导读:本文包含了基因佐剂论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:佐剂,疫苗,基因,关节炎,病毒,免疫,质粒。
基因佐剂论文文献综述
沙文超[1]（2019）在《基因佐剂MIP-1α对编码TgGRA12的DNA疫苗诱导抗弓形虫感染的免疫增强作用》一文中研究指出刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)简称弓形虫,是一种专性细胞内寄生的原虫,它可以感染几乎所有的温血动物(包括人类),引发人兽共患弓形虫病。免疫功能正常的个体感染弓形虫后一般无明显症状,或仅表现出轻微流感样症状。孕妇在孕期感染弓形虫,可对胎儿健康造成不良影响,可致流产、畸形、死胎等。弓形虫病是最常见的机会性感染疾病,免疫功能低下的群体感染弓形虫或可导致严重后果,如弓形虫病占AIDS各种机会性感染的10%～30%,可引起脑部局灶性占位性病变。此外,弓形虫病对畜牧业亦可造成严重的经济损失。弓形虫主要有3种分泌细胞器,分别是微线体(microneme)、棒状体(rhoptry)和致密颗粒(dense granule),叁种细胞器分别产生微线体蛋白、棒状体蛋白和致密颗粒蛋白。其中,致密颗粒蛋白对虫体修饰纳虫空泡以及在细胞内生存有重要作用。寄生虫的膜上表达的弓形虫GRA12(TgGRA12)与位于弓形虫纳虫空泡中的膜状纳米管网(MNN)的形成相关,而且TgGRA12在弓形虫的速殖子和缓殖子中都可以表达。巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α),即CCL3,是一种炎性趋化因子,可以促进Th1型细胞分化,诱导分泌更多的细胞因子,产生良好的免疫反应。MIP-1α作为基因佐剂在多种抗病毒DNA疫苗中都有报道,实验证明MIP-1α可增强疫苗的免疫效果。一直以来,DNA疫苗被认为是预防弓形虫感染的有前途的策略。在这项研究中,我们评估了基因佐剂MIP-1α联合TgGRA12的DNA疫苗诱导的免疫保护效果。目的:弓形虫疫苗优秀靶点需要在众多候选蛋白中进行选择。对TgGRA12蛋白进行生物信息学分析,为该蛋白作为弓形虫DNA疫苗的可能性提供理论依据。预测TgGRA12蛋白的基本特性,分析其潜在Th、B细胞抗原表位,并与经典靶点SAG1进行比较,确认其作为新靶点的优势。构建真核表达载体,联合基因佐剂MIP-1α免疫小鼠评估DNA疫苗的保护效果,为寻找新的弓形虫疫苗靶点以及更有效的佐剂提供指导。方法:通过生物信息学分析的方法,利用DNASTAR和IEDB分析软件分别预测TgGRA12蛋白的二级结构、潜在B细胞表位以及Th细胞抗原表位,并与经典靶点蛋白SAG1进行比较。扩增TgGRA12和MIP-1α的基因片段,以真核表达质粒pBudCE4.1为载体,构建重组基因疫苗pBudCE4.1-TgGRA12(pBud-TgGRA12)以及重组基因佐剂pBudCE4.1-MIP-1α(pBud-MIP-1α),最后通过酶切和测序进行验证。将昆明小鼠随机分为5组,分别为疫苗组(pBud-TgGRA12组)、佐剂组(pBud-MIP-1α组)、疫苗+佐剂组(pBud-TgGRA12+pBud-MIP-1α组,即pBud-TgGRA12+pBud-MIP-1α组)、空质粒组(pBudCE4.1组)和空白对照组(PBS组)。小鼠每两周免疫一次,共免疫叁次,随后检测特异性IgG和细胞因子产物。用7.gondii RH菌株速殖子进行攻击并记录存活时间以评价疫苗的免疫效果。结果:TgGRA12蛋白的二级结构和潜在B细胞表位以及潜在Th细胞表位与SAG1蛋白相比皆有较明显的优势,这些分析结果为后续实验提供理论基础。成功构建DNA疫苗和基因佐剂后免疫小鼠评估免疫保护效果。与对照组(PBS组和pBudCE4.1组)相比,疫苗组小鼠产生显着强烈的体液应答和Th1型细胞免疫应答,并且抗体和细胞因子的滴度显着增加(P<0.05)。与疫苗组相比,联合注射pBud-MIP-1α显著增强了体液和细胞免疫应答(P<0.05)。生存实验表明,疫苗+佐剂组小鼠存活时间最长,与疫苗组或佐剂组相比,小鼠的存活时间显着延长(P<0.05)。单独佐剂组不能产生有效的体液免疫保护,但可以辅助DNA疫苗诱导更强的Th1型细胞分化。DNA疫苗诱导免疫保护的能力很强,免疫的小鼠感染速殖子后的存活时间延长。结论:生物信息学分析结果表明TgGRA12具有良好的T、B细胞抗原表位,理论上是刚地弓形虫DNA疫苗的有效靶点。通过动物实验也证明TgGRA12能诱导良好的保护性免疫应答,而DNA疫苗联合基因佐剂免疫小鼠引发了最高水平的免疫保护效力,疫苗接种后的小鼠对弓形虫强毒株感染产生较高水平的免疫保护,因此TgGRA12蛋白是针对急性弓形虫病的一种有前途的候选疫苗,MIP-1α作为基因佐剂可增强弓形虫DNA疫苗的免疫效果,为寻找新型佐剂提供了更多选择。(本文来源于《山东大学》期刊2019-05-10）
范雪亭[2]（2019）在《基因工程黏膜佐剂CTA1-DD的制备及其免疫效果的研究》一文中研究指出接种疫苗是预防与控制病原体传染最有效的方式。目前,尽管有些病原体进入机体是通过黏膜系统进入机体,但是绝大多数疫苗免疫方式为注射免疫。虽然该类免疫方式可以为机体提供一定保护效果,但是因其主要诱导机体中IgG抗体产生而不能有效刺激机体产生黏膜免疫反应,具有一定的局限性。而黏膜免疫不仅可以刺激机体产生有效的黏膜免疫应答,诱导局部IgA抗体分泌,防止病原体通过黏膜感染或者入侵机体,还可以促进机体产生细胞介导免疫应答以及体液免疫应答。另外,与传统注射免疫相比,黏膜免疫方式具有更易被接种者接受、简化接种程序、降低疫苗成本以及可以避免经血液传播传染性疾病的交叉感染等优势。虽然黏膜免疫方式具有如此多的优点,但是因其需要较大量的抗原以及抗原经黏膜进入机体需克服黏膜耐受等问题只有少数的黏膜免疫疫苗应用于人类。佐剂因其对于增强免疫过程中免疫反应至关重要而在疫苗研究中备受关注。然而,目前只有少数安全有效的疫苗佐剂应用于人类疫苗,尤其是黏膜佐剂。因此,研制出一种有效、安全的黏膜免疫佐剂对于黏膜免疫疫苗的发展具有极为重要的意义。本研究在霍乱毒素A1亚基的基础上,在其C末端连接金黄色葡萄球菌A蛋白人工类似物的二聚体(DD),后者是一种免疫球蛋白(Ig)结合片段,可将A1亚基靶向至B细胞受体以及免疫球蛋白,构建融合蛋白CTA1-DD并对其作为黏膜佐剂效果评价研究。流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸系统疾病,常常伴随高烧、流鼻涕以及全身肌肉酸痛等症状,经常造成流感爆发大流行以及季节性流感。据统计每年在季节性流行期间,全世界约10%-20%的人口会感染流感病毒,导致300万-500万严重病例以及29万-65万人死亡。流感病毒可以分为甲型流感病毒(A)、乙型流感病毒(B)、丙型流感病毒(C)以及丁型流感病毒(D)四类。除丁型流感病毒外都可感染人类引起流感,其中甲型流感病毒中的H1N1、H3N2以及H5N1等是引起流感大流行的主要病原体,因此对于该类病毒的预防与控制对人类公共卫生事业具有极其重要的意义。甲型流感病毒是正粘病毒科流感病毒属中单股负链RNA病毒,该病毒在传播过程中常发生抗原转变进而引起新型流感爆发。虽然该病毒经过呼吸道黏膜入侵机体,但是目前所有的灭活、裂解以及亚单位疫苗都是通过皮下或肌肉注射免疫的途径接种。因此研究一种安全有效的黏膜免疫流感疫苗具有非常重要的意义。为此,本论文选用无毒的CTA1-DD作为黏膜佐剂并分别应用于甲型流感病毒H1N1裂解疫苗以及H3N2裂解疫苗经鼻腔免疫小鼠后对其效果进行评价,本研究为CTA1-DD作为人类疫苗的新型黏膜佐剂奠定基础。本研究首先利用原核表达系统表达新型黏膜佐剂CTA1-DD蛋白,利用密码子优化、基因合成、酶切连接等技术将目的基因插入表达载体pET30a,成功构建重组表达质粒pET30a-CTA1-DD,然后将其转入BL21(DE3)中表达。结果表明该蛋白即可可溶性表达又可以包涵体形式表达,表达蛋白分子量约为36KD。为便于后期实验利用,选用可溶性表达蛋白进行纯化。该蛋白经阴离子交换、分子筛层析技术获得纯度高达98.43%、浓度2.4mg/ml的CTA1-DD蛋白。另外,将CTA1-DD佐剂蛋白分别与H1N1裂解亚单位成分以及H3N2裂解亚单位成分混合经鼻腔免疫后观察其免疫效果,并与常规氢氧化铝佐剂联合裂解亚单位成分经肌肉注射免疫效果比较。动物实验结果表明,与氢氧化铝佐剂组相比,当CTA1-DD与甲型流感裂解亚单位成分混合滴鼻免疫小鼠后可以显着增强血清中特异性IgG抗体水平,同时促进小鼠呼吸道以及阴道等黏膜处IgA的分泌与产生,这一结果提示CTA1-DD作为流感裂解疫苗的黏膜佐剂经过鼻腔免疫不仅可以刺激机体产生有效的体液免疫应答,还可以刺激机体产生黏膜免疫应答;在氢氧化铝佐剂联合裂解亚单位成分肌肉注射后,血清中存在较高水平的IgG抗体,但在呼吸道以及阴道处未检测到IgA抗体,提示了常规免疫方式可以有效激活体液免疫应答,而不能刺激机体产生黏膜免疫应答。此外,ELISPOT实验以及血清中IgG亚型抗体水平证明,CTA1-DD联合甲型流感裂解亚单位成分经滴鼻免疫可以促进分泌IFN-Υ的T淋巴细胞增殖以及降低IgG1/IgG2a 比值,这一结果揭示了 CTA1-DD可以有效激活体内Th-1类细胞反应;而氢氧化铝佐剂联合裂解亚单位成分经肌肉注射免疫可以促进分泌IL-4的T淋巴细胞增殖以及提高IgGl/IgG2a 比值,这一结果显示氢氧化铝佐剂通过激活体内Th-2类细胞反应发挥作用。同时,HI效价检测结果也证实CTA1-DD作为黏膜佐剂比氢氧化铝佐剂具有更好的效果,可以刺激小鼠体内产生更强的HI滴度。最后,为了评价CTA1-DD作为黏膜免疫佐剂的效果,对免疫后小鼠分别进行致死剂量的活毒攻击实验。两部分实验均发现CTA1-DD混合裂解亚单位成分滴鼻免疫后可以提供100%的保护效果,并且极大地降低了发病率;而铝佐剂混合H1N1裂解亚单位成分仅有66.67%的保护效果,混合H3N2裂解亚单位成分仅提供50%的保护效果,且两部分实验结果都发现铝佐剂组伴随着精神萎靡、毛发直立、食欲不振、消瘦以及行动迟缓等症状。综上所述,本研究利用原核表达系统,经阴离子交换、分子筛层析获得高纯度CTA11-DD佐剂蛋白。CTA1-DD具有良好的黏膜佐剂活性,对滴鼻免疫裂解疫苗具有较好的免疫应答辅助作用,不仅可以刺激机体产生系统免疫应答和黏膜局部免疫应答,还可以有效激活Th-1类细胞免疫应答。总之,该佐剂可以作为预防呼吸道疾病和其他经黏膜感染机体的病原体的黏膜佐剂进一步探索。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2019-05-01）
李辉[3]（2019）在《GIT2基因缺失对佐剂性关节炎（AA）大鼠关节的影响及软骨细胞分化的作用机制的研究》一文中研究指出目的:研究GIT2基因缺失对佐剂性关节炎(RA)大鼠关节的影响及软骨细胞分化的作用机制。方法:1.收集符合试验标准的健康雄性(Sprague Dawley)SD大鼠,对大鼠体征进行观察并且称量大鼠体重。2.32只大鼠随机分为正常组、模型(类风湿)组,GIT2基因敲除(GIT2-KO)和基因敲除加类风湿(GIT2-KO+)组;RT-PCR及Western-blot各组为30,总只数120。3.本研究采用弗氏完全佐剂注射于左后足跖皮内0.1ml诱导关节炎(致炎)。4.在第26d后采集大鼠足趾关节,对正常组、佐剂组、基因敲除(GIT2-KO)组以及基因敲除加佐剂组,大鼠关节组织切片进行HE染色,进行病理组织学检查。5.通过qRT-PCR和Western-blot检测白细胞介素-1β(1L-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),聚集蛋白聚糖(Aggrecan)和性别决定基因盒9(Sox9)的表达。6.利用免疫组化法检测各组的Ⅱ型胶原。7.分别对正常组、佐剂组、GIT2-KO组以及GIT2-KO+组大鼠于致炎前(0d),致炎后第10、13、17、21、24天,分别用皮尺(所用皮尺的宽度是5mm,最小刻度是0.5mm)和游标卡尺测量各组大鼠左右后足踝关节下0.5mm处的周长和直径值。肿胀度用左后足(造模侧)相对于右后足(非造模侧)的周长增加值和增加百分比表示其肿胀度。结果:1.CFA诱导建立RA模型,造模第0、10、13、17、21和24天分别称重,比较各组大鼠的体重。结果如表1所示。在初始RA诱导当天,各组大鼠体重称量差异无统计学意义(均P>0.05)。然而在第10、13、17、21和24天,佐剂组大鼠体重均显着高于GIT2-KO+组,差异有统计学意义(均P<0.05)。与正常组相比,GIT2-KO+组大鼠体重显着下降,差异有统计学意义(均P<0.05)。GIT2-KO组大鼠体重与正常组无显着差异。2.HE染色结果显示与正常组相比,GIT2-KO组的滑膜组织除了出现较厚的滑膜组织外,还有不同程度的更严重的RA表现,其中炎性细胞也有明显的浸润。GIT2-KO+组中的滑膜组织明显更厚,被更多的炎性细胞浸润,并且在软骨损伤方面表现出更大的严重性。3.根据免疫组化分析结果可知,II型胶原在正常组的大鼠的软骨组织中高度表达,而在佐剂组中显着降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,GIT2-KO组、GIT2-KO+组大鼠软骨组织中II型胶原的表达下降(P<0.05)。与GIT2-KO+组相比,佐剂组与GIT2-KO组中的大鼠软骨组织中II型胶原的表达均显着升高,差异有统计学意义(P<0.05)。4.大鼠软骨组织肿胀程度结果显示,在RA诱导初始,各组大鼠软骨组织肿胀程度无显着区别,差异无统计学意义(均P>0.05)。然而在第10天以后,相比于正常组,GIT2-KO组大鼠软骨组织肿胀程度显着升高,差异有统计学意义(P<0.05)。相比于佐剂组,GIT2-KO+组大鼠软骨组织肿胀程度更高,差异有统计学意义(P<0.05)。5.qRT-PCR和Western-blot检测IL-1β,TNF-α,Aggrecan和Sox9的表达,qRT-PCR结果显示佐剂组IL-1β,TNF-α,Aggrecan和Sox9的表达均低于GIT2-KO+组;Western-blot结果显示佐剂组IL-1β,TNF-α,Aggrecan和Sox9的蛋白表达均低于GIT2-KO+组(P<0.05)。在第10天以后,与正常组相比,各组IL-1β,TNF-α,Aggrecan和Sox9的mRNA表达水平在第10天以后逐渐升高,且显着高于正常组水平,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组相比,GIT2-KO组IL-1β,TNF-α,Aggrecan和Sox9的表达和蛋白表达水平均较高(P<0.05)。结论:1.CFA诱导10天后,RA佐剂组大鼠体重显着降低,而GIT2基因缺失对大鼠体重无显着影响。2.GIT2基因表达缺失进一步诱导佐剂性关节炎关节滑膜组织炎症反应的发生。3.GIT2基因表达缺失引起大鼠软骨组织中II型胶原的表达下降。4.GIT2基因表达缺失加重大鼠关节软骨组织肿胀程度。5.GIT2基因表达缺失引起关节软骨组织中IL-1β,TNF-α,Aggrecan和Sox9的mRNA及蛋白表达水平上调。6.GIT2基因表达缺失可导致类风湿性关节炎软骨细胞分化功能减弱;本研究可为类风湿性关节炎发病机制的研究提供一定的理论依据。(本文来源于《河北医科大学》期刊2019-04-01）
[4]（2019）在《广州生物院发现基因治疗之佐剂引发神经退化》一文中研究指出2018年9月20日,Cell Death&Disease(Nature杂志社)发表了中科院广州生物医药与健康研究院刘兴国课题组研究成果"Polybrene induces neural degeneration by bidirectional Ca~(2+) influx-dependent mitochondrial and ER-mitochondrial dynamics (聚凝胺启动钙内流介导的线粒体和内质(本文来源于《高科技与产业化》期刊2019年02期）
吴姗姗,唐余燕,陈小华,张毅,王洁玲[5]（2018）在《CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin联合佐剂CpG ODN免疫转基因小鼠的免疫应答研究》一文中研究指出目的:观察以非甲基化寡聚脱氧核苷酸基序(CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN)为佐剂联合融合蛋白胞质转导肽(CTP)-HBc Ag18-27-Tapasin免疫乙型病毒性肝炎(hepatitis B virus,HBV)转基因小鼠的免疫反应。方法:HBV转基因小鼠随机分为5组,实验组:CTP-HBc Ag18-27-Tapasin+CpG ODN组,对照组:CTP-HBc Ag18-27-Tapasin,干扰素(IFN-α)组,CpG ODN组,空白组为生理盐水组。融合蛋白及CpG ODN经肌肉注射免疫小鼠,流式细胞仪检测病毒特异性T细胞反应(HBV-specific cytotoxic T cell,CTL)变化,全自动免疫分析仪检测血清乙肝表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBs Ag)水平,ELISA检测T淋巴细胞培养上清白介素(IL)-2、γ-干扰素(IFN-γ)水平,实时荧光定量PCR(real time quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测HBV DNA水平,免疫组化观察HBV转基因小鼠肝脏中HBs Ag水平。结果:CTP-HBc Ag18-27-Tapasin+CpG ODN组中IFN-γ+CD8+双阳性T细胞百分比增高,细胞培养上清IL-2、IFN-γ水平升高,肝脏病理显示炎性细胞增多,免疫组化显示HBs Ag表达水平明显下降,同时对血清HBs Ag及HBV DNA水平进行比较,CTP-HBc Ag18-27-Tapasin有明显抑制作用。结论:CpG-ODN作为佐剂可以增强融合蛋白CTP-HBc Ag18-27-Tapasin诱导的HBV转基因小鼠抗病毒免疫应答。(本文来源于《中国临床药理学与治疗学》期刊2018年03期）
刘斌,陈晓宇,黄银君,牟克斌,张云娟[6]（2017）在《口蹄疫基因工程疫苗不同佐剂水相配比优化研究》一文中研究指出[目的]选择一种适合口蹄疫基因工程疫苗生产的佐剂。[方法 ]通过ISA 206和ISA201 VG油佐剂乳化后物理性状检验,参照现有口蹄疫灭活疫苗乳化工艺,选用ISA 206和ISA201 VG油佐剂,分别用4.6:5.4、1:1、5.4:4.6的水相和油相比例进行乳化,制备疫苗,于2~8℃保存15个月,分别于第3、6、9、12、15个月取样,进行疫苗物理性状检验。[结果 ]ISA201VG佐剂疫苗物理性状好于ISA 206油佐剂;疫苗水相和油相最佳配制比例为1:1;疫苗的外观、剂型、稳定性和黏度均符合产品的质量要求。[结论 ]ISA201VG佐剂可以作为口蹄疫基因工程疫苗佐剂使用。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2017年07期）
孙正浩,刘彦会,刘骏达,徐丹丹,李小枫[7]（2017）在《橙皮素衍生物-XIV调控PTCH1基因甲基化对佐剂性关节炎大鼠FLS炎症的影响》一文中研究指出目的研究5-(4-氯苯乙基)亚胺基-7-氧-乙酰-4-氯苯乙胺基橙皮素,即橙皮素衍生物XIV号(hesperidin derivative-XIV,HDND-XIV)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)炎症的影响及分子机制。方法弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant,FCA)诱导Sprague Dawley(SD)大鼠AA模型(FCA,0.01 ml·kg~(-1)),造模后24 d处理并提取原代FLS;MTT法检测HDND-XIV的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50));酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞培养基中FLS分泌的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)和白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;Lipofectamine2000转染试剂盒将过表达质粒GV230-MeCP2转染入AA FLS;Western blot法检测MeCP2、PTCH1、Gli1、Shh蛋白的表达;焦磷酸测序法定量检测各组PTCH1基因的甲基化程度。结果 MTT法检测HDND-XIV在FLS上的IC_(50)值为161μmol·L~(-1);ELISA筛选出HDND-XIV最佳抗炎浓度为10μmol·L~(-1);Western blot结果显示经HDND-XIV刺激后,AA FLS中PTCH1表达升高,MeCP2、Gli1和Shh表达下降;焦磷酸测序显示经HDND-XIV刺激后,AA FLS中PTCH1基因甲基化程度明显降低;在AA FLS中过表达MeCP2后加HDND-14刺激,Western blot结果显示成功过表达MeCP2后,PTCH1蛋白表达下降,而Gli1和Shh蛋白表达升高,ELISA结果显示IL-6、IL-1β、TNF-α水平也升高。结论 HDND-XIV对于FLS有较明显的抗炎活性,其机制可能与抑制MeCP2的表达,降低PTCH1基因甲基化程度有关。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2017年06期）
潘瑞[8]（2016）在《表达HBsAg的重组病毒联合免疫和pVR-IL15基因佐剂的免疫效果研究》一文中研究指出乙型肝炎是一个严重威胁人类健康的全球性公共卫生问题。目前,乙肝的防治工作主要分为预防和治疗两个部分,乙肝预防性疫苗已被证实是高免疫原性的,具有保护性的,能够有效的预防乙肝病毒感染。乙肝治疗的最终目的是防止肝纤维化、肝功能衰竭和肝癌的进展,围绕此目的,产生了一些抗乙肝病毒的药物,但这些药物都无法解决所有乙肝患者的肝脏损伤问题,并且耐药性也是目前乙肝防治工作中面临的困难之一。所以亟待发展一种能够彻底治愈乙肝的方法,而治疗性疫苗是目前最具有发展潜力的治疗手段之一。为提高乙肝治疗性疫苗的免疫效力,研究人员进行了大量疫苗构建方法和不同免疫策略的尝试。使用具有免疫增强作用的细胞因子作为疫苗佐剂便是其中一种策略[1]。已有一些研究结果证实IL15能够增强抗原特异性细胞免疫反应、特异性CTL反应以及增加记忆性T淋巴细胞的存活[2]。本研究选取表达乙肝病毒HBsAg基因的重组质粒pVR-S、重组腺病毒rAdv-S和重组痘病毒rMVA-S,组合成不同免疫策略,辅以pVR-IL15基因佐剂免疫,研究其对不同免疫策略诱导的免疫应答水平的影响。实验结果显示,在体液免疫应答中,pVR-IL15基因佐剂能够增强本研究中除了单独免疫重组病毒策略以外的所有免疫策略诱导的体液免疫应答。在单独免疫重组病毒、一次免疫pVR-S和一次免疫重组病毒、两次免疫pVR-S和一次免疫重组病毒的策略中,均显现出rAdv-S诱导的体液免疫应答水平高于rMVA-S,此叁种免疫策略诱导的体液免疫效果由强到弱的顺序为两次免疫pVR-S和一次免疫重组病毒策略、一次免疫pVR-S和一次免疫重组病毒策略、单独免疫重组病毒策略。免疫两次重组病毒策略中显示免疫两次rMVA-S诱导的体液免疫应答水平低于交叉免疫rAdv-S和rMVA-S诱导的免疫应答水平。细胞免疫应答检测结果显示,pVR-IL15基因佐剂均能增强实验中所有免疫策略诱导的细胞免疫应答水平。免疫两次重组病毒策略的结果显示,免疫同源载体病毒和异源载体病毒所诱导的细胞免疫水平无差异;一次免疫pVR-S和一次免疫重组病毒策略和免疫两次重组病毒策略所诱导的细胞免疫应答水平无差异;两次免疫pVR-S和两次免疫重组病毒策略所诱导的细胞免疫应答水平在各组免疫策略中效果最好。综上,pVR-IL15基因佐剂能够增强各小鼠免疫方案中重组病毒诱导的体液免疫应答,在细胞免疫应答,pVR-IL15基因佐剂也起到了免疫增强的作用,在免疫两次重组病毒方案中,pVR-IL15基因佐剂最高可将免疫应答水平提高3.6倍。在体液免疫中rAdv-S诱导的免疫效果强于rMVA-S;免疫两次rMVA-S诱导的体液免疫应答水平低于交叉免疫rAdv-S和rMVA-S。在细胞免疫中,免疫同源载体病毒和异源载体病毒所诱导的细胞免疫水平无差异,一次免疫pVR-S和一次免疫重组病毒免疫策略和免疫两次重组病毒策略所诱导的细胞免疫效果相当。无论是体液免疫还是细胞免疫均显示两次重组质粒与两次重组病毒联合免疫所诱导的免疫效果最好。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2016-06-30）
余炼[9]（2016）在《表达SIV及HIV基因的多载体疫苗联合应用的免疫策略及相关佐剂研究》一文中研究指出艾滋病已经在全球范围流行了30余年,迄今尚无彻底清除病毒感染并治愈AIDS的方法。治疗性艾滋病疫苗(Therapeutic HIV vaccine)的主要目标在于通过重建或激活被感染者自身的抗HIV免疫功能,增强感染者对HIV的特异性免疫反应的强度,降低病毒载量,延缓HIV感染者发展成为AIDS患者,实现对患者的功能性治愈,认为是一种具有潜在希望的AIDS疗法。因HIV疫苗缺乏有效的动物模型,而SIV与HIV-1同源性高且感染宿主之后的病理过程及免疫反应类似,SIV/猴模型可以有效地评价HIV疫苗效果;HIV疫苗中,血清型5型腺病毒载体疫苗研究较多,因血清型5型腺病毒(Ad5)人群感染率高,其他血清型腺病毒载体或嵌合病毒发展起来。艾滋病疫苗添加佐剂也是近年来,HIV疫苗研发的热点。Ad5F35为将Ad5纤毛蛋白改造后的嵌合病毒。本研究使用AdEasyTM腺病毒包装系统构建了表达SIV gag基因的rAd5F35-SIV gag疫苗并对其进行纯化,经鉴定重组腺病毒rAd5F35-SIV gag中含有SIV gag基因,且能有效的表达Gag蛋白,进行了疫苗的小鼠药效学研究。Ad5F35-SIV gag疫苗以不同的剂量免疫小鼠,采用ELISPOT法检测免疫小鼠体内gag特异性细胞免疫反应,结果显示各剂量组小鼠均能诱导gag特异性细胞免疫应答,其中1×108 TCID50/只剂量组小鼠体内gag特异性细胞免疫应答最强。本课题组前期的研究中提出的使用多载体HIV疫苗进行重复和序贯免疫的策略证实,在接受多载体疫苗序贯免疫的动物体内能诱导持续时间较长、反应强度较高的HIV特异性免疫反应。因此,本研究将构建的Ad5F35-SIV gag疫苗,联合课题组前期构建的pVR-SIV gag、Ad5-SIV gag疫苗在小鼠体内进行了序贯和重复免疫,结果显示,DNA疫苗初免,免疫Ad5F35载体疫苗,再免疫Ad5载体疫苗的策略激起的Gag特异性的细胞免疫反应更强。本研究构建了表达IL-7、IL-21基因的质粒pVR-IL7、pVR-IL21,以DNA疫苗(pVR-HIVenv)单独或添加CpG ODN、Poly(I:C)对小鼠进行初免,以腺病毒载体疫苗(Ad5-HIVenv)单独或添加IL-7、IL-21基因进行加强免疫,末次免疫后两周分别采用酶联免疫斑点法(ELISPOT)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测免疫小鼠诱导的特异性细胞免疫应答和体液免疫应答,采用CCK-8法检测免疫小鼠淋巴细胞增殖反应的强度。ELISPOT结果显示Ad5-HIVenv疫苗联合pVR-IL7佐剂及CpG ODN组的细胞免疫水平高于Ad5-HIVenv疫苗联合pVR-IL7佐剂组,并且显着高于疫苗单独免疫组;CCK-8结果也显示,疫苗联合pVR-IL7基因佐剂及CpG ODN佐剂组小鼠的特异性的淋巴细胞增殖反应强度高于疫苗联合pVR-IL7佐剂组小鼠,而疫苗联合pVR-IL21佐剂与疫苗单独免疫组相比没有增强小鼠特异性的淋巴细胞增殖反应强度。所获结果,对艾滋病疫苗添加佐剂的研究具有一定的参考价值。(本文来源于《北京工业大学》期刊2016-06-01）
贾岚,傅婷,陶薇,何卓晶,洪艳[10]（2016）在《霍乱病毒B亚单位作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型DNA疫苗免疫效果的影响》一文中研究指出目的研究霍乱病毒B亚单位(cholera toxin subunit B,CTB)作为基因佐剂对单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)DNA疫苗pg D免疫效果的影响。方法将CTB片段克隆至真核表达质粒pc DNA3Kan(p Kan)中,构建基因佐剂pc DNA3Kan-CTB(p CTB)。将BALB/c小鼠随机分为p CTB无疫苗组、pg D/p CTB佐剂组、pg D/p Kan空载体组及PBS对照组,经后腿肌肉多点注射,共免疫3次,每次间隔2周。于末次免疫2周后,经小鼠眼球采血,分离血清,ELISA法检测HSV-2特异性Ig G水平及Ig G1、Ig G2a亚型抗体滴度;制备小鼠脾细胞,MTS法检测小鼠脾脏T细胞增殖能力;将病毒稀释后经腹腔接种小鼠,于免疫2周后,进行HSV-2致死剂量攻毒试验。结果p CTB经双酶切及测序鉴定证明构建正确;pg D/p CTB佐剂组小鼠血清中HSV-2特异性Ig G水平明显高于其他3组(P<0.001),Ig G1和Ig G2a滴度均明显高于pg D/p Kan空载体组(P<0.001),其中Ig G2a增幅更明显,Ig G2a/Ig G1比值与pg D/p Kan空载体组相比,由(1.176±0.11)增加至(1.316±0.07)(P<0.05);pg D/p CTB佐剂组小鼠脾细胞在HSV-2刺激下诱导的特异性T细胞增殖反应明显强于PBS对照组及pg D/p Kan空载体组(P<0.05);攻毒14 d内,pg D/p CTB佐剂组小鼠存活率高达100%。结论 p CTB作为基因佐剂能够显着提高pg D诱导小鼠产生抗原特异性Ig G抗体水平,增强HSV-2特异性T细胞增殖反应,并介导以细胞免疫为主的Th1/Th2混合型免疫反应。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2016年05期）
基因佐剂论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
接种疫苗是预防与控制病原体传染最有效的方式。目前,尽管有些病原体进入机体是通过黏膜系统进入机体,但是绝大多数疫苗免疫方式为注射免疫。虽然该类免疫方式可以为机体提供一定保护效果,但是因其主要诱导机体中IgG抗体产生而不能有效刺激机体产生黏膜免疫反应,具有一定的局限性。而黏膜免疫不仅可以刺激机体产生有效的黏膜免疫应答,诱导局部IgA抗体分泌,防止病原体通过黏膜感染或者入侵机体,还可以促进机体产生细胞介导免疫应答以及体液免疫应答。另外,与传统注射免疫相比,黏膜免疫方式具有更易被接种者接受、简化接种程序、降低疫苗成本以及可以避免经血液传播传染性疾病的交叉感染等优势。虽然黏膜免疫方式具有如此多的优点,但是因其需要较大量的抗原以及抗原经黏膜进入机体需克服黏膜耐受等问题只有少数的黏膜免疫疫苗应用于人类。佐剂因其对于增强免疫过程中免疫反应至关重要而在疫苗研究中备受关注。然而,目前只有少数安全有效的疫苗佐剂应用于人类疫苗,尤其是黏膜佐剂。因此,研制出一种有效、安全的黏膜免疫佐剂对于黏膜免疫疫苗的发展具有极为重要的意义。本研究在霍乱毒素A1亚基的基础上,在其C末端连接金黄色葡萄球菌A蛋白人工类似物的二聚体(DD),后者是一种免疫球蛋白(Ig)结合片段,可将A1亚基靶向至B细胞受体以及免疫球蛋白,构建融合蛋白CTA1-DD并对其作为黏膜佐剂效果评价研究。流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸系统疾病,常常伴随高烧、流鼻涕以及全身肌肉酸痛等症状,经常造成流感爆发大流行以及季节性流感。据统计每年在季节性流行期间,全世界约10%-20%的人口会感染流感病毒,导致300万-500万严重病例以及29万-65万人死亡。流感病毒可以分为甲型流感病毒(A)、乙型流感病毒(B)、丙型流感病毒(C)以及丁型流感病毒(D)四类。除丁型流感病毒外都可感染人类引起流感,其中甲型流感病毒中的H1N1、H3N2以及H5N1等是引起流感大流行的主要病原体,因此对于该类病毒的预防与控制对人类公共卫生事业具有极其重要的意义。甲型流感病毒是正粘病毒科流感病毒属中单股负链RNA病毒,该病毒在传播过程中常发生抗原转变进而引起新型流感爆发。虽然该病毒经过呼吸道黏膜入侵机体,但是目前所有的灭活、裂解以及亚单位疫苗都是通过皮下或肌肉注射免疫的途径接种。因此研究一种安全有效的黏膜免疫流感疫苗具有非常重要的意义。为此,本论文选用无毒的CTA1-DD作为黏膜佐剂并分别应用于甲型流感病毒H1N1裂解疫苗以及H3N2裂解疫苗经鼻腔免疫小鼠后对其效果进行评价,本研究为CTA1-DD作为人类疫苗的新型黏膜佐剂奠定基础。本研究首先利用原核表达系统表达新型黏膜佐剂CTA1-DD蛋白,利用密码子优化、基因合成、酶切连接等技术将目的基因插入表达载体pET30a,成功构建重组表达质粒pET30a-CTA1-DD,然后将其转入BL21(DE3)中表达。结果表明该蛋白即可可溶性表达又可以包涵体形式表达,表达蛋白分子量约为36KD。为便于后期实验利用,选用可溶性表达蛋白进行纯化。该蛋白经阴离子交换、分子筛层析技术获得纯度高达98.43%、浓度2.4mg/ml的CTA1-DD蛋白。另外,将CTA1-DD佐剂蛋白分别与H1N1裂解亚单位成分以及H3N2裂解亚单位成分混合经鼻腔免疫后观察其免疫效果,并与常规氢氧化铝佐剂联合裂解亚单位成分经肌肉注射免疫效果比较。动物实验结果表明,与氢氧化铝佐剂组相比,当CTA1-DD与甲型流感裂解亚单位成分混合滴鼻免疫小鼠后可以显着增强血清中特异性IgG抗体水平,同时促进小鼠呼吸道以及阴道等黏膜处IgA的分泌与产生,这一结果提示CTA1-DD作为流感裂解疫苗的黏膜佐剂经过鼻腔免疫不仅可以刺激机体产生有效的体液免疫应答,还可以刺激机体产生黏膜免疫应答;在氢氧化铝佐剂联合裂解亚单位成分肌肉注射后,血清中存在较高水平的IgG抗体,但在呼吸道以及阴道处未检测到IgA抗体,提示了常规免疫方式可以有效激活体液免疫应答,而不能刺激机体产生黏膜免疫应答。此外,ELISPOT实验以及血清中IgG亚型抗体水平证明,CTA1-DD联合甲型流感裂解亚单位成分经滴鼻免疫可以促进分泌IFN-Υ的T淋巴细胞增殖以及降低IgG1/IgG2a 比值,这一结果揭示了 CTA1-DD可以有效激活体内Th-1类细胞反应;而氢氧化铝佐剂联合裂解亚单位成分经肌肉注射免疫可以促进分泌IL-4的T淋巴细胞增殖以及提高IgGl/IgG2a 比值,这一结果显示氢氧化铝佐剂通过激活体内Th-2类细胞反应发挥作用。同时,HI效价检测结果也证实CTA1-DD作为黏膜佐剂比氢氧化铝佐剂具有更好的效果,可以刺激小鼠体内产生更强的HI滴度。最后,为了评价CTA1-DD作为黏膜免疫佐剂的效果,对免疫后小鼠分别进行致死剂量的活毒攻击实验。两部分实验均发现CTA1-DD混合裂解亚单位成分滴鼻免疫后可以提供100%的保护效果,并且极大地降低了发病率;而铝佐剂混合H1N1裂解亚单位成分仅有66.67%的保护效果,混合H3N2裂解亚单位成分仅提供50%的保护效果,且两部分实验结果都发现铝佐剂组伴随着精神萎靡、毛发直立、食欲不振、消瘦以及行动迟缓等症状。综上所述,本研究利用原核表达系统,经阴离子交换、分子筛层析获得高纯度CTA11-DD佐剂蛋白。CTA1-DD具有良好的黏膜佐剂活性,对滴鼻免疫裂解疫苗具有较好的免疫应答辅助作用,不仅可以刺激机体产生系统免疫应答和黏膜局部免疫应答,还可以有效激活Th-1类细胞免疫应答。总之,该佐剂可以作为预防呼吸道疾病和其他经黏膜感染机体的病原体的黏膜佐剂进一步探索。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
基因佐剂论文参考文献
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