垩唑霉素生物合成的反式酰基转移酶具有底物宽泛性

论文摘要

垩唑霉素生物合成中的聚酮合酶（PKS）均缺少酰基转移酶（AT）功能域,在聚酮合酶外含有两个独立的反式AT OzmM和OzmC。对反式AT的敲除及回补实验证明两个反式AT是垩唑霉素合成所必需的。AT的功能是将延伸单元丙二酰辅酶A或者甲基丙二酰辅酶A传递到酰基载体蛋白（ACP）。为了研究OzmM和OzmC在垩唑霉素生物合成中的功能,本研究以OzmM蛋白和PKS蛋白OzmK为研究对象,研究了反式AT是否和PKS蛋白存在相互作用及反式AT将延伸单元传递给ACP后是否仍和PKS蛋白存在相互作用。为确定OzmM的功能,本研究在大肠杆菌BL21（DE3）中表达了OzmM蛋白并对其纯化进行体外实验,并且利用亲和共纯化和生物膜干涉技术验证了OzmM和OzmK之间的相互作用。本研究推测当OzmM将底物传递给ACP后会离开PKS蛋白,不参与延伸单元与聚酮主链的缩合反应,并且反式AT （OzmM）与PKS （OzmK）之间的弱相互作用是反式AT在ACP与PKS之间快速传递延伸单元的功能所必须的。另一个反式AT OzmC的功能为传递甲氧丙二酰ACP到OzmJ-ACP,本研究利用丙二酰辅酶A、甲基丙二酰辅酶A对其底物宽泛性进行研究,发现OzmC可以将丙二酰辅酶A传递给OzmQ-ACP,但不可以传递甲基丙二酰辅酶A。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 OzmM蛋白功能的体外验证
•     1.1.1 丙二酰辅酶A和甲基丙二酰辅酶A可以引起Ozm M蛋白二级结构的改变
•     1.1.2 OzmM蛋白可以将丙二酰辅酶A传递给Ozm Q-ACP
•   1.2 OzmM蛋白和OzmK蛋白相互作用的研究
•     1.2.1 OzmM蛋白和OzmK蛋白存在相互作用
•     1.2.2 丙二酰辅酶A使OzmM和OzmK蛋白相互作用变弱
•   1.3 OzmC底物宽泛性的研究
•     1.3.1 丙二酰辅酶A和甲基丙二酰辅酶A使Ozm C蛋白二级结构发生改变
•     1.3.2 OzmC蛋白可以将丙二酰辅酶A传递给Ozm Q-ACP
• 2 讨论
•   2.1 反式AT与PKS蛋白OzmK相互作用的研究
•   2.2 研究相互作用的意义
•   2.3 反式AT底物的宽泛性
• 3 材料与方法
•   3.1 实验材料
•   3.2 CD谱的测定
•   3.3 Ozm M、OzmC蛋白生化反应的验证
•   3.4 OzmM蛋白和OzmK蛋白相互作用的判定
•   3.5 OzmM蛋白和OzmK蛋白平衡解离常数的测定
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李金雪,赵亚伟,梁晶丹,汪志军

关键词: 反式,蛋白,共纯化,生物膜干涉技术,底物宽泛性

来源: 基因组学与应用生物学 2019年11期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学

单位: 上海交通大学生命科学技术学院

基金: 973项目(No.2015CB554203)资助

分类号: Q55

DOI: 10.13417/j.gab.038.005058

页码: 5058-5065

总页数: 8

文件大小: 1661K

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