维吉尼亚链霉菌P450-105D1在大肠杆菌中自诱导表达和雄烯二酮的羟化活性

论文摘要

雄烯二酮是甾体药物生产的重要中间体,其C9位羟基化产物9-羟基雄烯二酮也是多种重要甾体药物的合成前体,具有重要的临床药用价值。微生物转化生产9-羟基雄烯二酮具有重要的经济价值。将维吉尼亚链霉菌IBL14中svu005与pET28a质粒融合,导入大肠杆菌BL21（DE3）。使用优化的自诱导培养基诱导表达其产物细胞色素P450-105D1（CYP105D1）蛋白,以雄烯二酮等多种甾体作为底物进行微生物羟化。结果显示,构建的重组质粒pET28a-svu005在大肠杆菌中成功表达,使用ZYM培养基,自诱导表达的活性蛋白产量（0.0916 nmol/L）显著高于传统的IPTG诱导方式的产量（0.0367 nmol/L）。表达产物CYP105D1可以羟化雄烯二酮,经HPLC检测,产物为9-羟基雄烯二酮。发现了微生物转化合成9-羟基雄烯二酮的新途径,具有很好的工业应用前景。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 材料与试剂
•   1.2 svu005的基因分析及分子克隆
•   1.3 CYP105D1原核表达载体的构建
•   1.4 CYP105D1蛋白的诱导表达及活性测定
•   1.5 CYP105D1蛋白羟化雄烯二酮的功能鉴定
• 2 结果和分析
•   2.1 svu005基因分析及分子克隆结果
•   2.2 重组表达质粒pET28a-svu005的构建及验证
•   2.3 CYP105D1重组蛋白的表达及活性
•   2.4 CYP105D1对雄烯二酮的羟化功能鉴定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张雁,韩毛振,罗学才,王晶晶,周明辉,陈亚军

关键词: 羟基雄烯二酮,微生物转化,细胞色素,自诱导表达

来源: 生物学杂志 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 合肥师范学院生命科学学院,华中科技大学生命科学与技术学院

基金: 安徽省高校自然科学基金重点项目(KJ2018A0494),安徽省青年人才支持项目(gxyq2018056),国家自然科学青年基金(31800049)

分类号: Q78

页码: 46-51

总页数: 6

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