解淀粉芽孢杆菌psd基因过表达对胞苷发酵的影响

论文摘要

以解淀粉芽孢杆菌BG-09（Bacillus amyloliquefaciens BG-09）为出发菌株,分析代谢途径中与细胞膜渗透性有关的基因psd,研究过表达基因psd对胞苷发酵的影响。以解淀粉芽孢杆菌BG-09基因组为模板克隆psd,构建了含psd的重组质粒pHT43-psd,通过化学转化法转入菌株大肠杆菌DH5α,验证成功后将其转入B.amyloliquefaciens BG-09,获得重组菌株B.amyloliquefaciens BG-09-psd。将B.amyloliquefaciens BG-09-psd菌株通过摇瓶发酵,研究过表达基因psd对菌体的生长、胞苷和尿苷产量积累的影响。结果显示,重组菌株B.amyloliquefaciens BG-09-psd发酵液中胞苷浓度为1.199 g/L,与对照菌株B.amyloliquefaciens BG-09相比,提高了15.51%,尿苷浓度为0.552 g/L,增加了6.56%,表明过表达基因psd可促进胞苷的积累。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料与仪器
•   1.2 实验方法
•     1.2.1 引物设计与合成
•     1.2.2 解淀粉芽孢杆菌基因组DNA的提取
•     1.2.3 psd基因克隆
•     1.2.4 TA克隆载体构建
•     1.2.5 重组载体构建
•     1.2.6 解淀粉芽孢杆菌电转化感受态细胞的制备及转化
•     1.2.7 重组质粒的诱导表达
•     1.2.8 工程菌摇瓶发酵试验
•     1.2.9 菌体密度测定
•     1.2.10 发酵液中残糖测定
•     1.2.11 胞苷产量测定
•   1.3 数据处理
• 2 结果与分析
•   2.1 psd基因上下游扩增及TA克隆载体构建
•     2.1.1 psd基因上下游片段扩增
•     2.1.2 TA克隆载体鉴定
•   2.2 重组载体pHT43-psd的鉴定
•   2.3 电转化法转化B. amyloliquefaciens BG-09
•   2.4 重组质粒（B. amyloliquefaciens BG-09-psd）的诱导表达
•   2.5 重组质粒对菌体生长与耗糖的影响
•   2.6 重组质粒对胞苷积累的影响
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵贝贝,方海田,刘慧燕,马若霜,马江涛,李金娜,王茹

关键词: 解淀粉芽孢杆菌,基因,过表达,发酵,胞苷

来源: 食品工业科技 2019年19期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室,宁夏大学农学院

基金: 国家自然科学基金项目(31301542,31560445),中央财政支持地方高校改革发展资金-食品学科建设项目(2017),宁夏食品微生物应用技术与安全控制重点实验室平台建设项目(2018)

分类号: Q78

DOI: 10.13386/j.issn1002-0306.2019.19.021

页码: 122-128

总页数: 7

文件大小: 2786K

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