表达猫衣原体momp蛋白的重组狂犬病病毒SRV9-MOMP的构建与鉴定

论文摘要

为构建表达猫衣原体主要外膜蛋白（momp）的重组狂犬病病毒,以狂犬病病毒SRV9株反向遗传质粒p UC57-SRV9为骨架,在P/M基因间隔序列处插入MOMP基因,获得正确的重组全长转录质粒p UC57-SRV9-MOMP（P/M）。再将全基因组质粒与p UC57-N（SRV9）、p UC57-P（SRV9）、p UC57-G（SRV9）、p UC57-L（SRV9）4个辅助质粒共转染BSR-T7细胞系。经直接免疫荧光法验证,成功拯救出病毒SRV9-MOMP。Western-blot和RT-PCR检测表明,momp在重组病毒SRV9-MOMP感染的细胞内被稳定表达。本研究证明狂犬病病毒SRV9株具有作为载体表达外源蛋白的潜力,为研制高效、安全、经济的猫衣原体病疫苗奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒与菌株
•   1.2 主要试剂与载体
•   1.3 MOMP基因的合成
•   1.4 重组狂犬病病毒全基因组的构建
•   1.5 SRV9-MOMP病毒的拯救
•   1.6 免疫荧光观察
•   1.7 重组病毒感染细胞后MOMP表达产物的Western-blot鉴定
•   1.8 重组病毒SRV9-MOMP遗传稳定性的分析
•   1.9 MOMP遗传稳定性的鉴定
•   1.1 0 病毒生长动力学曲线的绘制
• 2 结果
•   2.1 猫衣原体MOMP-IN的PCR扩增
•   2.2 重组质粒pUC57-SRV9-MOMP （P/M） 的酶切鉴定
•   2.3 重组病毒的DFA鉴定
•   2.4 MOMP表达产物的Western-blot鉴定
•   2.5 MOMP基因遗传稳定性的鉴定
•   2.6 重组病毒SRV9-MOMP遗传稳定性的分析
•   2.7 病毒生长动力学曲线的绘制
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 阮晓凤,齐宇,张艳艳,陈腾,周鑫涛,张守峰,扈荣良

关键词: 猫衣原体,主要外膜蛋白,重组狂犬病病毒

来源: 中国兽医科学 2019年07期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学动物科学技术学院,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所

基金: 国家自然科学基金项目(31472176)

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0122

页码: 904-909

总页数: 6

文件大小: 1810K

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