蓝染色检测细胞存活率。显微镜下观察并记录细胞生长状态及搏动次数,采用MTT法对心肌细胞进行生长曲线检测,免疫荧光法鉴定心肌细胞纯度。2.华蟾毒精作用心肌细胞一定时间,采用MTT法检测心肌细胞存活率;HE法观察心肌细胞形态变化;DAPI荧光染色检测观察细胞凋亡情况;荧光探针JC-1检测细胞凋亡线粒体膜电位变化;Western Blot法检测Bcl-2蛋白表达。3.MDC染色及吖啶橙染色检测华蟾毒精对酸性自噬泡的生成的影响;Western Blot法检测LC3蛋白在华蟾毒精作用不同时间及不同浓度的表达;MTT法检测自噬抑制剂对心肌细胞活性的影响。研究结果1.原代心肌细胞的分离与培养分离的原代心肌细胞存活率约为70%-85%,原代心肌细胞占总细胞比例较大且呈多种不规则形态。培养12h后可观察到细胞贴壁;36h后细胞出现不规则搏动;48h细胞相互交联呈簇状,细胞搏动增多;72h后簇团细胞搏动一致,以50-110次/min搏动。2.华蟾毒精诱导心肌细胞凋亡用不同浓度华蟾毒精处理原代心肌细胞24h,显微镜下可观察到随着浓度增大,细胞死亡数量增多,细胞出现空泡及变形;HE染色可观察到细胞核出现碎裂及皱缩;MTT结果表明,一定浓度的华蟾毒精可降低原代心肌细胞存活率。DAPI染色可观察到15μM浓度以上华蟾毒精处理的原代心肌细胞出现核裂解,可见凋亡小体的形成。线粒体膜电位检测可见华蟾毒精处理组心肌细胞红橙色荧光明显强于空白组。Western blot法结果显示抗凋亡蛋白Bcl-2表达较空白组表达下调(P<0.01)。3.华蟾毒精诱导心肌细胞自噬AO及MDC染色结果提示,华蟾毒精可诱导原代心肌细胞酸性自噬泡及自噬溶酶体生成增加,Western blot法结果显示自噬关键蛋白LC3II蛋白表达上调,且在4小时上调达到高峰(P<0.05),随后表达下调;华蟾毒精诱导原代心肌细胞发生自噬的程度也随浓度增大而增大。研究结论综上所述,华蟾毒精对原代心肌细胞具有毒性作用,其毒性作用呈浓度依赖性,即小浓度无明显作用,较大浓度则降低细胞存活率,抑制细胞增殖。华蟾毒精可通过线粒体途径诱导原代心肌细胞发生凋亡,在表现出心脏毒性作用时可诱导心肌细胞自噬的发生。华蟾毒精在体外水平表现出了潜在的心脏毒性。(本文来源于《广州中医药大学》期刊2018-05-01）
童伟,李婷婷[6]（2018）在《高效液相色谱法检测华蟾素注射液中蟾毒灵、华蟾毒精及酯蟾毒配基限量》一文中研究指出目的采用HPLC法对华蟾素注射液中蟾毒灵、华蟾毒精及酯蟾毒配基进行限量检测。方法 Sunfire C18色谱柱,流动相为乙腈-水(50:50),柱温30℃,检测波长296nm。结果 9批样品在与蟾毒灵、华蟾毒精及酯蟾毒配基对照品色谱峰相同的保留时间处,未出现色谱峰。结论方法准确、快速、重现性好,可用于华蟾素注射液限量检测。(本文来源于《江西化工》期刊2018年01期）
曹珍,高玉雪,徐金媛,王茹燕,李峰[7]（2017）在《远华蟾毒精对小鼠乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及机制》一文中研究指出目的探讨远华蟾毒精对小鼠乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及其机制。方法将培养好的小鼠乳腺癌细胞4T1随机分为A、B、C、D组。A组常规培养;B、C、D组于缺氧条件下(37℃、5%CO、95%N2)进行培养,同时C、D组分别加入0.1、0.5μmol/L远华蟾毒精进行培养。培养0、6、12、24 h采用划痕实验检测细胞迁移能力(迁移距离),用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力(穿膜细胞数),用Western blotting法检测细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)蛋白表达。结果不同时点细胞迁移距离D组<C组<B组<A组,穿膜细胞数D组<C组<B组<A组,HIF-1α、MMP-9、p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量D组<C组<B组<A组,以上指标两组间比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论远华蟾毒精可能通过PI3K/AKT通路降低小鼠乳腺癌细胞HIF-1α、MMP-9的表达,从而抑制细胞侵袭。(本文来源于《山东医药》期刊2017年37期）
丁宇霜[8]（2017）在《华蟾毒精、土木香内酯诱导人结肠癌细胞凋亡及其机制的研究》一文中研究指出结直肠癌是严重威胁人类健康的常见恶性肿瘤。在美国,结直肠癌的发病率占所有癌症的第四位,死亡率占第二位。不同于西方一些国家结直肠癌的发病率和死亡率逐步降低,我国人群结直肠癌的发病率逐年升高并呈显年轻化趋势。因此研发高效低毒的抗癌新药是降低结直肠癌死亡率的关键。近年来,分子靶向药物成为治疗癌症的有效手段,与传统放化疗相比,分子靶向治疗优势明显。分子靶向药物针对性地靶向肿瘤细胞,对正常组织影响小,可减轻毒副反应、提高治疗效率。目前,虽然靶向药物的研究取得了一定的进展,但同时也遇到很多困难,例如由于细胞内的信号传导实际为多靶点、多环节的调控过程,单靶点药物只针对某一条细胞通路,肿瘤细胞最终会发生耐药,导致肿瘤复发、转移。因此,寻找有效的肿瘤特异性靶点并研发新药,特别是具有多靶点、多作用机理的抗肿瘤药物可能成为攻克癌症的有效途径。肿瘤细胞的新陈代谢速率高于正常细胞,因而承受着更大的氧化应激压力。在肿瘤发展过程中,细胞内的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平明显上升。ROS可引起上百种类型的DNA氧化损伤,其中氧化核苷酸池中或DNA单链中的脱氧叁磷酸鸟苷(d GTP)及脱氧叁磷酸腺苷(d ATP)生成8-羟基脱氧叁磷酸鸟苷(8-oxoguanine,8-oxo G)及2-羟基-2-脱氧叁磷酸腺苷(2-OH-d ATP)是最常见的DNA氧化修饰,二者插入DNA中后进行的碱基切除修复和错配修复可导致DNA单链大量缺口和断裂,继而引起DNA双链断裂、DNA损伤、细胞凋亡。肿瘤细胞为解决自身高水平ROS,研究发现多种肿瘤细胞均高表达一种核苷酸焦磷酸酶——MTH1(mut T homolog 1),其表达量与肿瘤的恶性程度正相关。MTH1蛋白是Mut T同源酶,分布于细胞的线粒体和细胞核中,参与DNA损伤修复过程。MTH1能够高效水解8-oxo G及2-OH-d ATP,从而防止氧化的核苷酸掺入DNA双链。研究发现,肿瘤细胞内的MTH1充当了氧化核苷酸“清洁工”的作用,是维持肿瘤细胞生存、促进肿瘤发展所必须的,利用si RNA干扰MTH1正常功能后肿瘤细胞DNA受损、细胞凋亡。值得注意的是,正常细胞的存活并不依赖于MTH1的作用,敲除MTH1对正常细胞无影响。基于以上研究结果,我们可以得出以下推论:升高肿瘤细胞ROS水平或者靶向抑制MTH1酶活性均可以使肿瘤细胞的氧化应激增大,插入DNA中的氧化核苷酸增多,造成DNA损伤、肿瘤细胞凋亡。中药抗肿瘤具有悠久历史,但多数中药成分复杂,包含无效成分甚至有毒成分,因而提取其有效成分并进一步加以分离、纯化得到有效单体是中药研究领域的一项重要内容。在中药单体中筛选具有抗癌作用的先导化合物并对其进行结构修饰和剂型改造也是抗癌新药研发的重要手段。基于以上理论和研究成果,我们制定了本研究的技术路线:首先,应用体外高通量酶学实验在中药单体库中筛选具有抑制MTH1酶活性的单体;之后选取人结肠癌细胞作为研究模型,在细胞水平验证所筛选出的中药单体通过抑制MTH1,使肿瘤细胞内大量8-oxo G累积、DNA损伤、结肠癌细胞凋亡;最后,利用计算机模拟分子对接技术进一步证明所选单体与MTH1的结合。在本研究中,我们通过对175种中药单体进行酶学筛选,发现华蟾毒精具有很好的MTH1抑制作用,其酶学反应半抑制浓度IC50为11.51μm。在细胞实验中,我们发现华蟾毒精可抑制人结肠癌细胞SW480的增殖、诱导细胞凋亡。用相同剂量的华蟾毒精处理结肠癌细胞和人正常细胞,结果显示华蟾毒精对SW480细胞具有明显的杀伤作用而对正常细胞无影响。华蟾毒精引起SW480细胞周期G1/G0期阻滞,WB检测p21Cip/WAF1表达升高。免疫荧光检测及单细胞凝胶电泳实验证明华蟾毒精处理后的SW480细胞8-oxo G含量显着升高,DNA损伤标志物53BP-1蛋白表达量增加。接下来我们检测了华蟾毒精对SW480细胞的线粒体膜电位以及细胞内ROS水平的影响,结果显示华蟾毒精可引起线粒体膜电位降低、ROS升高。综合以上实验结果我们得出结论:华蟾毒精通过靶向抑制MTH1活性和升高细胞ROS水平的双重抗肿瘤作用机制引起结肠癌细胞凋亡。为进一步证明华蟾毒精与MTH1的结合,我们应用计算机模拟分子对接技术对MTH1与华蟾毒精进行了分子对接,结果显示二者通过氢键和Pi-Pi共轭作用形成稳定的复合物,且华蟾毒精结合在MTH1的催化位点处。接下来,我们应用计算机模拟技术对华蟾毒精的药代动力学、药效学及毒理学性质进行预测和分析,发现华蟾毒精具有较好的成药性。在酶学筛选实验中我们发现土木香内酯虽不具备MTH1抑制作用,但亦能引起SW480细胞内8-oxo G增多、DNA损伤。进一步实验结果表明土木香内酯可诱导结肠癌细胞凋亡、细胞周期阻滞在G1/G0期、p21Cip/WAF1蛋白表达量升高,但对人正常细胞无影响;土木香内酯可引起SW480细胞线粒体膜电位降低、ROS水平升高;土木香内酯处理后的SW480细胞线粒体通路蛋白表达发生了变化,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量降低、促凋亡蛋白Bax以及活化的caspase-3表达量增多。实验结果表明:土木香内酯可升高SW480细胞ROS水平、通过内源性途径激活线粒体凋亡通路诱导SW480细胞凋亡。本文对华蟾毒精和土木香内酯诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制进行了深入研究,发现华蟾毒精作为靶向MTH1抑制剂的同时兼有升高ROS的作用。对比只有升高ROS作用的土木香内酯对SW480细胞的IC50为21.63μM,华蟾毒精的IC50极低,仅为110.3n M,二者相差约200倍。计算机模拟研究证明华蟾毒精结合于MTH1的催化位点,并预测其具有较好的成药性。综上所述,华蟾毒精和土木香内酯均能够抑制人结肠癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡,是两种可进一步研发的抗癌药物,本研究为其成药研究及临床应用提供了技术方法和理论基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-04-01）
潘一鸣,张蕾,闫兵,丁雪莹,孙雪芳[9]（2017）在《华蟾毒精对肾癌细胞增殖的抑制作用》一文中研究指出运用细胞生存活力测定实验(MTT)研究华蟾毒精对肾细胞癌Caki-1细胞的生长抑制情况,采用倒置显微镜观察药物对人肾腺癌细胞形态的影响.通过MTT细胞生存活力测定实验发现,华蟾毒精对Caki-1细胞的生长增殖有明显抑制作用,且具有时间和剂量依赖性.体外实验表明,华蟾毒精对肾癌细胞增殖有较为明显的抑制作用,为肾癌的治疗找到了新的治疗策略.(本文来源于《牡丹江师范学院学报(自然科学版)》期刊2017年01期）
谢闪闪[10]（2016）在《华蟾毒精对先天免疫细胞功能的调节作用研究》一文中研究指出先天免疫作为机体抵抗感染最重要的第一步,能有效锁定微生物,控制并进而清除感染。免疫系统中的非特异性免疫细胞(如树突状细胞、中性粒细胞、单核巨噬细胞等),还有一些非细胞成分(如补体和抗菌肽等),以及机体与外界间的生理屏障共同构成了机体的先天免疫系统。先天免疫失调或缺陷会增加宿主对细菌、病毒及真菌等的易感性。实践及临床研究证明中药具有良好的免疫调节功能。而树突状细胞是连接机体先天免疫与后天免疫之间的桥梁,故可能成为研究中药免疫调节作用的关键。蟾酥作为我国传统中药,具有开窍止痛、解毒消肿之功效,目前已广泛用于治疗多种顽固性疾病,如呼吸道感染、慢性阻塞性肺病、乙型肝炎及流行性腮腺炎等。华蟾毒精(CBG)作为蟾酥主要有效成分之一,具有强心、止痛、抗肿瘤及免疫调节等多种药理活性。然而,有关华蟾毒精对先天免疫细胞尤其是对树突状细胞作用的报道却非常有限。本文主要探讨了华蟾毒精对先天免疫相关细胞尤其是树突状细胞免疫功能的影响,为该药物及蟾酥的临床应用提供理论基础和实验依据。首先,通过质谱和内毒素含量检测方法对所用CBG质量进行了评价,发现本课题中所用CBG质量可靠且无内毒素污染,为后续实验奠定基础。其次,通过粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)对外周血中提取到的单核细胞进行诱导分化的方法得到原代树突状细胞。采用流式细胞术、免疫荧光染色、实时变形流式、ELISA、Western Blot、实时荧光定量PCR等方法分别检测了华蟾毒精对树突状细胞活性、机械表型、caspase酶活性、抗原摄取、抗原递呈、细胞因子分泌、抗菌肽表达、杀菌作用等多方面的影响。结果发现,CBG并不能引起细胞坏死,但是高剂量CBG(1?g/ml)可诱导部分细胞凋亡,而这种凋亡与多种Caspase酶活化有关。纯化的树突状细胞通过实时变形流式得到的两个种群对CBG的敏感性不同,而且反应方向也不同。同时发现CBG抑制了树突状细胞对肺炎链球菌的吞噬能力,抑制了LPS诱导的树突状细胞成熟,包括下调MHC II类分子、CD80及CD86表面蛋白的表达及抑制细胞因子IL-6、IL-8、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α等的分泌。然而,CBG却能显着促进IL-1β的表达与分泌,且这种促分泌作用与caspase-1酶的活化有关。此外,CBG能促进树突状细胞抗菌肽β防御素-2(h BD-2)和3(h BD-3)的表达,同时改善LPS对抗菌肽分泌的抑制作用。CBG刺激后的树突状细胞上清液对肺炎链球菌具有一定抑菌作用,而CBG本身并没有直接的抑菌效果。为了进一步阐明CBG对树突状细胞功能的作用机制,我们在第二章中利用RT2 profiler PCR array技术分别检测了其对树突状细胞Toll样受体(TLRs)信号转导通路(84个相关基因)及炎性小体通路(84个相关基因)相关基因表达的影响。结果发现:华蟾毒精能明显影响树突状细胞炎症小体通路及Toll样受体信号传导通路中多种基因的表达。通过促进P2X7受体、NOD样受体NLRP1及NF-k B相关基因表达来激活炎性小体信号通路,可能是华蟾毒精造成树突状细胞caspase-1活化与IL-1β分泌而触发炎症反应的作用机制。同时,华蟾毒精也能降低TLR5、TLR2、TLR8、NLRC4及CD14等多种模式识别受体相关基因的表达,且促进NFKBIA等NF-κB抑制蛋白的相关基因表达,从而控制过度炎症反应。鉴于本实验中所用树突状细胞为外周血单核细胞来源,故第叁章就CBG对原代单核细胞免疫功能的影响进行了研究,同时也评价了其对THP-1单核细胞系的作用。通过LDH检测细胞毒性,ELISA检测上清中不同细胞因子及抗菌肽分泌水平,流式细胞技术检测细胞casapase-1酶活性及实时荧光定量PCR检测相关基因表达,结果发现CBG对原代单核细胞毒性较弱,但是对癌症来源的THP-1单核细胞系毒性明显;CBG在1?g/m L浓度时能显着提高原代单核细胞分泌IL-1β,与对照组相比升高51倍;在0.1?g/m L及1?g/m L浓度时均能显着提高原代单核细胞分泌IL-8,其中0.1?g/m L浓度时IL-8分泌升高21倍;CBG单独作用不能诱导THP-1细胞分泌IL-1β,但与LPS联合作用后,IL-1β分泌量有所升高;CBG不能诱导原代单核细胞抗菌肽h BD2、h BD3及LL-37的表达,但可诱导THP-1细胞表达并分泌h BD2及h BD3。第四章就CBG对中性粒细胞免疫功能的影响进行了研究。通过LDH法检测细胞活性,ELISA检测上清中细胞因子及抗菌肽HNP1-3分泌水平,Western Blot检测上清中抗菌肽h CAP18/LL-37分泌水平,实时荧光定量PCR检测相关基因表达水平,以及菌落计数检测抑菌作用,结果发现,CBG对中性粒细胞没有毒性且对主要细胞因子生成无明显影响,能显着促进抗菌肽HNP1-3及h CAP18/LL37的分泌,且经CBG作用后的中性粒细胞对肺炎链球菌的抑菌作用明显增强。考虑到免疫系统是一个整体且免疫细胞之间存在复杂而紧密的联系,故最后以全血及外周血单个核细胞(PBMCs)为研究对象,初步探讨了华蟾毒精对血液中多种细胞的整体作用。通过LDH法检测细胞毒性,并通过ELISA法检测细胞因子分泌水平,结果发现CBG对全血及PBMCs细胞无明显毒性;CBG单独可诱导全血分泌IL-1β并可提高LPS诱导的IL-1β分泌;尽管CBG单独不能诱导PBMCs分泌IL-1β,但可提高LPS诱导的IL-1β分泌量;CBG极显着抑制LPS诱导的PBMCs分泌IL-10和IL-8;CBG在0.01?g/m L浓度时对PHA诱导的IFN-γ分泌有升高趋势,但差异不显着,而1?g/m L浓度时则显着性抑制该分泌。综上所述,华蟾毒精能针对树突状细胞、单核细胞及中性粒细胞等不同的先天免疫细胞的功能进行有效调节。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-12-01）
华蟾毒精论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:观察华蟾毒精对人肝癌细胞株增殖抑制及促凋亡作用,并探讨其机制。方法:选取人肝癌细胞HepG2进行培养,取对数生长期HepG2细胞分为实验组1(浓度为25μmol/L华蟾毒精处理)、实验组2(浓度为50μmol/L华蟾毒精处理)、实验组3(浓度为100μmol/L华蟾毒精处理)和对照组(加等体积的生理盐水),培养24h、48h后采用MTT法和流式细胞术检测对照组和实验组肝癌细胞HepG2增殖抑制率和凋亡率。培养48h后荧光定量PCR检测AKT、mTOR、Caspase3、Bax和Bcl-2 m RNA表达量,免疫印迹法检测Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达量。结果:培养24h、48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞增殖抑制率均显着高于对照组(P<0.05),且实验组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);培养24h、48h实验组1、实验组2和实验组3细胞凋亡率均显着高于对照组(P<0.05),实验组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);培养48h,实验组1、实验组2和实验组3细胞AKT、mTOR、Bcl-2 m RNA表达量与对照组相比均显着降低(P<0.05),Bax和Caspase-3 m RNA表达量均显着增加(P<0.05),且实验组Caspase3、Bax和Bcl-2蛋白表达与m RNA表达结果趋势一致。结论:华蟾毒精能够抑制肝癌细胞HepG2增殖,并促进其凋亡,作用机制可能与通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax、Caspase-3蛋白的表达,调控AKT/mTOR信号通路有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
华蟾毒精论文参考文献
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