分离与鉴定人脂肪间充质干细胞来源的外泌体

论文摘要

背景:脂肪间充质干细胞是重要的种子细胞之一,可通过较简单的方法大量提取,但其储存条件较苛刻,运输不便,临床应用较困难。外泌体可由脂肪间充质干细胞分泌,其结构稳定,不易分解,为脂肪间充质干细胞在临床应用提供了新的可能性。目的:提取人脂肪间充质干细胞,鉴定脂肪间充质干细胞,诱导脂肪间充质干细胞多向分化,提取脂肪间充质干细胞来源的外泌体,鉴定脂肪间充质干细胞来源的外泌体。方法:收集青岛大学附属医院医学美容中心的正常成年女性行吸脂术后腹部浅层皮下脂肪组织,用酶消化法分离提取脂肪间充质干细胞进行原代培养,用细胞贴壁法纯化,胰酶消化传代。选取第3代细胞分别行流式细胞学鉴定,成脂肪细胞诱导与鉴定;成骨细胞诱导与鉴定。取第3-6代脂肪间充质干细胞,收集细胞上清液,差速离心法提取外泌体,BCA法测定蛋白浓度,透射电镜观察外泌体形态,粒度仪测外泌体直径分布,免疫磁珠法和流式细胞学鉴定。结果与结论:①脂肪间充质干细胞形态为长梭形,形似成纤维细胞,排列紧密时呈巢状;②流式细胞学检测显示CD29,CD44,CD90及CD105均为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达;③成骨细胞诱导至第9天碱性磷酸酶染色为蓝紫色,诱导至21 d时,茜素红S染色可见细胞外基质内出现红色钙结节;④成脂肪细胞诱导14 d后油红O染色呈橘红色;⑤透射电镜显示外泌体结构为杯状,直径为（81.225±22.226） nm,有膜结构。蛋白浓度约为1.5 g/L,直径分布集中于70-100 nm,外泌体流式细胞学显示CD9,CD29,CD44,CD63,CD90和CD105为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达;⑥结果证实,人脂肪间充质干细胞来源的外泌体能通过超速离心法顺利提取,并通过透射电子显微镜、免疫磁珠法和流式细胞学检测相结合的方法成功鉴定。

论文目录

• 0 引言Introduction
• 1 材料和方法Materials and methods
•   1.1 设计
•   1.2 时间及地点
•   1.3 材料
•   1.4 实验方法
•     1.4.1 人脂肪间充质干细胞的培养及鉴定
•     1.4.2 成骨细胞诱导
•     1.4.3 成脂肪细胞诱导
•     1.4.4 外泌体的收集
•     1.4.5 外泌体的提取
•     1.4.6 外泌体浓度测定及形态学观察
•     1.4.7 外泌体的流式细胞学检测
•   1.5 主要观察指标
• 2 结果Results
•   2.1 脂肪间充质干细胞的形态学观察
•   2.2 脂肪间充质干细胞的流式细胞学检测
•   2.3 成骨诱导细胞形态
•   2.4 成脂诱导细胞形态
•   2.5 外泌体的形态学观察
•   2.6 外泌体的流式细胞学鉴定
• 3 讨论Discussion

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王静,蔡霞,王志国,徐全臣,李坤,华骋

关键词: 脂肪间充质干细胞,外泌体,成脂诱导,成骨诱导,细胞鉴定,免疫磁珠法,流式细胞学检测

来源: 中国组织工程研究 2019年17期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 青岛大学医学部,青岛大学附属医院烧伤整形外科,青岛大学附属医院口腔科,青岛市第八人民医院手足外科,檀国大学

基金: 山东省自然科学基金(XR2017MH083),项目负责人:王志国,山东省重点研发计划基金(2018GSF118150),项目负责人:徐全臣~~

分类号: R329.2

页码: 2651-2658

总页数: 8

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