导读:本文包含了精子载体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:精子,转基因,载体,基因,激光,光谱,光学。
精子载体论文文献综述
陈集成[1]（2014）在《利用细胞穿膜肽进行精子载体法制备转Sohlh2基因猪胚胎的初步探索》一文中研究指出Sohlh2(spermatogenesis and oogenesis specific basic helix-loop-helix2)是bHLH(basic helix-loop-helix)转录因子超家族的成员,是启动原始卵泡发育的关键基因之一,制备转有Sohlh2基因的动物具有重要的科研价值和应用价值。而在制备转基因动物的方法中,精子载体法以操作简单,人为机械损伤较少的优点,受广大研究者的瞩目。与此同时,精子载体法阳性率不高的问题得不到妥善解决,需要在精子载体法的基础上提高外源基因进入精子的效率,以达到提高阳性率的目的,细胞穿膜肽就是一种较好的解决方案。穿膜肽是由不多于30个氨基酸残基组成的小分子多肽,具有很强的跨膜转运能力。本研究拟比较细胞穿膜肽(cell-penetrating peptides, CPPs)用于不同细胞转染的转染效率,之后探讨将筛选的CPPs用于精子载体法制备转Sohlh2基因猪胚胎的可行性。具体研究结果如下。1.Sohlh2基因全长编码区序列片段的克隆。基因包含全长编码序列的扩增片段大小为1281bp,应用MEGA和ORF Finder等程序对所得序列进行相关生物信息学分析。多重序列比较结果显示,水牛与黄牛、绵羊、猪、人、小鼠Sohlh2基因氨基酸的相似性分别为98%、96%、85%、81%和81%,在氨基酸和核苷酸水平上Sohlh2基因在不同物种中具有较高保守性。蛋白二级结构分析结果显示Sohlh2蛋白由α一螺旋、p一折迭、p一转角及无规则卷曲组成,蛋白有自己独特的结构域。2.水牛Sohlh2基因表达模式的研究。应用qRT-PCR技术,检测了Sohlh2基因在水牛不同组织的表达。结果显示,水牛Sohlh2在睾丸中表达丰度最高。之后构建Sohlh2基因的慢病毒表达载体,然后采用倍比稀释法测定包装出来的病毒滴度,检测得病毒滴度已经达到106,达到了要求。3.穿膜肽在不同细胞以及精子上的转染效率的探讨。首先探讨不同孵育液、温度、以及孵育时间下质粒与穿膜肽孵育之后转染293T细胞的情况,以得到最佳的反应条件。结果显示,在37℃下Sohlh2基因质粒与穿膜肽在无血清无双抗的DMEM溶液孵育20min转染效果最佳。其次是流式细胞仪检测不同穿膜肽的转染效率。结果显示,脂质体的转染的效率最高,达到87.72%。C105y、Mpg、Tat、Pep-1和Pep-3穿膜肽的转染效率分别为48.61%、42.90%、8.03%、3.36%和1.98%,效率对比脂质体略低。最后是探讨不同液体和孵育温度下精子的转染效率,最佳反应条件为用无血清无双抗的DMEM作为孵育液体,在37℃培养箱孵育20min。应用激光共聚焦技术观察精子发光,结果显示,精子发光部位集中在顶体后区。4.利用穿膜肽和慢病毒进行IVF制备转Sohlh2基因猪胚胎。首先通过检测穿膜肽,脂质体和慢病毒处理精子对精子活率、平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)和前向性(STR)等试验指标的影响。结果显示,穿膜肽C105y对精子平均直线运动速度、平均曲线运动速度和精子前向性的影响与对照组相比,差异都不显着(P>0.05)。之后,选择慢病毒和C105y进行IVF生产转Sohlh2基因猪胚胎。C105y组的囊胚率显着高于慢病毒组(15.8±6.9vs9.1±3.5,P<0.05),和对照组差异不显着(15.8±6.9vs13.8±5.0,P>0.05),但C105y组的阳性率低于慢病毒组(8.54±0.78vs10.38±0.95,P<0.05)。结论：1.以水牛卵巢和睾丸的混合cDNA为模板,可克隆得到水牛Sohlh2基因,并能用于构建Sohlh2基因的慢病毒载体。2.穿膜肽C105y与Mpg在37℃下以无血清无双抗的DMEM溶液孵育20min后可有效将Sohlh2基因质粒转染到细胞和精子内,但效果比脂质体组差。3.穿膜肽C105y对精子活率、平均曲线运动速度(VCL)、平均直线运动速度(VSL)和前向性(STR)各项指数无显着影响,是一种理想的IVF穿膜肽载体。4.采用穿膜肽C105y和慢病毒转染精子进行IVF均可以得到转Sohlh2囊胚。(本文来源于《广西大学》期刊2014-06-01）
吴斌,戴建军,张廷宇,张树山,吴彩凤[2]（2013）在《精子载体法获得植酸酶转基因猪》一文中研究指出将带有植酸酶基因的重构质粒酶切纯化后,与去除精浆的猪新鲜精液按比例混合,17℃孵育处理使重构质粒结合到精子头部,通过人工授精对6头受体母猪进行配种,4头受孕,产仔38头。经PcR对特异性片段扩增,结果表明:有6头PcR结果为阳性,阳性率为15.8%。扩增片段经克隆、测序、比对,与阳性对照组序列相似率均在99%以上,说明目的基因已转入阳性个体体内。(本文来源于《上海农业学报》期刊2013年05期）
刘荣立[3]（2013）在《精子载体法介导生产牛转基因胚胎的初步研究》一文中研究指出本研究主要探讨精子载体法介导生产牛转基因胚胎的相关影响因素,以便为建立精子载体法介导生产转基因牛的技术平台奠定基础。首先探讨了不同个体精液的洗涤次数、精子与IFN-EGFP质粒孵育的时间和浓度、线性/环状质粒比例等相关因素对IVF介导的牛转基因效果的影响。试验选择广娟3、6、10号叁头牛的精液,分别洗涤1-4次后检测精子活力和精子携带外源质粒的阳性率,结果发现,广娟3号、6号牛精子活力随洗涤次数的增加呈显着性下降(P<0.05),而广娟10号牛精子洗涤两次后的精子活力与洗涤一次和叁次的精子活力相比差异不显着(0.69vs0.77、0.65,P>0.05),且洗涤叁次时精子活力显着高于广娟3号和广娟6号(0.65vs0.57、0.56,P<0.05)；精子孵育质粒后其阳性率随着洗涤次数增加而增加,广娟10号牛精液洗涤二次或叁次的精子阳性率均显着高于广娟6号和广娟3号(P<0.05)。当广娟10号牛精子与质粒分别孵育不同时间(10min、30min、60min、90min和120min)时,孵育时间为l0min、30min组的精子活力与对照组无显着差异(P>0.05),且显着高于60min、90min、120min组(P<0.05),但30min组的精子阳性率显着高于1Omin组(20.98%vs10.62%),而与60min、90min、120min各组间差异不显着(P>0.05)；精子与质粒孵育不同时间后进行IVF,发现30min组的分裂率和囊胚率均显着高于60min组(63.84%vs50.52%；23.52%vs15.77%,P<0.05),而30min组和60min组间的分裂阳性率和囊胚阳性率差异不显着(P>0.05)。当孵育时间一定、精子与不同的质粒浓度孵育时,75nG/μl组的精子阳性率显着高于其他试验组(P<0.05),IVF后试验组的分裂率和囊胚率间差异不显着(P>0.05),但50ng/μl组的分裂阳性率和囊胚阳性率分别显着高于25ng/μl、100ng/μl组(38.66%vs26.94%、23.60%；19.05%vs7.14%、5.56%,P<0.05),而与75ng/μl组差异不显着(P>0.05)。将线性/环状比例分别为0：1、1：0、1：1的质粒与精子进行孵育,各比例组的精子阳性率无显着性差异(30.47%vs28.86%vs30.21%；P>0.05),进行IVF后,各组间的分裂率、分裂阳性率、囊胚率、囊胚阳性率无显着性差异(P>0.05)。其次比较了精子处理方式、精子与IFN-EGFP质粒孵育的浓度对ICSI介导的牛转基因效果的影响。结果显示,采用简单共孵育、NaOH.冻融叁种方式处理精子,精子阳性率分别为31.09%、37.19%、48.47%,各组间精子阳性率差异显着(P<0.05)；分别采用这叁种方式处理后的精子进行ICSI操作,冻融组的囊胚率显着低于简单孵育组(36.15%vs44.93%,P<0.05),但显着高于NaOH组(36.15%vs32.11%,P<0.05),且冻融组的囊胚阳性率显着高于简单孵育组(28.29%vs10.28%,P<0.05),而分裂率和分裂阳性率各组间差异不显着(P>0.05)。当冻融精子分别与5、25、50、75、l00ng/μl不同质粒浓度孵育时,发现75ng/μl组与100ng/μl组的精子阳性率显着高于5ng/μl组、25ng/μl组和50ng/μl组(51.07%、51.19%vs17.87%、31.51%、46.14,P<0.05)。将经不同浓度质粒孵育后的冻融精子进行ICSI操作,除75ng/μl组的分裂率显着低于各试验组外(P<0.05),其他各试验组间差异不显着(P>0.05)；除5ng/μl组的分裂阳性率显着低于各试验组外(P<0.05),其他各试验组间差异不显着(P>0.05)；50ng/μl组的囊胚率显着高于75ng/μl组,且其囊胚阳性率显着高于其他各试验组(P<0.05)。以上结果表明：(1)公牛个体差异以及精子洗涤次数对牛的精子活力、精子结合外源IFN-EGFP质粒的效率有影响；(2)精子与外源IFN-EGFP质粒孵育的浓度和时间对牛精子活力、精子结合外源质粒的效率和IVF介导的牛转基因效果均产生一定的影响,以质粒孵育浓度为50ng/μl、孵育时间30min为宜；(3)线性/环状IFN-EGFP质粒的不同比例对IVF介导的牛转基因效果无影响；(4)精子处理方式以及精子孵育的IFN-EGFP质粒浓度对ICSI介导的牛转基因效果有影响,经冻融方式处理的精子与浓度为50ng/μl的质粒浓度孵育可提高ICSI介导的牛转基因效率。(本文来源于《广西大学》期刊2013-06-01）
郝枭雄,朱征,曹棉富,李成仁,刘运来[4]（2013）在《精子载体技术研究进展》一文中研究指出随着生物科技的飞速发展,人类已经初步掌握了通过转基因技术去改变生物性状的方法。近年来精子载体技术因其可方便有效地产生转基因动物模型而受到人们越来越多的关注。这项技术具有操作简单、人为损伤小等优点。本文主要从精子载体技术的技术背景、发展历程、相关机制、操作方法以及应用展望等方面对其进行综述。(本文来源于《生物医学工程学杂志》期刊2013年02期）
杜伟,崔海信,王琰,孙长娇,赵翔[5]（2012）在《精子载体法制备转基因动物的研究进展》一文中研究指出精子载体法是一种低成本、简单快速制备转基因动物的方法。外源基因主要通过两种方式实现基因整合,一种是直接整合到精子的基因组中;另一种是通过精子携带进入卵细胞,然后整合到受精卵的基因组中。尽管现在已经有很多利用精子载体法获得了转基因动物的研究,但是基于精子在受精过程中,结合、内化、以及转运外源基因等方面能力的差异,转染效率仍有待提高。就利用精子载体法制备转基因动物过程中,精子载体法制备转基因动物的分子机制和方法方面进行系统的阐述和分析。(本文来源于《生物技术通报》期刊2012年12期）
王加强,牟彦双,尹智,刘忠华[6]（2012）在《附加型载体结合精子载体法生产转基因鸡》一文中研究指出转基因动物是生物工程及生物医学的重要工具之一。目前,整合型载体广泛应用于转基因技术,但整合型载体可能导致插入突变,以及转入基因的随机表达甚至沉默。核骨架/核基质附着区(scaffold/matrix attachment region,S/MAR)依赖型载体是一种附加型载体,可在哺乳动物细胞内自主复制,因此能使高等真核细胞或机体产生更安全更稳定的基因修饰。本实验中,我们采用S/MAR依赖型载体pEGFP-S/MAR转染鸡精子,然后采用精子介导基因转移(sperm-mediated genetransfer,SMGT)技术获得了增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)转基因鸡。人工输精后,我们在10天内共收集了32枚鸡蛋,置于人工孵化箱内孵化。我们分别对2枚孵化3天(E3)及2枚孵化15天(E15)的鸡胚、4只孵化后第1天死亡的雏鸡、3只孵化后第3天死亡的雏鸡以及4只孵化后存活至10天的雏鸡进行了检测,通过反转录PCR技术及荧光显微镜镜检技术,分别从RNA水平和蛋白水平检测了标记基因EGFP的表达情况,阳性率分别是2/2、1/2、2/4、1/3、3/4,总的阳性率为60%(9/15)。然后我们通过质粒拯救实验在核内染色体外Hirt-DNA提取物中检测到了pEGFP-SMAR载体,证明了载体的附加型状态。但由于对精液进行了体外长时间处理,受精率仅约为45%(15/33)。表达EGFP的非整合型转基因鸡的基因组不受外源基因干扰,外源基因也可躲避基因组的表观沉默调控,因此其不仅可以作为研究鸡发育的良好模型,又可作为高效的生物反应器,在生物工程及生物医学方面有广阔的应用前景。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）》期刊2012-07-10）
崔凯[7]（2011）在《精子载体法制备FecB转基因太行山羊技术的研究》一文中研究指出精子介导的基因转移是指以精子作为外源基因的载体,在受精时将外源基因导入卵母细胞,使受精卵中含有外源基因,是目前转基因动物研究中简单而高效的方法之一。脂质体可用于转基因的研究,利用脂质体可以和细胞膜融合的特点,将外源基因送入细胞内部。本实验利用脂质体介导精子转染的方法,研究了精子在介导基因转移过程中精子与外源基因结合的影响因素,并对精子载体法制备FecB转基因太行山羊进行了初步研究。试验结果如下:1.精子充分离心洗涤后,再与脂质体-DNA复合物混合,可显着提高脂质体介导精子转染外源DNA的效率。DNaseI消化前,洗涤组转染精子阳性率为38%,而未处理精液组精子阳性率为14%;DNaseI消化后,洗涤组转染精子阳性率为21%,而未处理精液组精子阳性率为5%,差异极显着(P <0.01)。2.脂质体介导法可使外源DNA透过细胞膜内化进入精子胞质或胞核内,精子转染外源DNA用DNaseI消化后能检测到精子中外源DNA的存在。太行山羊精子与外源DNA混合培养后,用荧光原位杂交检测到18.3%的精子结合有外源DNA,脂质体Lipofectamine2000介导后比率增加至38.7%,两法的统计学分析存在显着性差异(P<0.01)。3.利用共培养法转染外源DNA,用DNaseI消化后,能检测到精子中外源DNA的存在,山羊精子具有自发的结合外源DNA的能力。4.对18只太行山羊母羊进行诱导发情处理,精子与FecB基因共孵育后,对发情母羊进行输精,受孕率为51%,共产生后代12只,经过PCR检测,未发现阳性后代。(本文来源于《河北农业大学》期刊2011-06-01）
黄荣,闫益波,王子玉,张艳丽,宋洋[8]（2010）在《精子载体法在转基因家畜中的应用与前景》一文中研究指出论文综述了精子载体法在家畜(猪、牛、羊)遗传育种、乳腺生物反应器和异种器官移植中的应用,并对其今后发展方向进行了展望。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2010年06期）
路立里,郝耿,于建国,马帧,杨会国[9]（2010）在《精子载体法转基因技术研究进展》一文中研究指出精子载体法是以精子作为外源基因的载体,在受精过程中将外源基因导入动物胚胎,从而使外源基因进入子代的基因组中。作者就精子结合外源基因的机制,精子与外源基因结合的方法、影响精子转染外源基因和生产转基因动物的精子因素进行简要介绍,并对发展起来的输精管内注射转染法、曲细精管微注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2010年09期）
刘红波,吕培茹,杨小淦,朱姿英,胡林林[10]（2010）在《服务于精子载体法转基因相关研究的猪精子人工智能识别与预测平台的建立》一文中研究指出ICSI介导的载体法是进行转基因动物的研究的重要方法之一,多种处理策略都会对精子造成一定程度的损伤,建立合适的精子损伤检测平台非常重要。本研究旨在建立精子破膜智能优化策略,为精子载体法转基因研究相关奠定基础。方法:首先,采集来自于健康猪的精子,冻融和热处理后,检测其顶体的完整性,再利用激光光镊拉曼光谱对之无损化光谱测定;其次,对拉曼光谱处理数据进行主成分分析(principal component analysis,PCA)分析;最后,利用BP人工神经网络对处理精子进行识别和预测。顶体检测结果显示:冻融处理会显着对顶体造成破坏,热处理则破坏较小。拉曼光谱检测显示,特征峰1657(非饱和脂肪酸C=C伸缩振动或蛋白质酰胺Ⅰ)、1615(酪氨酸/色氨酸C=C伸缩振动)、1441(脂类和蛋白CH2变形振动)、1259(蛋白质酰胺Ⅲ)和1003(苯丙氨酸)峰值在冻融精子处理组和热处理组均明显降低。这说明随着顶体破坏率升高,造成了蛋白质和脂类的丢失,拉曼光谱检测结果与实际情况是一致的。核酸各特征峰在各组的变化,说明DNA发生了不同程度的解链。特征峰493(糖原),926(葡萄糖)的波动可以反映精子的基本能量代谢状况。BP网络对新鲜、热处理和冷冻处理精子预测的准确率分别为100%(10/10),90%(9/10)和100%(10/10)。总之,本研究初步了建立基于近红外激光光镊拉曼光谱检测的猪精子人工智能识别和预测平台,为优化精子破膜策略为精子载体法转基因相关研究相关奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）》期刊2010-08-01）
精子载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
将带有植酸酶基因的重构质粒酶切纯化后,与去除精浆的猪新鲜精液按比例混合,17℃孵育处理使重构质粒结合到精子头部,通过人工授精对6头受体母猪进行配种,4头受孕,产仔38头。经PcR对特异性片段扩增,结果表明:有6头PcR结果为阳性,阳性率为15.8%。扩增片段经克隆、测序、比对,与阳性对照组序列相似率均在99%以上,说明目的基因已转入阳性个体体内。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
精子载体论文参考文献
[1].陈集成.利用细胞穿膜肽进行精子载体法制备转Sohlh2基因猪胚胎的初步探索[D].广西大学.2014
[2].吴斌,戴建军,张廷宇,张树山,吴彩凤.精子载体法获得植酸酶转基因猪[J].上海农业学报.2013
[3].刘荣立.精子载体法介导生产牛转基因胚胎的初步研究[D].广西大学.2013
[4].郝枭雄,朱征,曹棉富,李成仁,刘运来.精子载体技术研究进展[J].生物医学工程学杂志.2013
[5].杜伟,崔海信,王琰,孙长娇,赵翔.精子载体法制备转基因动物的研究进展[J].生物技术通报.2012
[6].王加强,牟彦双,尹智,刘忠华.附加型载体结合精子载体法生产转基因鸡[C].中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）.2012
[7].崔凯.精子载体法制备FecB转基因太行山羊技术的研究[D].河北农业大学.2011
[8].黄荣,闫益波,王子玉,张艳丽,宋洋.精子载体法在转基因家畜中的应用与前景[J].家畜生态学报.2010
[9].路立里,郝耿,于建国,马帧,杨会国.精子载体法转基因技术研究进展[J].中国畜牧兽医.2010
[10].刘红波,吕培茹,杨小淦,朱姿英,胡林林.服务于精子载体法转基因相关研究的猪精子人工智能识别与预测平台的建立[C].中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集（上册）.2010
论文知识图
