酿酒酵母中表达神经肉毒素A及其功能研究

酿酒酵母中表达神经肉毒素A及其功能研究

论文摘要

肉毒神经毒素(BoNT)是肉毒梭菌产生的神经毒素,是最强大的毒素之一。为了研究肉毒神经毒素A在酵母中的活性及功能,在酿酒酵母细胞中表达BoNT/A LC,观察其对酵母生长影响以及通过蛋白免疫印迹方法研究其在酵母中蛋白表达水平。结果表明:BoNT/A抑制野生型酵母的生长;在酿酒酵母细胞中BoNT/A具有水解酶活性,当其活性位点突变后,BoNT/A突变体的表达不会抑制酿酒酵母的生长;过量表达酵母的SNAP25同源基因SEC9可以回补BoNT/A轻链过表达的酵母的生长。在BoNT/A轻链表达的酵母细胞中,其催化活性可以通过酵母的生长来检测。因此,这类特殊的酵母细胞可以用来分析BoNT/A。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株与质粒
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 主要仪器
  •   1.4 培养基及其他溶液配制
  •   1.5 实验方法
  •     1.5.1 细胞生长分析
  •     1.5.2 蛋白质提取
  •     1.5.3 蛋白质免疫印迹
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 BoNT/A抑制酿酒酵母YPH499生长
  •   2.2 BoNT/A活性突变体不抑制酿酒酵母YPH499的生长
  •   2.3 在sec9△中过表达Sec9可以回补酵母的生长
  •   2.4 在酵母中过表达Sec9可以解除BoNT/A对生长的抑制
  • 3 结语
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: NDIKUBWIMANA Jean de Dieu,邵侃凯,高晓冬,中西秀树

    关键词: 肉毒神经毒素,酿酒酵母

    来源: 食品与生物技术学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 江南大学生物工程学院

    基金: 国家“111计划”项目(111-2-06),教育部科学研究项目(313027),高等学校博士学科点专项科研基金项目(20120093110001),江南大学自主科研项目(JUSRP311A02)

    分类号: Q78

    页码: 87-92

    总页数: 6

    文件大小: 2246K

    下载量: 56

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