Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶的酶学特性及3-氰基吡啶调控机理的研究

论文摘要

克隆和异源表达固氮菌Ensifer meliloti 1021烟酰胺酶（NAMase）,研究其酶学特性,并探究3-氰基吡啶（3-CP）对该酶的调控机制。PCR扩增获得E. meliloti 1021烟酰胺酶基因（nam）序列,构建含nam的重组质粒并导入Escherichia coli Rosetta（DE3）中异源表达,用Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,探究温度、pH、有机溶剂及金属离子对NAMase活性的影响,并对烟酰胺酶进行了固定化研究。结果显示,克隆得到长636 bp的nam,编码的蛋白分子量为22.6 kD,等电点（PI）为5.5。NAMase的最适pH为7.0,在30-50℃温度范围内孵育2 h酶活维持在97.1%以上,最适温度在30-70℃。Ag2+和异戊醇对NAMase的活性抑制率最大。在E. meliloti 1021野生菌株及NAMase过表达菌株转化烟酰胺的过程中3-CP会抑制烟酸的产量,这种效应并非底物抑制作用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 E.meliloti 1021静息转化3-CP和烟酰胺
•     1.2.2 nam克隆及其蛋白的表达与纯化
•     1.2.3酶学活性分析
•       1.2.3.1 pH对NAMase活性的影响
•       1.2.3.2 NAMase的pH稳定性
•       1.2.3. 3 反应温度对NAMase活性的影响
•       1.2.3. 4 NAMase的热稳定性
•       1.2.3. 5 金属离子对NAMase活性的影响
•       1.2.3. 6 有机溶剂对NAMase活性的影响
•       1.2.3. 7 底物特异性及催化动力学分析
•     1.2.4 野生菌株及过表达菌株的生物转化
•     1.2.5 3-CP对NAMase的调控机制研究
•     1.2.6 NAMase固定化研究
• 2 结果
•   2.1 E.meliloti 1021静息转化3-CP和烟酰胺
•   2.2 nam克隆及其蛋白的表达与纯化
•   2.3 NAMase酶学特性
•   2.4 野生菌株及过表达菌株的转化
•   2.5 3-CP对NAMase转录水平的调控
•   2.6 NAMase固定化对酶活的影响
• 3 讨论
• 4 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭静静,郭磊磊,赵云岫,戴亦军

关键词: 草木樨剑菌,静息转化,烟酰胺酶,酶学特性

来源: 生物技术通报 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学

单位: 南京师范大学中北学院,南京师范大学生命科学学院江苏省微生物与功能基因组学重点实验室江苏省微生物资源产业化工程技术研究中心

基金: 国家自然科学基金面上项目(31570104)

分类号: Q936

DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0027

页码: 51-58

总页数: 8

文件大小: 1951K

下载量: 64