双抗体夹心ELISA检测戊型肝炎病毒(HEV)抗原方法的建立及对猪群粪便HEV抗原的检测

论文摘要

应用大肠杆菌表达及纯化的戊型肝炎病毒（hepatitis E virus,HEV）P1重组蛋白制备的抗体,建立了检测HEV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对吉林省和辽宁省部分地区猪群HEV的感染进行了病原流行病学调查。方阵滴定法确定鼠源捕获抗体IgG最佳包被量为0.2μg,兔源酶标抗体最佳稀释倍数为1∶500。对大量阴性粪便进行了检测与统计学分析,确定了双抗体夹心ELISA检测HEV的判定标准,即当D490≥0.235判定为阳性。特异性、敏感性和重复性的试验结果表明,本试验建立的方法具有特异、敏感、快速和可重复性好等特点。该方法与RT-PCR方法相比,操作简单、便于基层推广使用。对吉林省、辽宁省不同地区猪群粪便进行检测,发现不同地区不同饲养期的猪群均存在着HEV感染,感染率为9%～33%。本试验建立的双抗体夹心ELISA方法检测HEV抗原,为HEV流行病学调查、临床诊断提供了有效的手段。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 HEV阴、阳性粪便样品
•     1.1.1 对照粪便样品
•     1.1.2 待检粪便样品
•   1.2 HEV目的基因扩增
•   1.3 重组蛋白的表达与纯化
•   1.4 HEV P1蛋白的单克隆抗体制备和效价测定
•   1.5 Western blot分析
•   1.6 兔源多克隆抗体的制备和效价测定
•   1.7 兔源多克隆抗体IgG提取与辣根过氧化物酶 （HRP） 标记
•   1.8 双抗体夹心ELISA方法抗体包被与酶标抗体最佳浓度的确定
•   1.9 双抗体夹心ELISA方法判定标准的确定
•   1.10 特异性试验
•   1.11 重复性试验
•   1.12 敏感性对比试验
•   1.13 不同地区HEV感染调查
• 2 结果
•   2.1 HEV P1目的基因片段的扩增和重组质粒的鉴定
•   2.2 重组蛋白的表达与纯化
•   2.3 HEV P1蛋白单克隆抗体的制备与分析
•   2.4 单克隆抗体免疫反应性
•   2.5 双抗体夹心 ELISA 方法的包被抗体与酶标抗体最佳浓度的确定
•   2.6 双抗体夹心 ELISA 方法判定标准的确定
•   2.7 特异性试验
•   2.8 重复性试验结果
•   2.9 敏感对比试验结果
•   2.10 吉林、辽宁省部分地区猪群HEV感染的调查
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 袁悦,李欣,郭昌明,马振乾,胡俊英,王旭,林倩,王新平

关键词: 戊型肝炎病毒,戊型肝炎,双抗体夹心,病原流行病学调查

来源: 中国兽医学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林大学动物医学学院,青岛易邦生物工程有限公司,吉林大学人兽共患病研究所

基金: 国家重点研发计划资助项目(2017YFD0500104,2016YFD0500904)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.06.15

页码: 1130-1134+1139

总页数: 6

文件大小: 373K

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