双靶向嵌合受体PD1-DAP10&NKG2D修饰NK92细胞的构建及其抑癌效果研究

论文摘要

背景近年来,肿瘤免疫细胞治疗因其显著的疗效而在肿瘤治疗中大放异彩,开启了肿瘤治疗的新纪元。目前,以嵌合抗原受体T细胞治疗（CAR-T）为代表的肿瘤免疫疗法大获成功,在血液系统恶性肿瘤的临床治疗展现出良好的靶向性、有效性和安全性,但是CAR-T对于实体瘤治疗效果不理想并且存在引发细胞因子风暴的风险。而自然杀伤（NK）细胞具有许多自身的免疫特性和优势,因此大家对NK的研究越来越多,通过嵌合受体修饰增强其肿瘤杀伤能力,NK细胞有望成为治疗实体瘤的新利器。目的构建一种新型PD-L1与MICA/B双靶向嵌合受体,以期提高NK92细胞对胃癌细胞的特异性识别和杀伤能力。方法采用全基因合成技术获得一种高激活型双靶向嵌合受体（High Activition Dual Targeting Chimeric Receptor,Ha-DTCR）,将其构建在慢病毒载体pCDH上。采用慢病毒转染法,将目的基因稳定转染到NK92细胞株中,简称Ha-DTCR,转染成功后,通过qPCR对转染成功的目的基因在mRNA水平进行鉴定,同时通过流式细胞术对构建成功的目的基因在蛋白表达水平进行鉴定,对改造后的NK92的各种表型进行分析验证,通过CCK-8增殖实验检测转染后对细胞增殖的影响。在体外,通过荧光素酶法比较NK92与Ha-DTCR对胃癌细胞SGC-7901的杀伤效果。在体内,通过NOG小鼠移植瘤模型验证Ha-DTCR对于胃癌细胞SGC-7901的抑瘤效果。结果1、成功合成双靶向转换受体编码基因并构建重组表达载体,稳定转染NK92细胞并表达出上述的双靶向转换受体。2、分别通过qPCR和流式细胞术完成目的基因的表达和相关表型的验证,PD1表达40%,NKG2D表达95%。并通过CCK-8增殖实验验证了Ha-DTCR细胞和未转染NK92细胞的增殖水平并无显著差异。3、体外实验中,杀伤效果在5:1比例下,Ha-DTCR实验组相比较NK92组与PCDH组对胃癌细胞SGC-7901有显著性的提高（**P<0.01）。而NK92组与PCDH组,没有显著差异。4、体内NOG小鼠实验验中,Ha-DTCR相比较于亲本NK92细胞对胃癌细胞SGC-7901的杀伤作用中,在肿瘤体积上,Ha-DTCR相比较于PBS组,有极其显著的抑瘤效果（***P<0.001）。在瘤重之间的比较中,Ha-DTCR相比较于PBS组有明显差异（**P<0.01）。结论成功构建一种表达高激活型双靶向嵌合受体PD1-DAP10&NKG2D的NK92细胞（即Ha-DTCR细胞）,并通过体内、外实验证明Ha-DTCR细胞对胃癌细胞SGC-7901表现出及其显著的杀伤作用和抑瘤效果。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1.实验材料与方法
• 2.实验结果
• 3.讨论
• 4.结论
• 参考文献
• 综述:NKG2D激活性受体介导NK细胞抗瘤免疫治疗的研究
•   参考文献
• 附录 中英文对照表
• 攻读学位期间发表文章及专利情况
• 致谢
• 简介

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李明风

导师: 朱武凌

关键词: 细胞,免疫治疗,胃癌细胞

来源: 新乡医学院

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,生物学,肿瘤学

单位: 新乡医学院

分类号: R735.2;Q78

DOI: 10.27434/d.cnki.gxxyc.2019.000203

总页数: 68

文件大小: 2014K

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