导读:本文包含了差减筛选论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抑制,噬菌体,基因,血清,杆菌,嗜血,布鲁氏菌。
差减筛选论文文献综述
王阔鹏,于凌娇,刘倩宏,刘麒,张履冰[1]（2019）在《噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库构建及差减筛选融合蛋白》一文中研究指出目的建立噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库,差减筛选具有良好特异性、亲和力及反应原性的蛋白,为确定新型诊断用抗原奠定基础。方法利用噬菌粒载体pYW01构建重组羊型布鲁氏菌16M株基因文库,辅助噬菌体VCSM13感染基因文库进而构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M蛋白文库。利用PEG纯化后,扩增蛋白文库。随机挑取单克隆,提取质粒,测序鉴定蛋白文库。通过差减筛选,选择具有良好特异性、亲和力及反应原性的表面蛋白,为确定诊断用抗原奠定基础。结果通过DNA重组技术,构建羊型布鲁氏菌16M基因文库,库容量达到10~8pfu/mL,并且随机性良好。利用辅助噬菌体VCSM13包装基因文库,随机挑取蛋白文库中单克隆,提取质粒,经测序鉴定,成功构建噬菌体展示羊型布鲁氏菌16M株表面蛋白文库。利用免疫血清及感染血清对噬菌体展示蛋白文库进行差减淘选,筛选出6个噬菌体融合蛋白。经Western-blot分析6个噬菌体融合蛋白均具有较好的反应原性及特异性。结论成功构建噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库,差减筛选出6个具有较好反应原性及特异性的融合蛋白,为后续新型血清学诊断制剂筛选奠定基础。(本文来源于《中国人兽共患病学报》期刊2019年05期）
赵莉,石保新,李军,张壮志,马正海[2]（2015）在《细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析》一文中研究指出细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对测序结果进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果显示:对PSC-CW和PSC-AW文库进行扩增,分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR鉴定结果表明,这些克隆均插入200~1 000bp片段。测序结果显示从PSC-CW和PSC-AW SSH文库中分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个出现频率较高的基因,其余12个基因仅出现1次,其中5个为未知基因,已知基因分别编码细胞色素C氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白质。PSC-AW SSH文库中得到10个基因,其中2个出现频率较高基因,8个基因仅出现1次,4个为未知基因,6个已知基因分别编码基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白质。本研究筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运功能的相关基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2015年07期）
俞慧,邢林林,祁晶晶,倪欣涛,姜盼[3]（2015）在《应用抑制性差减杂交筛选鸭疫里默氏杆菌强弱菌株基因组的差异片段》一文中研究指出为了分析鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)强毒菌株HXb2和弱毒菌株NJ-1基因组之间的差异基因,以HXb2株基因组为待测菌株,以NJ-1株基因组为驱动菌株,构建了两株细菌基因组间的抑制性差减文库。经过dot-blot杂交和PCR验证,共鉴定到34个强弱毒株基因组差异片段。测定的序列经BLAST、DNAStar和PSORTb分析,结果表明有2个片段所在基因编码的蛋白为外膜蛋白,有2个片段所在基因编码的蛋白为胞质膜蛋白如磷酸盐转运蛋白,11个片段所在基因编码的蛋白为胞内蛋白如丙氨酸脱氢酶、β-内酰胺酶及一些假定蛋白等,有19个片段所在基因编码的蛋白(大部分为假定蛋白)定位未知。这些差异基因编码的蛋白可能与鸭疫里默氏杆菌的毒力及HXb2株特异蛋白等有关。本研究为下一步鉴定新的毒力基因及其他特异蛋白的功能奠定了基础。(本文来源于《中国动物传染病学报》期刊2015年03期）
郑礼洲[4]（2014）在《抑制性差减杂交技术筛选HPS潜在毒力基因及鉴别HPS潜在毒力菌株二重PCR方法的建立》一文中研究指出副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis，HPS)可引起猪浆液纤维素性胸膜炎、心包炎、腹膜炎、关节炎及脑膜脑炎等症状。副猪嗜血杆菌病在全世界范围内广泛流行，成为威胁养猪业的重要疫病之一。本试验在2011年12月-2013年2月期间，对江西省多个地区的疑似病料进行HPS的分离鉴定及血清分型，从中选择代表菌株进行抑制性差减杂交来筛选差异基因，并进行分布调查，最后根据调查结果建立二重PCR用于临床上该菌的鉴定与毒力检测，具体如下：1、副猪嗜血杆菌的分离鉴定及血清分型在2011年12月-2013年2月期间，从江西多个地区的疑似病料中共分离鉴定出了39株HPS，这些菌株主要分离自肺脏（51.28%）、心脏（30.77%）、关节液（15.38%）和肝脏（2.56%）。将各分离株通过传统的Kielstein-Rapp-Gabrielson（KRG）分型方法进行血清分型，结果表明江西省HPS流行的血清型为5型（25.64%），13型（20.51%），4型（10.26%），12型（5.13%），15型（5.13%）。2、副猪嗜血杆菌潜在毒力基因的筛选采用抑制性差减杂交技术分别筛选高毒力13型菌株JX1108和无毒力7型菌株HS197间及高毒力12型菌株HPJX9和无毒力3型菌株HS81间的差异基因。结果从菌株JX1108中筛选到了26个差异基因，从菌株HPJX9中筛选到了28个差异基因。这些差异基因编码的蛋白主要与限制性修饰系统、噬菌体相关蛋白、假定蛋白、新陈代谢蛋白、分泌蛋白、转运蛋白、结构蛋白和重组酶等具有较高的同源性。3、副猪嗜血杆菌潜在毒力基因的分布调查选择部分差异基因对15种血清型参考菌株进行PCR检测，选取其中有毒力菌株偏向性的基因，调查其在39株江西地方分离株的分布情况。结果表明，从菌株JX1108筛选出的15个基因中有9个在参考菌株中表现出了毒力偏向性，其在江西地方分离株中出现的频率为23.08-56.41%；从菌株HPJX9中筛选出的17个基因中有11个在参考菌株中表现出了毒力偏向性，其在江西地方分离株中出现的频率为20.51-97.44%4、鉴别副猪嗜血杆菌潜在毒力菌株的二重PCR方法的建立针对副猪嗜血杆菌16SrRNA及其毒力相关基因VtaA1建立一个鉴别该菌潜在毒株的二重PCR方法，最终确定二重PCR中16SrRNA引物终浓度为0.2μmol/L，VtaA1引物终浓度为0.1μmol/L，最佳退火温度为61.4℃，敏感度为10-5ng/mL。通过对39株江西地方分离株进行检测，结果发现各分离株16SrRNA基因扩增均为阳性，VtaA1基因的阳性率达到97.44%（38/39）。(本文来源于《江西农业大学》期刊2014-06-01）
周聪,康佳丽,王小霞,聂妙玲,蒋文燕[5]（2013）在《全细胞差减筛选法筛选与人卵巢癌细胞特异性结合的短肽》一文中研究指出目的全细胞差减法筛选人源性卵巢癌HO8910细胞株特异性结合短肽,为卵巢癌的靶向药物治疗提供理想的载体。方法以人卵巢癌HO8910细胞为靶细胞,人正常卵巢上皮细胞为吸附细胞,对噬菌体随机环7肽库进行4轮差减筛选;ELISA验证阳性噬菌体克隆;对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,采用免疫荧光细胞化学方法鉴定噬菌体阳性克隆(phage1)与HO8910细胞的特异性结合。结果经过4轮筛选后,噬菌体在靶细胞HO8910上出现了明显的富集现象;ELISA对20个随机挑选的克隆进行鉴定,12个可与HO8910特异性结合;DNA测序后得到一段与卵巢癌细胞特异性结合的7肽(SWQIGGN),免疫荧光细胞化学结果显示phage1能特异性结合HO8910细胞。结论采用全细胞差减法成功筛选到与卵巢癌细胞特异性结合的7肽。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2013年10期）
程春振,曾继吾,贝学军,吴波,阳佳位[6]（2013）在《应用抑制性差减杂交技术筛选锦橙CTV应答基因》一文中研究指出【目的】探讨易感柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus,CTV)品种锦橙CTV应答分子机理,筛选和分析CTV应答基因。【方法】以嫁接CTV强毒株TRL514的锦橙阳性材料叶片为试验方(Tester),用嫁接无毒枝条的CTV阴性锦橙叶片为驱动方(Driver),构建CTV侵染的锦橙的正向差减文库。【结果】随机挑选850个阳性克隆测序,其中742条测序成功,去除载体片段和接头序列后得到有效EST 692条。将所有EST序列对应到柑橘的预测基因组转录物,共涉及137个柑橘基因。应用BLAST2GO对这些特异性表达的基因进行功能归类和KEGG分析。结果表明,受CTV侵染的影响,锦橙能量代谢相关基因上调明显,与光合器官碳固定、氮代谢、淀粉和蔗糖代谢等途径相关的EST出现频率较高。另外,与抗逆防御以及苯基丙氨酸合成、类苯基丙烷代谢、类胡萝卜素合成等与植物防御素类物质合成密切相关的代谢途径相关基因较多。【结论】由于CTV的侵染,CTV易感品种锦橙基础代谢改变明显,须通过增强能量代谢和提高自身防御能力来维持自身生长和发育。(本文来源于《中国农业科学》期刊2013年16期）
李淼,李春玲,宋帅[7]（2012）在《应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因》一文中研究指出为了寻找副猪嗜血杆菌可能毒力基因,采用抑制性差减杂交技术,以HPS有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)为研究对象,构建差减杂交文库,利用Southern Blot分析和PCR鉴定进行差异基因片段的筛选。从构建的文库中共筛选得到7个特异性差异基因片段,经同源性分析,其中5个片段分别与(本文来源于《中国畜牧兽医文摘》期刊2012年11期）
刘蕾,徐进,许景升,张丽勍,张昊[8]（2012）在《应用抑制性差减杂交法筛选植物青枯菌致病相关基因》一文中研究指出植物青枯菌(Ralstonia solanacearum)致病力分化菌株 Po82 兼具 2 号小种和 NPB(非香蕉致病)菌株的致病特征。为了研究该菌株致病力分化机理,本实验以 Po82 为待测菌株,构建了抑制性差减杂交文库。建库质量分析结果表明,具有较高的接头连接以及文库构建效率,插入片段平均长度为 300 bp,文库构建质量较好。对文库中随机挑取阳性克隆进行测序,共筛选出 44 个 Po82 菌株差异基因。生物信息学分析结果表明,所得差异基因主要涉及新陈代谢、转座酶、膜结构、分泌蛋白、毒力、转录因子以及未知功能等。利用基因敲除技术对其中的 c00283 基因功能进行了研究,结果表明,该基因在 Po82 菌株致病过程中起重要作用。半定量 RT-PCR 结果表明,c00283 基因在 hrp 诱导培养基中的表达情况与 hrpB 基因一致,初步确定其为Ⅲ型分泌系统效应子。基础生物学实验结果表明,该基因对 Po82 菌株的生长、生物膜形成及运动性没有影响。青枯菌 Po82 菌株抑制性差减杂交文库的构建及致病相关基因的功能分析,为后续致病力分化的分子机理研究提供基础材料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2012年07期）
李淼,李春玲,宋帅,杨冬霞[9]（2012）在《应用抑制性差减杂交筛选副猪嗜血杆菌4型菌株可能毒力基因》一文中研究指出为了寻找副猪嗜血杆菌可能毒力基因,采用抑制性差减杂交技术,以HPS有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)为研究对象,构建差减杂交文库,利用Southern Blot分析和PCR鉴定进行差异基因片段的筛选。从构建的文库中共筛选得到7个特异性差异基因片段,经同源性分析,其中5个片段分别与噬菌体重组蛋白、糖基转移酶/荚膜多糖磷酸转移酶、磷酸核糖甲酰甘氨脒合酶、核糖体蛋白丙氨酸转移酶和ABC型硝酸盐/磺酸盐/碳酸氢盐转运系统周质蛋白等编码的基因有同源性;2个差异基因片段与功能未知蛋白或假定蛋白编码基因有关。利用PCR对上述可能与毒力相关的差异基因片段在9种不同血清型HPS中的分布进行了检测,结果表明,7个片段存在于多数的有毒力菌株(血清4,5,12,14,15型)中,而在无毒力菌株(血清3,11型)中均未检测到。利用SSH技术成功构建了HPS有毒力菌株SW124和无毒力菌株H465的差异表达基因差减文库,筛选获得了7个差异基因片段,且上述片段在HPS不同血清型有毒力菌株中分布广泛。(本文来源于《华北农学报》期刊2012年01期）
吴红珍,张林波[10]（2012）在《全细胞差减筛选法在噬菌体展示文库筛选中的应用》一文中研究指出全细胞差减筛选法是近年来在细胞筛选的基础上发展起来的一项筛选技术,其利用成对的细胞,即两种不同状态的细胞对噬菌体展示文库进行差减筛选,主要用于筛选新的抗原表位、受体、配体、新型疫苗、肿瘤细胞的靶向活性肽、靶向基因载体及受体或酶的激动剂或抑制剂等。本文就其筛选的原理、优缺点、优化及其在噬菌体展示文库筛选中的应用作一综述。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2012年02期）
差减筛选论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对测序结果进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果显示:对PSC-CW和PSC-AW文库进行扩增,分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR鉴定结果表明,这些克隆均插入200~1 000bp片段。测序结果显示从PSC-CW和PSC-AW SSH文库中分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个出现频率较高的基因,其余12个基因仅出现1次,其中5个为未知基因,已知基因分别编码细胞色素C氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白质。PSC-AW SSH文库中得到10个基因,其中2个出现频率较高基因,8个基因仅出现1次,4个为未知基因,6个已知基因分别编码基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白质。本研究筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运功能的相关基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
差减筛选论文参考文献
[1].王阔鹏,于凌娇,刘倩宏,刘麒,张履冰.噬菌体展示布鲁氏菌蛋白文库构建及差减筛选融合蛋白[J].中国人兽共患病学报.2019
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论文知识图
