结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875、Rv3804c细胞表位融合蛋白的表达及其免疫原性评价

论文摘要

目的评价结核分枝杆菌基因Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c的细胞表位融合蛋白的免疫原性,为研制新型多阶段结核疫苗提供可靠的靶抗原。方法将Rv2660c、Rv2460c、Rv3875和Rv3804c基因中的细胞表位串联构成融合抗原基因（命名为msv）,克隆到原核表达载体pEASY-Blunt E1中,诱导表达后采用亲和层析纯化表达产物,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,用纯化的融合抗原蛋白免疫小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度;分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,采用淋巴细胞增殖法检测其免疫原性。结果成功构建了能表达融合抗原基因msv的原核表达质粒;SDS-PAGE和Western blot结果表明,表达产物亲和层析纯化后,获得相对分子质量为41.3×103的目的蛋白;ELISA检测免疫小鼠血清抗体滴度,结果表明特异性抗体效价约为1∶81 920;淋巴细胞增殖实验结果表明,抗原致敏的淋巴细胞经融合蛋白msv刺激后明显增殖。结论成功表达并纯化出融合蛋白msv,该融合蛋白可诱导小鼠特异性抗体表达和刺激细胞免疫应答,可作为结核疫苗的抗原组分。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株和质粒
•     1.1.2 主要试剂
•     1.1.3 实验动物
•   1.2 方法
•     1.2.1 结核分枝杆菌融合基因msv的合成
•     1.2.2 融合抗原基因msv的扩增
•     1.2.3 融合抗原基因msv原核表达载体的构建
•     1.2.4 重组蛋白的诱导表达、鉴定及纯化
•     1.2.5 动物免疫
•     1.2.6 免疫小鼠抗体水平检测
•     1.2.7 淋巴细胞增殖实验
•     1.2.8 统计学方法
• 2 结果
•   2.1 重组质粒的构建
•   2.2 融合蛋白的表达与纯化
•   2.3 免疫小鼠血清特异性抗体滴度
•   2.4 免疫小鼠抗原特异性淋巴细胞增殖
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周玉真,刘思静,唐明圆,蒋宫羽,汪川

关键词: 结核分枝杆菌,多阶段,细胞表位

来源: 四川大学学报(医学版) 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 四川大学华西公共卫生学院卫生检验与检疫系,四川大学华西公共卫生学院公共卫生与预防医学实验中心

基金: 国家自然科学基金面上项目(No.31570924),四川省科技厅国际合作项目(No.2017HH0080)资助

分类号: R392

DOI: 10.13464/j.scuxbyxb.2019.04.010

页码: 506-511

总页数: 6

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