导读:本文包含了肝原代细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,小鼠,蛋白,细胞系,活性氧,激酶,厚朴。
肝原代细胞论文文献综述
贺云[1]（2018）在《微囊藻毒素LR对小鼠肝原代细胞的损伤作用及机制》一文中研究指出微囊藻毒素(Microcystin,MC)是一类具有生物活性的单环七肽化合物,由淡水蓝藻菌产生的高毒性次级代谢产物,污染湖泊水库,引发环境安全问题。MC分布广,可通过饮用水和食物链传递进入人体,其毒性效应范围广,可损害肝脏、肾脏、肠胃、皮肤等不同器官,通过消化、遗传、神经、免疫、生殖等系统对人类健康造成严重危害。肝脏作为MC累积与作用的靶器官,极易受到损害。微囊藻毒素LR亚型(MC-LR)在众多亚型中肝毒性最强,已有的研究表明其可引起肝细胞病理学改变,与肝细胞坏死、肝癌发生具有密切联系。本研究以小鼠肝原代细胞为研究对象阐明MC-LR对小鼠肝原代细胞生物学行为的影响并初步探讨其机制。本研究第一部分内容旨在探究MC-LR对小鼠肝原代细胞的损伤作用。通过分离提取出原代肝实质性细胞,以细胞形态、糖原染色和免疫组织化学等叁种方法证实了所提取细胞为实质性肝细胞,并测得MC-LR对小鼠肝原代细胞的半数致死量(IC_(50))为0.026μg/ml。之后,以不同浓度MC-LR(0.001,0.0025,0.005,0.0075和0.01μg/ml)处理小鼠肝原代细胞,48h后检测增殖、凋亡以及胞内乳酸脱氢酶(Lactate Dehydragenase,LDH)泄漏率情况。试验结果发现细胞增殖活性呈浓度依赖型降低,细胞早期凋亡增加以及胞内LDH大量泄露,证实了MC-LR能够引起肝细胞损伤。本研究第二部分旨在初步探讨MC-LR损伤小鼠肝原代细胞可能的机制。为此,检测肝细胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)水平,线粒体功能(线粒体膜电位Δψm变化和ATP水平)及DNA损伤状况(8-羟基脱氧鸟苷水平和彗星实验),并通过Realtime PCR和Werstern blot检测多个与ROS相关的基因表达水平以揭示MC-LR引起ROS改变的内在机制。结果显示MC-LR增高肝细胞内ROS水平,损伤肝细胞DNA及线粒体功能,MC-LR引起ROS改变与其影响谷胱甘肽GSH水平,SOD3、GPX1、MAOA和NOX4基因转录及蛋白表达有关。(本文来源于《福建医科大学》期刊2018-06-01）
张珊珊[2]（2018）在《虾青素对H_2O_2诱导氧化应激小鼠肝原代细胞保护作用的研究》一文中研究指出氧化应激是指当机体内外环境遭受有害刺激时,体内会产生过多的活性氧(ROS),使细胞和组织产生病理和生理反应。应用动物营养调控方式,如食入营养物质,饲料添加剂等来预防动物疾病是目前的研究热点,因此,从天然产物中寻找具有抗氧化作用的化合物并研究其保护机制,对预防动物氧化应激疾病具有重要的现实意义。虾青素是一种天然的强抗氧化剂,在动物细胞生物膜和富含脂质的组织中表现优良的抗氧化功能。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路是重要的内源性抗氧化通路,当机体细胞受到H_2O_2刺激时会激活该通路,进而调节细胞的抗氧化能力,所以本研究用H_2O_2诱导小鼠肝原代细胞建立氧化应激模型,探讨虾青素对其抗氧化能力的影响以及与Keap1-Nrf2-ARE信号通路的关系。本研究采用新型小鼠肝原代细胞分离方法,分离并培养小鼠肝原代细胞。用H_2O_2诱导细胞,建立氧化应激模型,使用流式细胞仪检测肝原代细胞的细胞活率、凋亡率和活性氧(ROS)水平的变化;生物化学法和荧光定量PCR法测定细胞中MDA、CAT、SOD、GSH-Px、γ-GCS的活性和含量的变化。Western-blot法检测细胞核中Nrf2蛋白相对表达量的变化,ELISA法和荧光定量PCR法检测细胞中Keap1、Nrf2蛋白表达量和mRNA相对表达量的变化,探讨虾青素对小鼠肝原代细胞抗氧化能力的影响及其机制。结果如下:(1)本试验建立一种稳定、高效、多得率的分离小鼠肝原代细胞方法,成功分离并培养小鼠肝原代细胞。(2)用10μmol/L H_2O_2刺激3h后,此时细胞的凋亡率、ROS和MDA含量显着提升(P<0.05),证明成功建立氧化应激模型。用5μg/mL虾青素预保护氧化应激小鼠肝原代细胞后,此时细胞的凋亡率、MDA和ROS含量显着降低(P<0.05),说明虾青素对维持氧化应激小鼠肝原代细胞的生长具有积极作用。(3)在研究虾青素对细胞的抗氧化能力时发现,与H_2O_2组相比,虾青素能够显着提升细胞中非酶抗氧化剂GSH含量(P<0.05),抗氧化酶系统中SOD、CAT、GSH-Px、γ-GCS的活性和含量(P<0.05),提升了小鼠肝原代细胞的抗氧化能力。(4)在虾青素对Keap1-Nrf2-ARE通路的研究中发现,与H_2O_2组相比,虾青素能够显着抑制细胞中Keap1和Nrf2解耦联,抑制Nrf2的核转移(P<0.05),降低细胞中Keap1、Nrf2蛋白和基因的相对表达量(P<0.05)。综上,本研究发现虾青素对H_2O_2诱导氧化应激小鼠肝原代细胞具有保护作用,此保护作用是通过抑制Keap1和Nrf2蛋白解耦联,Nrf2蛋白的核转移,进而抑制Keap1-Nrf2-ARE信号通路的激活,从而提升细胞中SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性和含量,提升小鼠肝原代细胞的抗氧化能力。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2018-06-01）
张珊珊,郑鑫,吴旻,张晓音,沈家鲲[3]（2018）在《虾青素对氧化应激小鼠肝原代细胞的保护作用》一文中研究指出试验旨在研究虾青素对过氧化氢(H_2O_2)诱导小鼠肝原代细胞产生氧化应激的影响。采用改进的原位二步灌流法提取ICR小鼠肝原代细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、活细胞率的变化,生物化学法测定细胞中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的活性变化;荧光定量PCR测定CAT、γ-GCS催化亚基(GCLC)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA相对表达量的变化,ELISA法检测细胞中Keap1、Nrf2蛋白的变化。结果表明:虾青素能够降低H_2O_2诱导小鼠肝原代细胞产生氧化应激的细胞凋亡率、MDA含量、Nrf2和Keap1 mRNA相对表达量(P<0.05),提升活细胞率、CAT和γ-GCS活性(P<0.05)、CAT和GCLC的mRNA相对表达量(P<0.05),抑制Nrf2蛋白及Keap1蛋白的表达(P<0.05)。虾青素能够促进相关抗氧化酶的活性,抑制Nrf2蛋白及Keap1蛋白表达进而抑制Keap1-Nrf2-ARE信号通路的激活。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2018年04期）
蒋丽辉,李意捷,傅志伟,崔倩,杨明[4]（2017）在《鲤鱼肝原代细胞的分离与培养方法》一文中研究指出本研究在酶消化法的基础上,通过比较不同的肝组织分离和培养条件,获得鲤鱼肝原代细胞培养的最佳培养方法和条件。首先,结合细胞数量和台盼蓝染色所得的细胞存活率,比较了胰蛋白酶消化鲤鱼肝组织的不同反应温度和时间,结果表明:肝组织用0.25%(m/V)胰蛋白酶在25℃消化40 min时细胞分离效果最好。其次,经酶消化得到的肝原代细胞粗制液,设置4种不同的细胞纯化和培养条件:1)将细胞直接重悬于含10%胚牛血清(FBS)的L-15/DMEM培养基中培养;2)以10%鲤鱼血清取代培养基中的胚牛血清重悬细胞并培养;3)将细胞经Percoll液密度梯度离心纯化后,重悬于含10%胚牛血清的L-15/DMEM培养基中培养;4)细胞经Percoll纯化后,重悬于含10%鲤鱼血清的L-15/DMEM培养基中培养。利用光学显微镜观察肝细胞的形态,进而通过HE染色法检测,结果表明经Percoll纯化后,肝细胞纯度显着提高;采用MTS/PMS法检测肝细胞的增殖情况,结果表明鲤鱼血清代替胚牛血清培养细胞,肝细胞活力显着提高。本研究将为建立稳定的毒理学肝原代细胞实验模型奠定基础。(本文来源于《渔业研究》期刊2017年01期）
刘丽,季辉,彭麟,阮祥春,吉利伟[5]（2015）在《鸡肝原代细胞药物代谢模型的建立与优化》一文中研究指出[目的]建立成年鸡原代肝细胞的药物代谢模型并对其进行优化。[方法]以改进的二步灌流法分离8~12周龄的雄性黄羽鸡肝细胞,比较在不同细胞基础培养液条件下鸡肝细胞体外培养的情况,利用倒置显微镜观察肝细胞的形态,利用MTT检测法绘制生长曲线,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,用q PCR和Western blot测定肝细胞中CYP450酶亚型CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和3种酶蛋白的表达量。[结果]离体灌流操作简便,获得的细胞存活率高达90%以上;用含0.5 mg·L-1牛胰岛素、10 g·L-1双抗(100 U·m L-1青霉素和链霉素)和体积分数为10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝细胞,贴壁培养时可见到肝细胞较为明显的分化过程,贴壁后呈上皮细胞样生长,多角形,胞浆内容物均匀丰富,细胞核清晰透亮,少数有双核,细胞生长状态良好。生长曲线和LDH活性测定结果显示:培养3~5 d时细胞状态稳定,并且在肝原代细胞培养的8 d内,CYP1A4、CYP1A5和CYP3A37 mRNA相对表达水平和蛋白的表达量没有显着差异。[结论]以改进的二步灌流法分离鸡肝细胞操作简便,分离的鸡肝原代细胞存活率高,用含0.5 mg·L-1胰岛素、100 U·m L-1青霉素、100μg·m L-1链霉素和10%胎牛血清的DMEM基础培养液体外培养鸡肝原代细胞效果最好,培养3~5 d是进行体外药物代谢等试验的最佳时机。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2015年01期）
刘曙正,Henrik,HS,段广才[6]（2013）在《p53抑制剂pifithrin-α对肝原代细胞增殖的影响》一文中研究指出目的:观察p53抑制剂pifithrin-α对肝原代细胞增殖及增殖相关蛋白表达的影响。方法:肝原代细胞分别经0、10、20和30μmol/L的pifithrin-α处理1h后,再用10nmol/LEGF诱导30、36和48h,用放射性计数法测定细胞增殖水平。另取肝原代细胞,分3组,对照组常规培养,EGF组用10nmol/L的EGF诱导,EGF+pifithrin-α组用30μmol/Lpifithrin-α和10nmol/LEGF诱导,EGF诱导24、30h后,Westernblot法检测细胞中P53、P21、CyclinD、CyclinE、pErk蛋白的表达水平。结果:pifithrin-α作用后,EGF诱导的细胞增殖水平均降低,且pifithrin-α浓度越大,增殖水平越低(F剂量=54.690,F时间=214.370,F交互=50.450,P<0.001)。与对照组比较,EGF组细胞P53、Cyc-linE蛋白表达水平未发生变化,但P21、CyclinD及pErk表达水平升高(P<0.05),EGF+pifithrin-α组细胞P21、CyclinD及pErk蛋白表达水平较EGF组降低(P<0.05)。结论:P53蛋白可能通过激活MAPK信号通路、上调Cy-clinD表达,从而发挥促进肝原代细胞增殖的作用。(本文来源于《郑州大学学报(医学版)》期刊2013年03期）
王楠楠,谷利,杨荟敏,张红[7]（2012）在《代谢型谷氨酸受体5在小鼠肝原代细胞和肝癌细胞中的表达及作用》一文中研究指出目的代谢型谷氨酸受体5(mGlu5)在肝组织中具有表达,并且在肝脏的病理过程中发挥重要的调节作用。本课题组以往的研究结果表明,mGlu5的激动剂和阻断剂影响人肝癌细胞系HepG2的生长、凋亡、浸润和转移等功能,提示mGlu5在肝癌的形成和发展中发挥一定的作用。为进一步验证mGlu5在肝癌中的作用,本研究在此基础上选用小鼠肝原代细胞和小鼠来源的肝癌细胞系Hepa1-6为实验模型,通过比较mGlu5在两者中的表达及功能的差异,深入探讨mGlu5影响肝癌的内在机制。方法采用噻唑蓝法、免疫印迹法分别检测了mGlu5对小鼠肝癌细胞活力的影响,两种细胞中mGlu5的表达及mGlu5的功能。结果在小鼠肝原代细胞和肝癌细胞中均有mGlu5的表达,在肝癌细胞中的表达量高于小鼠肝原代细胞;激活Hepa1-6中的mGlu5所需DHPG(mGlu5的激动剂)剂量低于激活小鼠肝原代细胞中mGlu5所需剂量;激活mGlu5促进ERK信号通路激活,在Hepa1-6细胞中,100μmol/L DHPG即可使ERK信号通路激活,而在小鼠肝原代细胞中,激活ERK信号通路需要300μmol/LDHPG。激活mGlu5不影响两种细胞中的JNK以及p38信号通路。激活mGlu5能增加Hepa1-6细胞活力。结论mGlu5在肝细胞和肝癌细胞中的表达及功能存在差异,此差异可能是肝细胞癌发生发展的原因之一。(本文来源于《疾病监测》期刊2012年03期）
刘曙正[8]（2012）在《P53蛋白促进大鼠肝原代细胞增殖的机制》一文中研究指出1.目的：p53基因与肿瘤的发生密切相关,在所有恶性肿瘤中,50%以上会出现该基因的突变。人们普遍认为P53起到抑制细胞增殖的作用,但在肝细胞中发现抑制P53功能的同时也抑制了细胞增殖。提示P53对于细胞增殖具有促进作用。最近有文献报道P53是人源性或鼠源性TGFa的转录起始因子,同时P53也可以激活MAPK途径,提示P53有促进细胞增殖作用。本研究主要探索P53促进细胞增殖的机理。2.方法：2.1细胞提取和培养雄性成年Wistar大鼠,重200～220克,饲养在12小时阳光12小时黑夜条件下。肝原代细胞使用改良的体外胶原酶灌注两步分离术提取。细胞死亡由台盼蓝染色计数。细胞种植密度为20000个/cm2。无血浆培养液由Williams Medium E培养基和Dulbecco's modified Eagle's medium按等比例混合,最终葡萄糖浓度为8.4mmol/L。培养基中加入青霉素(67mg/L),链霉素(100mg/L),地塞米松(25nmol/L)和胰岛素(100nmol/L)。在种植前3个小时使用5%血浆培养基培养。然后使用无血浆培养液培养在37℃,5%C02条件下。实验使用10nmol/L的EGF刺激细胞。2.2Western Blotting检测蛋白培养的肝原代细胞使用Tris-lysis buffer (pH7.4,含60mmol/L的Tris-HCl,10%甘油,3%的硫酸钠(SDS), lmol/L的EDTA,0.2mmol/L的AEBSF,20μmol/L亮肽素,200U/mL的抑肽酶,65μmol/L钒酸钠和10mmol/L的β-甘油磷酸)裂解。然后裂解液进行超声。所有样本的蛋白浓度使用DC protein assay检测(Bio-Rad, Hercules, CA, USA),并调整到相同浓度,最终加入p-巯基乙醇和溴酚蓝并使它们的浓度分别为5%和0.0025%。样品煮上4分钟并贮存于-20℃条件下。样品蛋白进入凝胶电泳分离并转移至硝化纤维膜上进行随后的分析。硝化纤维膜使用含5%牛奶的Tris-buffered saline溶液封闭,然后使用含1%牛奶的Tris-buffered saline的一抗溶液4℃孵育过夜。实验中使用以下抗体：鼠源性的抗Cyclin E抗体和抗P53抗体,购自Cell Signalling Technology公司,兔源性的抗Cyclin D1抗体和鼠源性的抗P21抗体,购自Upstate Biotechnology公司,抗Thr202/204位点磷酸化的Erk抗体和抗CDK4抗体,购自Cell Signalling Technology公司,鼠源性抗(3-tubulin抗体,购自Sigma-Aldrich公司,购自Fitzgerald公司,兔源性抗pYl173位点磷酸化的EGF受体抗体。冲先后,硝化纤维膜孵育二抗溶液90分钟,二抗为HRP连接的山羊源性抗兔IgG抗体和驴源性抗鼠IgG抗体及驴源性抗绵羊性IgG抗体,购自Sigma Aldrich公司。荧光使用加强的化学荧光(ECL)法检测。2.3放射渗入法检测细胞增殖肝细胞在六孔板上如上培养。细胞种植后48小时加入氚标记的胸苷(1μCi/ml)。 DNA合成程度由检测到的细胞吸收的放射性胸苷来表示。六孔板由叁氯乙酸冲洗两次,每次10分钟。剩下的细胞由0.3ml的1mol/L KOH溶解,放射性由液体闪烁仪计数。蛋白浓度测定如上2.4ELISA检测TGFa浓度收集培养液并根据ELISA法说明步骤检测TGFa(灵敏度为5pg/ml)浓度。将针对TGFa膜外部分抗原决定族和整个TGFa分子抗原决定族的多克隆抗抗体固定到检测板上(捕获抗原),冲洗检测板,将同量的不同组的样品与羊抗人源性的TGFa抗体混合,然后加到检测板上。3小时孵育后,冲洗检测板3次后漂洗1次去除未与检测板结合的物质。链霉卵白素-过氧化物酶孵育样本30分钟。冲洗3次和漂洗1次后,在无光环境下发色底物邻苯二胺孵育样本后使用硫酸终止反应。使用TGFa干粉和蒸馏水及缓冲液配制的250,125,and63pg/ml及其它合适浓度溶液作为标准浓度,分光光度计在490nm检测样本浓度。为了排除操作过程中溶液含有影响检测的因子,同时检测由缓冲液和操作溶液等比例混合配制的浓度为63,125,250pg/ml和其它合适浓度的标准液。所有的检测使用相同的处理步骤。2.5免疫荧光检测蛋白细胞内分布4%甲醛溶液固定新鲜的细胞样品10min。PBS溶液冲洗2×10min后,室温干燥30min,待样品表面无多余液体后加一抗至细胞表面,置于湿盒内,室温孵育过夜。然后PBS溶液冲洗2×10min,加荧光标记二抗溶液至细胞表面,置于湿盒内,室温孵育1小时。然后PBS溶液冲洗2×10min,室温干燥30min,待样品表面无多余液体后,将盖玻片固定在载玻片表面,使用共聚焦显微镜进行观察(60×油镜)。3结果3.1P53与细胞增殖1)EGF刺激细胞后激活P53功能在培养液中添加EGF刺激细胞24小时或30小时后,细胞中P21的表达升高；而P53抑制剂pifithrin-α可以完全阻断EGF诱导生成P21。上述结果表明EGF刺激细胞后可激活P53,进而促进转录生成P21。2) Cyclin D的表达依赖P53激活在培养液中添加EGF刺激细胞24小时和30小时后,细胞中Cyclin D的表达升高,而P53抑制剂pifithrin-α可以阻断此一过程。结果显示Cyclin D的生成依赖P53的激活。3)P53与细胞增殖的剂量反应关系按在肝细胞EGF刺激1小时前使用P53抑制剂及抑制剂浓度分组,细胞受EGF刺激30小时后使用放射渗入法检测各组细胞的增殖水平。结果显示P53抑制剂pifithrin-α可以抑制EGF诱导的肝细胞增殖,pifithrin-α浓度与细胞增殖存在剂量反应关系,当pifithrin-α浓度高至30μmol/L时,将完全抑制肝细胞的增殖。4)P53与细胞增殖的时效关系按加入P53抑制剂pifithrin-α到细胞培养液的时间点分组,EGF刺激30小时后使用放射渗入法检测各组细胞的增殖水平。在EGF刺激细胞1小时前或第12小时使用pifithrin-α,肝细胞增殖将会完全受到抑制,而第24小时使用pifithrin-α则细胞增殖受到部分抑制。结果显示,P53激活对细胞增殖的影响主要发生在EGF刺激细胞12小时后。3.2P53促进细胞增殖的机制1)细胞分泌TGFα依赖P53激活EGF刺激肝细胞后24小时收集培养液,使用ELISA检测培养液中TGFα的水平(以叁次实验结果的均数表示)。结果显示在未给予EGF刺激的肝细胞培养液中TGFα于8pg/ml,而在EGF刺激的肝细胞培养液中TGFα为38.24pg/ml。而如果在给予EGF刺激前1小时应用P53抑制剂pifithrin-α,则培养液中的TGFα为12.3pg/ml。所以EGF刺激细胞分泌TGFα依赖P53的激活。2) TGFα与细胞增殖的剂量反应关系EGF刺激细胞30小时后使用放射渗入法检测细胞的增殖水平。按在肝细胞EGF刺激1小时前使用中和抗体及抗体种类浓度分组,检测各组细胞的增殖情况。结果显示TGFα中和抗体可以抑制肝细胞增殖,而当TGFα中和抗体浓度高至0.5mg/L时,将完全抑制肝细胞的增殖。说明肝细胞自分泌的TGFα和细胞增殖存在剂量反应关系。分别将对照抗体和TGFα中和抗体与EGF混合溶解于100u1培养液中,1小时后将此混合液分别加入正常的肝细胞培养液中,10分钟后使用WESTERN BLOTTING法检测细胞的EGF受体和ERK1/2的磷酸化水平。结果显示,TGFα中和抗体与EGF的混合液并未影响EGF受体和ERK1/2的磷酸化水平,说明TGFα中和抗体与EGF并未发生特异性的交叉反应。3) TGFα与细胞增殖的时效关系在EGF刺激细胞后不同时间加入TGFα抗体中和培养液中细胞分泌的TGFα, EGF刺激30小时后使用放射渗入法检测各组细胞的增殖水平。结果显示,在EGF刺激细胞1小时前或第12小时使用TGFα中和抗体,肝细胞增殖将会完全受到抑制,而在第24小时使用TGFα中和抗体,则细胞增殖受到部分抑制。说明细胞分泌的TGFα主要在EGF刺激细胞12小时后起作用,与P53促进细胞增殖具有相同的时效关系,提示P53通过TGFα促进细胞增殖。3.3TGFα促进细胞增殖的机制1) TGFα促进Cyclin D表达TGFα促进细胞增殖的作用主要发生在EGF刺激细胞12小时后,因此在EGF刺激细胞12小时后加入培养液TGFα中和抗体,在24小时和30小时收获细胞。结果显示,TGFα中和抗体抑制Cyclin D的表达,说明细胞分泌的TGFα起到促进Cyclin D表达的作用。证实了P53抑制Cyclin D的表达是通过TGFα实现的。2) TGFα促进Cyclin D细胞核内分布Cyclin D的功能也依赖其在细胞内的分布,当EGF刺激细胞30小时后,Cyclin D和CDK4均位于细胞核内,而如果不给予细胞EGF刺激,则Cyclin D和CDK4均位于细胞质内。当使用鼠源性的TGFα单克隆抗体中和培养液中细胞分泌的TGFα后,Cyclin D口CDK4与不给予EGF刺激细胞的情况相似,仍位于细胞质中未进入细胞核内,说明细胞分泌的TGFα起到促进Cyclin D和CDK4细胞核内聚集的作用。4.结论EGF刺激肝原代细胞后可引起P53蛋白激活,P53进入细胞核后促使TGFα基因进行转录,转录生成的TGFα可由细胞分泌到细胞外,TGFα可与EGFR受体结合刺激细胞,诱导Cyclin D蛋白合成和细胞核内聚集,促进细胞增殖。(本文来源于《郑州大学》期刊2012-03-01）
马沛[9]（2011）在《白藜芦醇、和厚朴酚、黄芩苷对羊肝原代细胞Angptl6 mRNA表达影响》一文中研究指出血管生成素样蛋白6因其分子结构和氨基酸序列与血管生成素极为相似而得名。Angpt16可抑制糖异生通路,防止在脂肪肝脏沉积从而调节脂代谢。白藜芦醇是含有芪类结构的天然多酚类化合物,白藜芦醇有抗衰老作用并且在抗癌、抗炎、降低血糖和保护心血管上有一定效果。高剂量(3-5g)的白藜芦醇能提高能量消耗,降低血糖。和厚朴酚为中药厚朴的提取物,也是厚朴中主要的活性物质。和厚朴酚能降低胆固醇,抑制低密度脂蛋白氧化物的产生和防止动脉粥样硬化的形成。黄芩苷是黄芩中的一类黄酮类化合物,黄芩苷有抑菌、利尿、抗炎、抗变态、解痉挛、抗血小板聚集、降血脂等作用。本文根据牛、猪、马的Angpt16基因序列,设计并合成两对特异性引物。从羊肝中提取总RNA,通过分子生物学方法克隆得到Angptl6基因片段,将不同浓度(40μM、20μM和10μM)的白藜芦醇、和厚朴酚和黄芩苷叁种药用植物提取物单体加入羊肝原代培养细胞培养基,以Angptl6基因为靶点,通过荧光定量PCR法测定Angpt16 mRNA的表达。从基因的角度初步探讨叁种提取物对与代谢有关基因的调节作用。结果如下：1、提取的羊肝总RNA纯度好,结构完整,扩增出的特异性片段大小和预期吻合,测序结果提交Genbank,为荧光定量试验打下基础。用DNAsis软件进行同源性分析发现,与人、牛、野猪、狗和熊猫的序列同源性依次为86%、97%、94%、93%、89%,对今后研究Angpt16基因有指导意义；2、采用胶原酶双灌注法分离羊肝细胞总量为(2.065±0.485)×108个(nn=4)产率为1.032x107个/克肝组织。用0.4%台盼蓝染色试验所得到的羊肝细胞即时存活率为(86.42±2.57%)。肝细胞形态结构完整,活力好。细胞上清液中,前五天LDH含量高,高达87U/L,羊肝细胞经过自我修复,第五天后,LDH浓度逐渐降低恢复平稳,约至51U/L,说明此时细胞生长状态良好,细胞膜完整性好。上清液中BUN浓度一直维持稳定。培养的细胞可维持良好的尿素氮合成。ALB浓度在前五天一直上升,此时细胞白蛋白分泌增加。第六天开始下降,然后趋于平稳,肝细胞内白蛋白的合成也逐渐稳定。组织块培养法与灌注法相比,操作简单,但成功率较低,细胞生长速度较慢,前期培养时血细胞等组织碎片较多。3、荧光定量PCR熔解曲线为单一峰。白藜芦醇40gM和20μM组的Angpt16 mRNA水平显着高于正常组(P<0.05),白藜芦醇10μM组Angpt16 mRNA水平与正常组差异不显着(P>0.05)。和厚朴酚10μM、20μM和40μM叁个剂量组的Angpt16 mRNA水平极显着高于正常组(P<0.01)。黄芩苷10μM、20μM和40μM叁个剂量组的Angpt16 mRNA水平极显着高于正常组(P<0.01)。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2011-06-14）
王晖,张杰,鲜启明,陈春霞,黄沛力[10]（2009）在《婴儿奶嘴提取液对大鼠肝原代细胞和HepG2细胞的毒性作用》一文中研究指出乳胶制品,如医用手套、婴儿奶嘴、避孕套等,存在着N-亚硝胺及亚硝基物质析出现象.对于乳胶制品中析出的N-亚硝胺及亚硝基物质,我国尚无法规加以限制,对其使用的安全性进行科学的分析更是鲜有报道.论文使用人工唾液盐溶液浸泡婴儿奶嘴,将提取液与体外培养的SD大鼠肝原代细胞、HepG2细胞作用一定时间,通过MTT实验和单细胞凝胶电泳实验,检测了婴儿奶嘴提取液对细胞存活率的影响和对DNA的损伤作用.结果显示:排除唾液盐溶液对细胞存活率的影响,婴儿奶嘴提取液与肝原代细胞和HepG2细胞作用24、48、72h,细胞存活率分别降至(85.22±13.77)%、(60.40±20.51)%、(79.28±20.08)%;(71.23±18.22)%、(69.51±16.96)%、(70.25±16.57)%,与阴性对照组(10%DEME)相比均有显着性差异(p<0.01).奶嘴提取液与肝原代细胞和HepG2细胞作用24h,尾长、Olive尾矩、尾DNA%、头尾比分别为(24.86±18.88)μm、6.60±5.99、(52.23±16.90)%、0.86±0.57;(17.48±10.87)μm、9.39±3.23、(57.94±20.94)%、0.83±0.67,显着高于阴性对照组和唾液盐溶液组(p<0.01).研究结果表明婴儿奶嘴提取液能够降低肝原代细胞和HepG2细胞存活率,且对DNA具有损伤作用.(本文来源于《生态毒理学报》期刊2009年05期）
肝原代细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
氧化应激是指当机体内外环境遭受有害刺激时,体内会产生过多的活性氧(ROS),使细胞和组织产生病理和生理反应。应用动物营养调控方式,如食入营养物质,饲料添加剂等来预防动物疾病是目前的研究热点,因此,从天然产物中寻找具有抗氧化作用的化合物并研究其保护机制,对预防动物氧化应激疾病具有重要的现实意义。虾青素是一种天然的强抗氧化剂,在动物细胞生物膜和富含脂质的组织中表现优良的抗氧化功能。Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路是重要的内源性抗氧化通路,当机体细胞受到H_2O_2刺激时会激活该通路,进而调节细胞的抗氧化能力,所以本研究用H_2O_2诱导小鼠肝原代细胞建立氧化应激模型,探讨虾青素对其抗氧化能力的影响以及与Keap1-Nrf2-ARE信号通路的关系。本研究采用新型小鼠肝原代细胞分离方法,分离并培养小鼠肝原代细胞。用H_2O_2诱导细胞,建立氧化应激模型,使用流式细胞仪检测肝原代细胞的细胞活率、凋亡率和活性氧(ROS)水平的变化;生物化学法和荧光定量PCR法测定细胞中MDA、CAT、SOD、GSH-Px、γ-GCS的活性和含量的变化。Western-blot法检测细胞核中Nrf2蛋白相对表达量的变化,ELISA法和荧光定量PCR法检测细胞中Keap1、Nrf2蛋白表达量和mRNA相对表达量的变化,探讨虾青素对小鼠肝原代细胞抗氧化能力的影响及其机制。结果如下:(1)本试验建立一种稳定、高效、多得率的分离小鼠肝原代细胞方法,成功分离并培养小鼠肝原代细胞。(2)用10μmol/L H_2O_2刺激3h后,此时细胞的凋亡率、ROS和MDA含量显着提升(P<0.05),证明成功建立氧化应激模型。用5μg/mL虾青素预保护氧化应激小鼠肝原代细胞后,此时细胞的凋亡率、MDA和ROS含量显着降低(P<0.05),说明虾青素对维持氧化应激小鼠肝原代细胞的生长具有积极作用。(3)在研究虾青素对细胞的抗氧化能力时发现,与H_2O_2组相比,虾青素能够显着提升细胞中非酶抗氧化剂GSH含量(P<0.05),抗氧化酶系统中SOD、CAT、GSH-Px、γ-GCS的活性和含量(P<0.05),提升了小鼠肝原代细胞的抗氧化能力。(4)在虾青素对Keap1-Nrf2-ARE通路的研究中发现,与H_2O_2组相比,虾青素能够显着抑制细胞中Keap1和Nrf2解耦联,抑制Nrf2的核转移(P<0.05),降低细胞中Keap1、Nrf2蛋白和基因的相对表达量(P<0.05)。综上,本研究发现虾青素对H_2O_2诱导氧化应激小鼠肝原代细胞具有保护作用,此保护作用是通过抑制Keap1和Nrf2蛋白解耦联,Nrf2蛋白的核转移,进而抑制Keap1-Nrf2-ARE信号通路的激活,从而提升细胞中SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性和含量,提升小鼠肝原代细胞的抗氧化能力。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
肝原代细胞论文参考文献
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