导读:本文包含了病毒宿主关闭蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:宿主,病毒,蛋白,狂犬病,结构,序列,基因。
病毒宿主关闭蛋白论文文献综述
马相如,胡勤芹,肖少波,方六荣,刘正飞[1](2005)在《伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆及结构分析》一文中研究指出为研究伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvires ,PRV)UL4 1基因编码的病毒宿主关闭蛋白 (VHS)的结构与功能 ,通过PCR扩增得到含UL4 1基因完整编码区的 1174bp片段 ,将该片段克隆到表达载体pGEX KG中GST下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中实现了GST VHS融合蛋白的高效表达 .序列分析发现VHS蛋白具有 4个保守区 ,并且第 3个保守区与核酸内切酶结构域FEN 1(1A76 )高度同源 .PROSPECT软件预测的伪狂犬病病毒VHS蛋白叁维结构中含有 10个α螺旋和 2 2个β折叠 ,与单纯疱疹病毒Ⅰ型的VHS蛋白叁维结构十分相似 .(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2005年01期)
马相如[2](2004)在《伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆、表达及其结构分析》一文中研究指出α疱疹病毒在感染细胞过程中,普遍产生对细胞内大分子合成的显著抑制作用,从而引起宿主细胞蛋白质合成的快速关闭。进一步研究发现单纯疱疹病毒1型中UL41基因编码的磷酸化蛋白与宿主细胞核糖核蛋白体的关闭和mRNA降解有关,该蛋白质被命名为病毒宿主关闭蛋白(virion host shutoff protein,VHS),是构成病毒颗粒的次要结构组分——间质蛋白。在病毒感染裂解期,VHS蛋白进入细胞后立即触发宿主细胞蛋白质合成的快速关闭和所有mRNA(包括宿主细胞及病毒)的降解,使细胞内蛋白质翻译从宿主mRNA转向病毒mRNA,并推动不同时期(立即早期α、早期β、晚期γ)病毒基因的有序表达。病毒感染后期,病毒结构蛋白VP16(由UL48基因编码)可以抑制VHS蛋白的活性,并将VHS蛋白包装进病毒颗粒。此外,许多研究表明VHS蛋白还是一个重要的毒力因子,通过干扰IFN-α/β介导的抗病毒免疫反应、降低宿主细胞MHC Ⅰ和Ⅱ类分子的表达、减少免疫系统中病毒抗原的提呈以及抑制宿主先天免疫反应等在α疱疹病毒的发病机理和免疫逃避过程中发挥重要作用。 然而,目前关于伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)中VHS蛋白的研究却很少,尚不清楚其是否具有与其它α疱疹病毒VHS相似的生物学活性。因此,克隆并研究PRV的VHS蛋白基因不仅可以鉴定PRV中VHS蛋白的生物学特性,而且对于阐明PRV的基因表达与调控、发病机理及潜伏感染机制等都具有重要意义,并为今后开发VHS基因缺失疫苗奠定基础。 本研究通过PCR从伪狂犬病病毒Ea株基因组中扩增到UL41全基因,序列测定发现扩增片段全长为1174bp,包含编码VHS蛋白365个氨基酸的完整编码区。序列比较分析发现VHS蛋白具有4个保守区,并且第叁个保守区与核酸内切酶结构域FEN-1(1A76)高度同源.用PROSPECT软件预测的伪狂犬病病毒VHS蛋白叁维结构中含有10个α螺旋和22个β折叠,与单纯疱疹病毒Ⅰ型的VHS蛋白叁维结构十分相似。说明PRV的VHS蛋白可能也是一个核酸酶,具有mRNA降解活性。 将UL41全基因克隆到表达载体pGEX-KG中GST下游,构建了原核表达质粒pGEX-UL41,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了GST-VHS融合蛋白的高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达的融合蛋白质分子量为66 KDa。将原核表达质粒pGEX-UL41和pGEX-UL48分别转化大肠杆菌,大量诱导表达融合蛋白VHS和VP16。提取包涵体,复性和纯化后免疫家兔,分别制备了抗VHS和VP16蛋白的高免血清。 本研究还将UL41与UL48全基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)和pCI-neo中,构建了单基因真核表达质粒pcDNA-UL41,pCI-UL41和pCI-UL48,以及UL41与UL48双基因共表达质粒pcDNA-UL41-UL48。为进一步深入研究VHS蛋白的功能,确定其是否可以与VP16蛋白相互作用奠定了基础。(本文来源于《华中农业大学》期刊2004-05-01)
病毒宿主关闭蛋白论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
α疱疹病毒在感染细胞过程中,普遍产生对细胞内大分子合成的显著抑制作用,从而引起宿主细胞蛋白质合成的快速关闭。进一步研究发现单纯疱疹病毒1型中UL41基因编码的磷酸化蛋白与宿主细胞核糖核蛋白体的关闭和mRNA降解有关,该蛋白质被命名为病毒宿主关闭蛋白(virion host shutoff protein,VHS),是构成病毒颗粒的次要结构组分——间质蛋白。在病毒感染裂解期,VHS蛋白进入细胞后立即触发宿主细胞蛋白质合成的快速关闭和所有mRNA(包括宿主细胞及病毒)的降解,使细胞内蛋白质翻译从宿主mRNA转向病毒mRNA,并推动不同时期(立即早期α、早期β、晚期γ)病毒基因的有序表达。病毒感染后期,病毒结构蛋白VP16(由UL48基因编码)可以抑制VHS蛋白的活性,并将VHS蛋白包装进病毒颗粒。此外,许多研究表明VHS蛋白还是一个重要的毒力因子,通过干扰IFN-α/β介导的抗病毒免疫反应、降低宿主细胞MHC Ⅰ和Ⅱ类分子的表达、减少免疫系统中病毒抗原的提呈以及抑制宿主先天免疫反应等在α疱疹病毒的发病机理和免疫逃避过程中发挥重要作用。 然而,目前关于伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)中VHS蛋白的研究却很少,尚不清楚其是否具有与其它α疱疹病毒VHS相似的生物学活性。因此,克隆并研究PRV的VHS蛋白基因不仅可以鉴定PRV中VHS蛋白的生物学特性,而且对于阐明PRV的基因表达与调控、发病机理及潜伏感染机制等都具有重要意义,并为今后开发VHS基因缺失疫苗奠定基础。 本研究通过PCR从伪狂犬病病毒Ea株基因组中扩增到UL41全基因,序列测定发现扩增片段全长为1174bp,包含编码VHS蛋白365个氨基酸的完整编码区。序列比较分析发现VHS蛋白具有4个保守区,并且第叁个保守区与核酸内切酶结构域FEN-1(1A76)高度同源.用PROSPECT软件预测的伪狂犬病病毒VHS蛋白叁维结构中含有10个α螺旋和22个β折叠,与单纯疱疹病毒Ⅰ型的VHS蛋白叁维结构十分相似。说明PRV的VHS蛋白可能也是一个核酸酶,具有mRNA降解活性。 将UL41全基因克隆到表达载体pGEX-KG中GST下游,构建了原核表达质粒pGEX-UL41,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了GST-VHS融合蛋白的高效表达。SDS-PAGE结果显示,表达的融合蛋白质分子量为66 KDa。将原核表达质粒pGEX-UL41和pGEX-UL48分别转化大肠杆菌,大量诱导表达融合蛋白VHS和VP16。提取包涵体,复性和纯化后免疫家兔,分别制备了抗VHS和VP16蛋白的高免血清。 本研究还将UL41与UL48全基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)和pCI-neo中,构建了单基因真核表达质粒pcDNA-UL41,pCI-UL41和pCI-UL48,以及UL41与UL48双基因共表达质粒pcDNA-UL41-UL48。为进一步深入研究VHS蛋白的功能,确定其是否可以与VP16蛋白相互作用奠定了基础。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
病毒宿主关闭蛋白论文参考文献
[1].马相如,胡勤芹,肖少波,方六荣,刘正飞.伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆及结构分析[J].中国生物化学与分子生物学报.2005
[2].马相如.伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆、表达及其结构分析[D].华中农业大学.2004