布鲁氏菌OMP22蛋白的原核表达、纯化及其对巨噬细胞炎性反应因子mRNA表达的影响观察

论文摘要

目的原核表达布氏杆菌OMP22蛋白并观察其对巨噬细胞炎性因子mRNA表达的影响。方法在GenBank中查找牛型布鲁氏菌Omp22基因序列并进行引物设计,以其疫苗的全基因组DNA为模板PCR扩增Omp22基因,扩增产物克隆入PEASY-T3载体后测序,测序正确的基因片段与载体pET-32a（+）连接,构建重组表达质粒pET-32a-Omp22,转化感受态细胞BL21（DE3）后,通过IPTG诱导表达融合蛋白OMP22。用胶回收纯化的目的蛋白作用于小鼠巨噬细胞RAW264.7并检测其相关炎性因子mRNA水平。结果结果表明成功构建了布鲁氏菌Omp22蛋白的表达载体,转化DE3后经IPTG诱导表达约35×103的目的蛋白,与预期大小相符。Western blot检测该蛋白能被His抗体识别。用纯化的OMP22刺激小鼠巨噬细胞,其IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等炎性因子表达水平显著降低。结论 OMP22蛋白能降低巨噬细胞的炎性反应表达,为布病的进一步研究提供了理论依据。

论文目录

• 材料与方法
•   1 材料
•     1.1 菌株、质粒及细胞
•     1.2 主要试剂
•   2 方法
•     2.1 引物设计与合成
•     2.2 Omp22基因扩增与回收
•     2.3 Omp22基因的克隆与序列测定
•     2.4 重组质粒pET-32a-Omp22的构建及鉴定
•     2.5 目的蛋白的诱导表达及纯化
•     2.6 目的蛋白的Western blot鉴定
•     2.7 Omp22蛋白对小鼠巨噬细胞相关因子mRNA表达的影响
• 结 果
•   1 Omp22基因的PCR扩增与克隆
•   2 重组质粒pET-32a-Omp22的构建及鉴定
•   3 Omp22重组蛋白的表达及纯化
•   4 Omp22重组蛋白的Western blot检测
•   5 重组蛋白Omp22对小鼠巨噬细胞炎性因子mRNA表达的影响
• 讨 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 徐鹏鑫,徐瑞媛,杜军,郝秀静

关键词: 布鲁氏菌,基因,巨噬细胞

来源: 中国病原生物学杂志 2019年03期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 宁夏大学生命科学学院

基金: 宁夏重点研发东西部合作项目(No.2017BN04),宁夏高等学校一流学科建设(生物学)资助项目(No.NXYLXK2017B05),国家自然科学基金项目(No.31560678),宁夏回族自治区科技支撑计划[No.2013ZYN220(4130397)]

分类号: S852.614

DOI: 10.13350/j.cjpb.190301

页码: 249-252+263

总页数: 5

文件大小: 505K

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