嗜热网球菌纤维二糖差向异构酶在枯草芽孢杆菌中的表达及发酵优化

论文摘要

通过化学方法合成嗜热网球菌（Dictyoglomus thermophilum）来源的纤维二糖差向异构酶基因ce,将其引入到载体pBSuL3-ce,构建重组质粒pBSuL3-ce并转化进枯草芽孢杆菌,发酵48h后测定胞内酶活为7. 5U/ml。酶学性质结果表明:该酶的最适pH为8. 5;最适温度为85℃,85℃的半衰期为120min。为降低发酵成本,对发酵培养基进行优化:以35g/L豆粕粉为氮源、5g/L甘油为碳源时,酶活力最高可达12. 3U/ml。依据摇瓶优化的条件在3L发酵罐中扩大培养,胞内酶活达到56U/ml,比摇瓶培养酶活提高了8倍。利用发酵所得酶制备乳果糖,在乳糖浓度为400g/L、反应温度为85℃、初始pH 8. 5、加酶量为20U/ml的条件下,乳果糖转化率可达51%。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 培养基
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 重组菌的构建
•     1.2.2 重组菌的发酵培养
•     1.2.3 重组枯草芽孢杆菌发酵液分析
•     1.2.4 纤维二糖差向异构酶学性质
•     1.2.5 酶转化方法
•     1.2.6 摇瓶发酵中培养基对重组菌产酶的影响
•     1.2.7 3L发酵罐重组菌生长产酶情况
• 2 结果与分析
•   2.1 纤维二糖差向异构酶基因在枯草芽孢杆菌中的表达
•   2.2 纤维二糖差向异构酶酶学性质
•     2.2.1 纤维二糖差向异构酶的纯化
•     2.2.2 重组酶的最适pH
•     2.2.3 重组酶的最适温度和热稳定性
•   2.3 摇瓶发酵条件优化
•     2.3.1 氮源种类和浓度优化
•     2.3.2 碳源种类和浓度优化
•     2.3.3 3L发酵罐菌体生长和产酶情况
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王鑫淼,张康,陈晟,吴敬

关键词: 嗜热网球菌,纤维二糖差向异构酶,枯草芽孢杆菌,酶学性质,发酵优化

来源: 中国生物工程杂志 2019年07期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 一般化学工业

单位: 江南大学食品科学与技术国家重点实验室江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室教育部食品安全国际合作联合实验室

基金: 国家杰出青年基金(31425020),国家自然科学基金(31571776),中央高校基本科研业务费专项资(JUSRP51706A),江苏省重点研发计划(社会发展)项目(BE2015751)资助项目

分类号: TQ925

DOI: 10.13523/j.cb.20190704

页码: 24-31

总页数: 8

文件大小: 310K

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