腾冲嗜热厌氧杆菌ahpC编码基因的克隆表达及生物信息学分析

论文摘要

为了研究腾冲嗜热厌氧杆菌（Thermoanaerobacter tengcongensis）AhpC在嗜热中的作用,应用PCR技术扩增腾冲嗜热厌氧菌tte0270基因（即ahpC编码基因）,构建了原核表达载体pET-28a::ahpC并在大肠杆菌BL21（DE3）表达AhpC,并通过荧光定量PCR分析ahpC在50℃、60℃、75℃和80℃的mRNA表达量;同时利用生物信息学软件分析AhpC在腾冲嗜热厌氧杆菌、单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌中编码氨基酸的基本理化性质和蛋白质三级结构。在BL21（DE3）中腾冲嗜热厌氧杆菌AhpC蛋白能高效的表达,以可溶性形式存在,分子质量为26 ku;荧光定量PCR结果表明腾冲嗜热厌氧杆菌ahpC mRNA表达量随温度升高而提高;生物信息学分析得出AhpC含有220个氨基酸,为酸性亲水性蛋白,等电点为6.126,蛋白质有29.1%的氨基酸参与α-螺旋结构的形成。嗜热菌AhpC中Glu（E）和Lys（K）的含量高于常温细菌。腾冲嗜热厌氧杆菌AhpC的三级结构明显比大肠杆菌和单核细胞增生李斯特菌的更紧凑。结果对腾冲嗜热菌嗜热机制研究具有一定的启发。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 培养基
•     1.1.3 主要试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 引物设计
•     1.2.2 腾冲嗜热厌氧杆菌基因组DNA的提取
•     1.2.3 ahpC基因的扩增
•     1.2.4 AhpC蛋白的表达及纯化
•     1.2.5 RNA提取及实时定量RT-PCR
•     1.2.6 ahpC序列的生物信息学分析
• 2 结果与分析
•   2.1 ahpC的PCR扩增结果及pET-28a::ahpC重组质粒酶切验证
•   2.2 AhpC蛋白的纯化
•   2.3 ahpC在不同温度下的转录分析
•   2.4 腾冲嗜热菌ahpC及AhpC的生物信息学分子特征
•     2.4.1 ahpC序列及AhpC氨基酸序列的分子特征
•     2.4.2 ahpC编码蛋白质的疏水性分析
•     2.4.3 AhpC跨膜区、信号肽位点的预测
•     2.4.4 AhpC蛋白二级结构和AhpC三级结构特征预测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郑航辉,高昇,杨宇泽,吴润,万学瑞,王川,刘磊

关键词: 腾冲嗜热厌氧菌,热适应

来源: 生物学杂志 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 甘肃农业大学动物医学学院,北京市畜牧总站

基金: 国家自然科学基金(31500067,31560700),兰州市科技创新项目(No.2014-2-11)

分类号: Q78

页码: 36-40

总页数: 5

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