“下丘脑—脑干—肠脑轴”中催产素在大鼠束缚—浸水应激中的作用

论文摘要

束缚-浸水应激（Restraint Water-Immersion Stress,RWIS）是一种复合型应激模型,同时给大鼠带来身体上和心理上的刺激。该模型使大鼠被迫接受冷水的刺激,造成大鼠胃黏膜出现急性损伤、胃酸分泌的迅速增多和胃肠功能的紊乱。我们课题组早期的研究发现脑干、下丘脑和肠神经系统内的Fos及星形胶质细胞GFAP（Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP）在RWIS应激后表达明显升高,因此,我们提出了“下丘脑-迷走神经复合体-肠脑轴”神经环路参与了束缚-浸水过程。催产素是一种由垂体后叶分泌,下丘脑室旁核和视上核合成的肽类激素。已研究发现催产素（Oxytocin,OXT）可以调节孕产妇早期生活压力（比如抑郁症）的代际传递[65-68]。Lee等人研究发现鼻内给予催产素可通过催产素受体调节ERK活性,减少压力应激对大鼠海马突触可塑性和记忆的作用,表明外源性催产素可能是一种治疗有害神经认知效应的物质[69-72]。大鼠接受恐惧应激刺激时,可检测到下丘脑内的催产素的表达明显升高,表明下丘脑内催产素参与了恐惧应激过程。但关于下丘脑-脑干神经环路中OXT及OXT受体是否参与了束缚-浸水应激过程以及对肠道肌间神经丛影响,尚未见详细报道。因此,我们提出以下几个问题:1、下丘脑-脑干神经通路内催产素及催产素受体是否参与RWIS过程,在RWIS中各时间段有何变化?2、侧脑室内注射OXTR抑制剂阿托西班或者OXT对RWIS大鼠肠肌间神经丛内神经元和星形胶质细胞有何影响?3、侧脑室内注射催产素受体抑制剂阿托西班或者注射催产素后,对RWIS大鼠胃肠功能的影响?所以我们设计了如下实验:1、将大鼠分为对照组（0h）和实验组（RWIS 1h、RWIS 2h和RWIS 3h）,用免疫组织化学和Western Blot技术检测大鼠下丘脑视上核和室旁核内催产素及脑干迷走神经背核和孤束核内催产素受体的表达,以探究下丘脑-脑干神经通路内催产素及催产素受体是否参与RWIS过程?2、将大鼠分为对照组（侧脑室注射生理盐水）、OXT组（侧脑室注射OXT）和阿托西班组（侧脑室注射OXT受体抑制剂阿托西班）,用免疫组织化学和Western Blot技术检测大鼠脑干内和肠肌间神经丛内Fos、ChAT、GFAP和NOS表达,探讨催产素在束缚-浸水中的作用?3、将大鼠分为对照组、OXT组和阿托西班组,用Western Blot和ELISA技术检测大鼠肠道内骨架蛋白Claudin 1、闭合蛋白Occludin和胃黏蛋白5AC的表达影响,探究催产素对胃肠功能的影响?实验结果如下:1、与对照组相比,实验组大鼠迷走复合体内催产素受体与下丘脑室旁核和视上核内催产素的表达明显增加,且呈时间依赖性,在3h达到了最高。2、与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室注射OXT脑干（NTS、DMV）和肠神经系统中大鼠中Fos、GFAP、ChAT和NOS的表达显著升高;大鼠侧脑室注射阿托西班脑干（NTS、DMV）和肠神经系统中Fos、NOS、GFAP、ChAT的表达明显降低,表明了催产素激活了脑干和肠神经系统内胆碱能神经元和一氧化氮能神经元的活性。3、与侧脑室注射生理盐水对照组相比,侧脑室内注射OXT后,检测到骨架蛋白Claudin 1、闭合蛋白Occludin以及胃黏蛋白5AC的表达显著增多;而侧脑室内注射阿托西班后,检测到骨架蛋白Claudin 1、闭合蛋白Occludin以及胃黏蛋白5AC的表达显著降低,表明催产素对束缚浸水造成的胃黏膜损伤起到了一定的保护作用。实验结论如下:1、下丘脑（PVN、SON）内的OXT与脑干（NTS、DMV）内OXTR参与了束缚-浸水应激的过程。2、催产素激活Fos和星形胶质细胞,还激活了脑干和肠神经系统内胆碱能神经元和一氧化氮能神经元的活性。3、催产素对束缚浸水造成的胃肠黏膜损伤可以起到一定的保护作用。

论文目录

• 中文摘要
• abstract
• 符号说明
• 文献综述
•   综述 催产素在束缚-浸水应激中的研究进展
•     1 束缚-浸水应激
•       1.1 应激
•       1.2 应激引起的机体变化
•       1.3 束缚-浸水应激模型
•     2 “下丘脑-脑干-肠脑轴”与束缚-浸水应激
•       2.1 脑干与束缚-浸水应激
•       2.2 下丘脑与束缚-浸水应激
•       2.3 催产素与应激性胃黏膜损伤
•     3 肠神经系统
•       3.1 肠神经系统的结构和功能
•       3.2 肠神经系统内的闭合蛋白Occludin
•       3.3 肠神经系统内的骨架蛋白Claudin-1
•     4 胃肠功能
• 实验研究
•   实验研究一：RWIS不同时段下丘脑和脑干OXT和OXTR表达的研究
•     前言
•     1 实验材料
•       1.1 实验仪器
•       1.2 实验药品
•       1.3 实验动物
•       1.4 应激模型
•     2 实验方法
•       2.1 免疫组织化学
•       2.2 Western Blot
•     3 实验结果
•       3.1 RWIS对下丘脑OXT表达的影响
•       3.2 RWIS对脑干内OXTR表达的影响
•       3.3 Western Blot检测RWIS对肠肌间神经丛内OXTR表达的影响
•     4 讨论
•   实验研究二：OXT在RWIS中的作用机制
•     前言
•     1 实验材料
•       1.1 实验试剂和仪器
•       1.2 实验动物
•     2 实验方法
•       2.1 侧脑室埋管
•     3 实验结果
•       3.1 侧脑室注射阿托西班脑干对Fos、GFAP、NOS和ChAT表达的影响
•       3.2 侧脑室注射OXT对脑干Fos、GFAP、NOS和ChAT表达的影响
•     4 讨论
•   实验研究三：侧脑室注射阿托西班和OXT对胃肠功能的影响
•     1 实验材料
•       1.1 实验仪器
•       1.2 实验药品
•       1.3 试剂配制
•       1.4 实验动物
•     2 实验取材
•     3 Western Blot实验方法
•     4 ELISA测大鼠黏蛋白5AC
•       4.1 实验步骤
•       4.2 数据处理
•     5 实验结果
•       5.1 侧脑室注射阿托西班或OXT对肠道内Claudin-1表达的影响
•       5.2 侧脑室注射阿托西班或OXT对肠道内Occludin表达的影响
•       5.3 侧脑室注射阿托西班或OXT后胃黏蛋白5AC（MUC5AC）表达的影响
•     6 讨论
• 参考文献
• 全文小结
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王天霞

导师: 孙海基

关键词: 束缚浸水应激,下丘脑脑干肠脑轴,侧脑室注射,催产素

来源: 山东师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 山东师范大学

分类号: Q42

总页数: 83

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