slnN基因在盐霉素生物合成中的调控功能分析

论文摘要

【目的】研究盐霉素生物合成基因簇上游潜在调控基因slnN的功能。【方法】本实验利用遗传操作技术,分别对白色链霉菌出发菌株Streptomyces albus BK3-25中的slnN基因进行敲除和过表达,然后利用抑菌圈实验和发酵实验,分别检测不同衍生菌株中盐霉素生物合成产量的变化。同时利用qRT-PCR分析衍生菌株与原始出发菌株之间的结构基因表达差异。【结果】结果表明在slnN基因缺失株（slnNDM）中,盐霉素的表达水平提高了35%左右;而在slnN基因过表达株（slnNOE）中,盐霉素产量下降达43%左右。qRT-PCR分析进一步发现slnN基因缺失,会引起slnO和slnA1基因的上调;而slnN基因过表达后,一方面会下调slnO与slnA1基因的表达,另一方面引起slnT1、slnF基因上调。【结论】本研究证实slnN基因对盐霉素的生物合成具有明显的负调控作用,其机制有待进一步研究。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株、质粒与引物:
•     1.1.2 培养基:
•     1.1.3 主要试剂:
•   1.2 slnN基因敲除株和回补株的构建
•   1.3 slnN基因高表达株的构建
•   1.4 盐霉素产生菌的发酵实验
•   1.5 盐霉素发酵产物的分光光度法检测
•   1.6 盐霉素发酵产物的HPLC检测
•   1.7 盐霉素产生菌的生物指示实验
•   1.8 白色链霉菌的RNA提取、DNA消解及反转录实验
•   1.9 荧光定量PCR （qRT-PCR） 实验
• 2 结果和分析
•   2.1 slnN基因突变株的筛选与鉴定
•   2.2 slnN基因高表达株的构建与筛选
•   2.3 不同slnN基因突变株的抑菌实验
•   2.4 不同菌株的发酵实验
•   2.5 slnN基因敲除株与过表达株的qRT-PCR分析
• 3 分析和讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱振洪,李函,李永泉

关键词: 白色链霉菌,盐霉素,生物合成,基因,调控功能

来源: 微生物学报 2019年04期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,药学

单位: 浙江中医药大学生命科学学院,浙江大学药物生物技术研究所

基金: 浙江省自然科学基金(LY16C010001)~~

分类号: Q78;R91

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180241

页码: 632-641

总页数: 10

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