导读:本文包含了反义表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转录,蛋白,细胞,肿瘤,基因,纤维,建兰。
反义表达论文文献综述
耿玉东,王树斌,卢泰青,滕薇[1]（2019）在《长链非编码RNA肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其相关功能》一文中研究指出目的分析长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及其对OSCC细胞生物行为学的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OSCC患者(55例)癌组织、癌旁正常黏膜组织及人口腔鳞状细胞癌SCC25、人正常口腔角质细胞株(NOK)细胞中lncRNA AFAP1-AS1的表达,分析AFAP1-AS1与OSCC患者病理特征的相关性,通过Kaplan-Meier生存曲线分析AFAP1-AS1与患者预后的关系。AFAP1-AS1 siRNA转染SCC25细胞,细胞计数(CCK-8)及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭的变化,蛋白质印迹(Western blot)检测侵袭相关蛋白、肌动蛋白纤维相关蛋白1(AFAP1)及Rho GTP酶家族成员蛋白的表达情况,免疫荧光染色检测细胞骨架肌动蛋白微丝结构的变化。结果 OSCC组织中AFAP1-AS1的表达高于癌旁正常黏膜组织,SCC25细胞中AFAP1-AS1的表达高于NOK细胞(P<0.001)。AFAP1-AS1的表达与OSCC的分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),AFAP1-AS1高表达患者的生存率低于AFAP1-AS1低表达者(P<0.05)。AFAP1-AS1 siRNA转染后AFAP1-AS1的表达水平下调,SCC25细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,AFAP1、RhoA、Rac2、Rab10、RhoGDI和Pfn1的表达上调,RhoC的表达下调,细胞骨架中应力纤维丝减少,肌动蛋白完整性丢失。结论 lncRNA AFAP1-AS1在OSCC组织及SCC25细胞中高表达,与OSCC的发生进展及预后相关。下调AFAP1-AS1能够抑制OSCC的增殖、迁移和侵袭能力,其可能是通过调控肌动蛋白纤维丝的完整性实现的。(本文来源于《华西口腔医学杂志》期刊2019年06期）
铁宁,王勇,满大夫,于洋[2]（2019）在《类风湿关节炎患者血清长链非编码RNA-Hox转录反义RNA表达变化及其意义》一文中研究指出目的观察类风湿关节炎(RA)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)-Hox转录反义RNA(HOTAIR)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择RA患者(RA组)132例,同期健康体检者50例(对照组)。取RA组入院第二天,对照组入院当天的空腹静脉血,采用实时RT-PCR法检测血清LncRNA-HOTAIR, ELISA法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,速率散射比浊法检测RF、CRP,魏氏法检测ESR。分析RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平与患者临床参数(DAS28,炎性指标及年龄、性别、病程、疼痛关节数)的关系。ROC分析血清LncRNA-HOTAIR水平对RA的诊断价值。结果 RA组血清LncRNA-HOTAIR、抗CCP抗体、RF、CRP、ESR水平高于对照组(P均<0.05)。RA组病情高度活动者血清LncRNA-HOTAIR水平高于中度及低度活动者(P均<0.05)。RA组血清LncRNA-HOTAIR水平与DAS28呈正相关(r=0.645,P=0.009)。血清LncRNA-HOTAIR诊断RA的ROC下面积为0.706,敏感度71%,特异度82%。结论 RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平升高,其水平变化与疾病活动程度有关,对RA的诊断准确度较高。(本文来源于《山东医药》期刊2019年33期）
刘士明,崔盼盼,丁涛,陈超,郭萌萌[3]（2019）在《反义寡核苷酸下调miRNA-21表达对人结肠癌模型体内生长的作用》一文中研究指出目的探讨反义寡核苷酸(ASOs)下调微小RNA-21(miR-21)表达的效果及其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠皮下种植瘤生长的影响。方法常规建立人HCT116结肠癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部分别注射p-miR-21-ASOs质粒和p-Cont质粒(100微克/只),并观察肿瘤生长变化。HE染色法观察肿瘤组织形态学变化;免疫组织荧光法检测Ki-67蛋白的表达;实时荧光定量PCR法检测miR-21成熟体及周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、CDK3、CDK4及CDK6的表达;Western blot法检测总Akt、ERK1/2、p-Akt、p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果与p-Cont组相比,p-miR-21-ASOs组肿瘤生长显着受到抑制(P<0.05);肿瘤细胞大面积坏死、Ki-67表达显着减少(P=0.0074); miR-21和CDK2、CDK3、CDK4及CDK6的表达均显着下调(均P<0.05);肿瘤组织中p-Akt和p-ERK1/2蛋白表达下调(P<0.05)。结论 ASOs下调miR-21表达可以显着抑制人结肠癌细胞的体内生长。(本文来源于《肿瘤防治研究》期刊2019年06期）
李晨[4]（2019）在《反义长链非编码RNA SPINT1-AS1在结直肠癌中的表达及功能机制研究》一文中研究指出研究背景:结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是恶性肿瘤导致人类死亡的重要病因之一,其在国内的发病率呈逐年上升的趋势。由于国内肠镜普及率低,缺乏高效的肿瘤标志物,民众认知程度低等原因,使结直肠癌的早期诊断困难,发现晚,预后差。天然反义转录产物(Natural antisense transcripts,NATs)作为一种已被证实影响多种恶性肿瘤发生发展的新型生物分子,发掘其作为肿瘤标志物的潜力并研究其作用机制对开发新型的肿瘤早期诊断指标物和治疗靶点具有重要意义。研究目的:研究丝氨酸肽酶抑制剂kunitz丨型反义RNA](Serine Peptidase Inhibitor Kunitz 1 Antisense RNA 1,SPINT1-AS1)在结直肠癌中的表达和临床相关性。评估SPINT1-AS1对结直肠癌的预后判断和治疗监测价值。研究方法:1基因芯片分析:利用基因芯片筛选6对结直肠癌和癌旁组织差异性表达的NATs,确定SPINT1-AS1为研究对象,并在临床大样本中验证其表达差异性。2标本收集:按照纳入标准选择150对结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织,提取组织总RNA。3SPINT1-AS1表达水平检测:利用链特异性RT-qPCR检测结直肠癌和癌旁组织中SPINT1-AS1表达水平并分析其差异。4SPINT1-AS1与其互补链的相互作用:利用双荧光素酶报告系统证明SPINT1-AS1与其互补链SPINT1 mRNA存在相互作用。5组织SPINT1-AS1表达水平对结直肠癌的预后价值:根据SPINT1-AS1表达量的中位数,将150位结直肠癌患者分为SPINT1-AS1高表达组和SPINT1-AS1低表达组,利用生存分析评估各临床参数对结直肠癌患者无病生存期(Disease-free survival,DFS)的影响。6.血清外泌体SPINT1-AS1检测:收集45对结直肠癌患者术前和术后的血液样本,分离血清外泌体,检测手术前后SPINT1-AS1的表达差异,评价其对结直肠癌手术治疗效果的监测作用。研究结果:1结直肠癌中差异表达NATs的筛选和鉴定。通过基因芯片技术对6对结直肠癌组织和癌旁组织的长链非编码RNA(Longnon-coding RNA,LncRNA)进行分析发现,SPINT1-AS1在结直肠癌组织中表达显着增高(P=00.015)。在150对结直肠癌和癌旁组织中检测SPINT1-AS1的表达,链特异性RT-qPCR结果显示,SPINT1-AS1在结直肠癌组织中的表达量明显高于癌旁组织(P<0.001),其中有116例结直肠癌组织SPINT1-AS1表达增高超过2倍。受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线显示,SPINT1-AS1的表达量可以用以区分结直肠癌组织和癌旁组织,受试者工作曲线下面积(Area under the ROC curve,AUC)为0.865(95%CI,0.821-0.902)。2 SPINT1-AS1与其正义链SPINT1 mRNA的表达呈负相关。我们在上述150对结直肠癌和癌旁组织中检测SPINT1 mRNA的表达量,发现结直肠癌组织中SPINT1 mR:NA的表达量明显低于癌旁组织(P<0.001),且SPINT1-AS1表达水平与SPINT1 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.701,P<0.001)。双荧光素酶报告基因系统证明过表达的SPINT1-AS1可以降低SPINT1 mRNA5'UTR互补区域的荧光素酶活性(P=0.020)。3结直肠癌患者的SPINT1-AS1表达量增高与结直肠癌局部淋巴结转移(P<0.001)和远处转移(P<0.001)相关。而与患者的年龄(P=0.747)、性别(P=0.218)、肿瘤位置(P=0.959)、肿瘤分化(P=0.647)、T分期(P==0.430)及肿瘤大小(P00.410)无明显相关性。4生存分析结果显示,SPINT1-AS1表达量与患者的总体生存期(Overall survival,OS)无明显相关性(HR=0.586];95%CI,0.282-1.271;P=0.152),但SPINT1-AS1高表达与患者DFS缩短有关(HR=0.2547;95%CI,0.143-0.452;P<0.001)。单变量Cox比例风险回归模型分析显示,T分期(HR=2.259;95%CI,1.013-5.036;P=0.046)、局部淋巴结转移(HR=3.657;95%CI,1.820-7.348;P<0.001)、远处转移(HR=5.606;95%CI,3.010-10.439;;P<0.001)及SPINT1-AS1 表达量(HR=4.355;95%CI,2.219-8.549;P<0.001)与患者DFS相关。多变量Cox比例风险回归模型分析显示,SPINT1-AS1表达量(HR=2.519;95%CI,1.180-5.378;P=0.017)及远处转移(HR=2.770;95%CI,1.398-5.489;P=0.003)可作为患者DFS的独立预后指标。5链特异性RT-qPCR检测血清外泌体中SPINT1-AS1及SPINT1 mRNA表达量,结果显示,SPINT1-AS1的术后表达水平较术前明显降低(P=00.001),而SPINT1mRNA表达水平无明显变化(P=0.062)。结论:1 SPINT1-AS1表达水平升高与结直肠癌患者的不良临床病理特征及不良预后相关。2 SPINT1-AS1可以作为结直肠癌的独立预后指标和治疗监测指标。研究目的:天然反义转录产物(Natural antisense transcripts,NATs)作为非编码RNA领域中的研究热点,已被证实对肿瘤的发生和发展有着重要的作用。NATs的作用和机制研究对筛选新的肿瘤标志物和寻找新的肿瘤治疗靶点有重要意义。我们在先前的研究中证明,结直肠癌组织中SPINTl-ASI的高表达和患者预后不良相关。在本课题中我们拟通过体外实验和动物实验,研究SPINT1-AS1在结直肠癌中的促癌作用和机制,并通过临床大样本评估血清外泌体SPINT1-AS1作为结直肠癌无创诊断和预后生物标志物的潜力。研究方法:1构建慢病毒载体用于过表达或敲低SPINT1丨-AS1以及过表达SPINT11mRNA,慢病毒转染结直肠癌细胞后筛选稳定转染的细胞;2 CCK-8实验检测SPINT1-AS1及SPINT1 mRNA表达水平对结直肠癌细胞增殖能力的影响;3平板克隆形成实验检测SPINT1-AS1及SPINT1 mRNA表达水平对结直肠癌细胞集落形成能力的影响;4利用过表达SPINT1-AS1的结直肠癌细胞进行裸鼠荷瘤试验,检测SPINT1-AS1在体内成瘤中的作用;5流式细胞术检测SPINT1-AS1及SPINT1 mRNA对结直肠癌细胞凋亡的影响;6TUNEL实验检测SPINTI-ASI及SPINT1 mRNA对结直肠癌细胞凋亡的影响;7流式细胞术检测SPINT1-AS1及SPINT1 mRNA对结直肠癌细胞周期分布的影响;8 Western blot和共聚焦显微镜检测SPINTI-AS1及SPINT1 mRNA对结直肠癌细胞自噬的影响;9分离过表达SPINT1-AS1后结直肠癌细胞分泌的外泌体,研究外泌体介导的SPINT1-AS1传递对结直肠癌细胞表型的调控作用;10临床大样本验证血清外泌体SPINT1-AS1作为结直肠癌诊断和预后标志物的效能。研究结果:1利用慢病毒载体构建过表达/敲低SPINT1-AS1及过表达SPINT1 mRNA的重组病毒,转染细胞后筛选得到稳定转染的结直肠癌细胞株;2 SPINT1-AS1促进结直肠癌细胞的增殖:CCK-8实验和平板克隆形成实验证明过表达SPINT1-AS1能促进结直肠癌细胞的体外增殖能力;小鼠荷瘤实验表明SPINT1-AS1高表达增强了HCT116细胞的体内成瘤能力,SPINT1-AS1高表达的HCT116细胞注射小鼠的肿瘤体积明显高于对照细胞;3 SPINT1-AS1表达量升高抑制结直肠癌细胞凋亡、促进结直肠癌细胞保护性自噬;4敲低SPINT11-AS1和过表达SPINT1 mRNA的结直肠癌细胞呈现相同的细胞表型,即过表达SPINT1 mRNA后结直肠癌细胞增殖受抑制,细胞凋亡增加,细胞保护性自噬受抑制;5外泌体介导的SPINT1-AS1转运能够促进其促癌作用的发挥;6临床大样本验证表明血清外泌体SPINT1-AS1可以作为结直肠癌无创诊断和预后判断生物标志物。结论:1 SPINT11-AS1在结直肠癌中通过负调控SPINT1 mRNA表达发挥促癌作用;2外泌体介导的细胞间通讯促进SPINT1-AS1发挥促癌作用;3血清外泌体SPINT1-AS1可以作为结直肠癌的无创诊断和预后判断 生物标志物。(本文来源于《山东大学》期刊2019-04-25）
王艳丽,陈胜利,张鹏[5]（2019）在《阿托伐他汀调节巨噬细胞载脂蛋白A1天然反义转录表达的研究》一文中研究指出目的:探讨阿托伐他汀调节人急性单核细胞白血病细胞1(THP1)诱导的巨噬细胞载脂蛋白A1(apoA1)天然反义转录(apoA1-NAT)表达的研究。方法:检索基因序列,设计引物,用不同浓度0、1、10、100 nmol/L阿托伐他汀干预THP1诱导的巨噬细胞,提取不同浓度和时间点(6、12、24、48 h)的RNA,检测apoA1-NAT、apoA1信使核糖核酸(mRNA)表达。同时检测与胆固醇代谢相关的叁磷酸腺苷绑定的盒式转运体A1(ABCA1)、清道夫受体B1 (SRB1)及低密度脂蛋白受体(LDLR)mRNA的表达。结果:THP1诱导的巨噬细胞在10 nmol/L阿托伐他汀干预24 h,apoA1-NAT表达明显降低,同时apoA1 mRNA表达量显着升高(P<0.01),ABCA1、SRB1及LDLR mRNA表达量也出现不同程度的升高(P均<0.05)。结论:阿托伐他汀抑制巨噬细胞apoA1-NAT表达的同时,可升高apoA1、ABCA1、SRB1及LDLR mRNA表达,进而能促进巨噬细胞胆固醇的外流。(本文来源于《中国循环杂志》期刊2019年04期）
赵征,李杰,丁秀娜,周磊,孙德刚[6]（2019）在《ADAM28反义寡核苷酸对人牙龈成纤维细胞内ADAM28的基因表达的影响》一文中研究指出目的探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)反义寡核苷酸对人牙龈成纤维细胞(HGFs)内ADAM28表达的抑制作用。方法设计合成与ADAM28 mRNA特异序列互补的AS-ODN和正义对照S-ODN转染HGFs后,通过RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM28的表达差异。结果 ADAM28 AS-ODN转染HGFs后,在转录、翻译和蛋白水平HGFs内ADAM28的表达均明显减弱,统计学分析有显着性差异(P<0.05)。结论 ADAM28 AS-ODN可有效阻断HGFs内ADAM28的基因表达。(本文来源于《现代口腔医学杂志》期刊2019年01期）
赵月鸣,董莹,袁红梅,邢德君[7]（2018）在《HOX转录反义RNA在乳腺癌中的表达及意义》一文中研究指出目的探讨乳腺癌组织中HOX转录反义RNA(HOTAIR)和其调控基因HOXD10的表达情况及HOTAIR基因的甲基化情况。方法对45对乳腺癌组织、癌旁组织、前哨淋巴结组织、腋窝淋巴结组织进行研究,采用实时荧光定量PCR法测定HOTAIR和HOXD10的表达情况,甲基化特异性聚合酶链反应测定HOTAIR非甲基化情况。结果乳腺癌组织中HOTAIR相对表达量(10. 22±3. 65)显着高于癌旁组织(5. 43±2. 19,P<0. 05),但两组HOXD10相对表达量比较差异无统计学意义(P>0. 05)。乳腺癌组织中HOTAIR基因非甲基化率(88. 9%)显着高于癌旁组织(44. 4%,P<0. 05)。乳腺癌组织中HOTAIR基因与Ki-67和孕激素受体呈正相关(r=0. 810、0. 623,P均<0. 05)。前哨淋巴结组织中HOTAIR相对表达量(9. 27±1. 19)显着高于腋窝淋巴结组织(6. 86±1. 24,t=3. 397,P<0. 05)。前哨淋巴结组织中HOTAIR与Ki-67和淋巴结转移率呈正相关(r=0. 803、0. 687,P均<0. 05)。结论乳腺癌组织和前哨淋巴结组织中HOTAIR基因表达水平升高,乳腺癌组织中HOTAIR与Ki-67和孕激素受体呈正相关,其调控基因HOXD10表达量无明显变化,HOTAIR基因非甲基化水平升高。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年23期）
李清春[8]（2018）在《高表达INK4位点反义非编码RNA在肾细胞癌中的功能和调控机制及维甲酸查尔酮对肾癌细胞抑制性的研究》一文中研究指出背景和目的:INK4基因位点的反义非编码RNA(ANRIL)是一种长链非编码RNA,最初是在患有家族性黑色素瘤的病人身上发现的。在那之后,越来越多的证据已经确定了ANRIL对癌症的发生和发展有影响。ANRIL编码于染色体9p21区域,并已被证明可以调节其相邻的、依赖于细胞的激酶抑制剂(CDKN)2a/2b,通过表观遗传机制来充当肿瘤抑制因子。最近,一项研究表明,CDKN2B突变可能是家族性RCC的一个新原因。因此,我们假设ANRIL可能参与了RCC的发生发展。考虑到目前学界对于ANRIL在RCC进程中的作用知之甚少,因此揭示ANRIL在RCC中的调节作用是非常重要的。维甲酸和其他类维生素a(RAs)被大量用于皮肤病的预防和治疗。在治疗癌症方面,维甲酸已经被证明具有一定的功效。众所周知,维甲酸会对几种癌症的正常细胞和异常细胞的体外增殖、分化和凋亡产生影响(结肠、前列腺、肺癌和白血病)。有报道称,所有的反式维生素酸(ATRA)和9-cis RA都会影响神经母细胞瘤和星形细胞瘤细胞的形态分化、增殖和基因表达。ATRA和13-cis RA业已被用于治疗复发性恶性脑胶质瘤。众所周知,类维生素a具有抗人类恶性神经胶质瘤扩散、转移和侵入性的活性,这表明类维生素a是一种合适的抗癌药物,可以抑制肿瘤的发展。在最新的研究中,也揭示了维甲酸酰胺与其母体化合物在人类肝癌细胞凋亡中的作用。方法:1.在临床肿瘤组织和4种RCC细胞株中,采用RT-PCR评价ANRIL的表达水平;2.转染了ANRIL过表达载体后,对细胞存活、细胞集落数、细胞凋亡、转移和肿瘤侵袭能力进行评价;3.对与细胞凋亡、上皮间质过渡(EMT)和β-catenin信号通路相关的蛋白质的表达进行了评估,同时还评价了IWR-endo(β-catenin信号通路抑制剂)对细胞活力、转移和入侵以及β-catenin信号通路蛋白表达的影响;4.为了研究维甲酸查尔酮(RAC)对细胞增殖和肾癌细胞凋亡的影响,利用MTT法和流式细胞术来检测癌细胞增殖和细胞凋亡,并检查细胞周期;5.利用westernblot和免疫组织化学方法,对肾细胞癌(RCC)和正常肾组织中的Notch1和Jagged1的表达水平进行检测。结果:1.ANRIL在RCC组织和RCC细胞系中得到了高度的表达;2.ANRIL显着促进细胞增殖、转移、入侵和EMT,但抑制细胞凋亡;3.β-catenin、Ki-67、糖原合成酶激酶3(gsk-3)、磷酸化gsk-3、T细胞转录因子4(TCF-4)和白血病增强因子1(LEF-1)的表达水平都明显受到了ANRIL的正调控;4.沉默ANRIL的生物功能与ANRIL过表达的生物功能相反。ARNIL对RCC细胞的增殖、转移和入侵的影响可以通过IWR-endo来逆转;5.在ACHN和769-p细胞中,用30μM RAC处理72 h后,处于G2/M期细胞的比例增加到45.27%和54.23%。同时,处理后的769-p和ACHN肾细胞癌凋亡的比例约为59.27%和69.71%。高于对照组的5.23%和4.93%;6.与正常的肾组织相比,在肾癌组织中,Notch1和Jagged1阳性染色率分别为95.3%和93.0%。正常肾组织则分别为36.4%和42.4%。肾癌组织的治疗在96小时后显着降低了Notch1和Jagged1的染色率。结论:1.在RCC中高度表达的ANRIL,通过激活链状途径,在RCC细胞中充当致癌物质;2.RAC可以诱导RCC在G2/M期停留,同时诱导细胞凋亡,使其成为治疗肾细胞癌的有效药物。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-12-01）
刘奎,梁丽敏,李振辉,叶浩盈,潘艳飞[9]（2018）在《CRISPR/Cas9介导的酿酒酵母ADH2基因中断及反义RNA干扰GPD1的表达》一文中研究指出CRISPR/Cas9是一个简单、高效的用于靶向目的基因和无标记的基因组工程的工具。本文通过构建酿酒酵母沉默组件PGK-SGPD1-CYC1,使甘油-3-磷酸脱氢酶I(Glycerol-3-phosphate dehydrogenase,GPD1)基因在PGK强启动子、CYC1终止子在特定区域内进行干扰和表达。应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在中断乙醇脱氢酶Ⅱ(alcohol dehydrogenase Ⅱ,ADH2)基因的同时,定点敲入GPD1基因的反义干扰组件,从而特定地干扰GPD1的表达。采用高效的酵母化学转化法将反应组件敲入酿酒酵母Y1H中,CRISPR/Cas9介导的同源重组效率达43.48%,由此获得了ADH2基因中断和GPD1反义干扰的酿酒酵母突变株。发酵实验结果表明,酿酒酵母突变菌株SG1-1与出发菌株Y1H相比,乙醇产率提高了9.07%,甘油产率下降了12.05%,乙酸产率下降了12.30%,结果表明通过中断ADH2基因及插入GPD1反义干扰组件,既能够中断ADH2基因的功能,减少乙醇转化为乙醛,同时也能在一定程度上干扰GPD1基因的表达,提高乙醇产率。(本文来源于《现代食品科技》期刊2018年10期）
梁芳,邓祖丽颖,许申平,张燕,崔波[10]（2018）在《蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建》一文中研究指出【目的】建兰花叶病毒(CyMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是侵染蝴蝶兰最主要的2种病毒,给蝴蝶兰产业造成巨大经济损失。本文建立了快速检测这2种病毒的方法,并为培育同时抗CyMV和ORSV的蝴蝶兰新品种奠定基础。【方法】根据2种病毒CP基因序列设计了2对特异性引物,运用RT-PCR方法同时检测这2种病毒,利用反义RNA技术构建2种病毒CP基因的融合表达载体。【结果】利用设计的特异性引物检测12株蝴蝶兰样品,有25%同时检测出2种病毒,在同一PCR反应体系中,扩增出2个目的条带清晰无杂带。从感病蝴蝶兰叶片总RNA中克隆出CyMV CP基因的125 bp片段和ORSV CP基因的164 bp片段。将CyMV的CP基因片段以3’→5’方向与表达载体p CAMBIA1300连接,命名为p CAMBIA1300-CyMV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得125 bp的小片段;再将ORSV的CP基因片段以3’→5’方向与p CAMBIA1300-CyMV连接,命名p CAMBIA1300-CyMV-ORSV,经酶切及菌落PCR鉴定可获得289 bp的片段。【结论】所设计的2对特异性引物能够在同一PCR体系中快速高效地检测出CyMV和ORSV,含2种病毒CP基因的反义融合表达载体构建成功。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年08期）
反义表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察类风湿关节炎(RA)患者血清长链非编码RNA(LncRNA)-Hox转录反义RNA(HOTAIR)的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择RA患者(RA组)132例,同期健康体检者50例(对照组)。取RA组入院第二天,对照组入院当天的空腹静脉血,采用实时RT-PCR法检测血清LncRNA-HOTAIR, ELISA法检测抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,速率散射比浊法检测RF、CRP,魏氏法检测ESR。分析RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平与患者临床参数(DAS28,炎性指标及年龄、性别、病程、疼痛关节数)的关系。ROC分析血清LncRNA-HOTAIR水平对RA的诊断价值。结果 RA组血清LncRNA-HOTAIR、抗CCP抗体、RF、CRP、ESR水平高于对照组(P均<0.05)。RA组病情高度活动者血清LncRNA-HOTAIR水平高于中度及低度活动者(P均<0.05)。RA组血清LncRNA-HOTAIR水平与DAS28呈正相关(r=0.645,P=0.009)。血清LncRNA-HOTAIR诊断RA的ROC下面积为0.706,敏感度71%,特异度82%。结论 RA患者血清LncRNA-HOTAIR水平升高,其水平变化与疾病活动程度有关,对RA的诊断准确度较高。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反义表达论文参考文献
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