论文摘要
目的:研究orexin-A对脊髓腹角神经元基本电生理参数及烟碱型乙酰胆碱受体（n ACh R）的作用。方法:使用7-12 d的新生SD大鼠。乙醚辅助冰浴麻醉后,将含有腰骶膨大的脊髓游离,制备4-5片厚度为350-500μm的脊髓切片,孵育约0.5 h后,用木瓜蛋白酶（papain,0.18 g/30 ml人工脑脊液）消化切片20-25 min,终止消化并孵育50 min。显微镜下选取腹角,使用抛光的巴斯德吸管进行神经元的急性机械分离。对贴壁的健康神经元进行穿孔膜片钳记录。结果:（1）急性分离的脊髓腹角神经元状态良好,具有形状多样的胞体且立体饱满,以及完整的突起并发出多条分支。（2）9个急性分离的脊髓腹角神经元有自发动作电位,其中5个神经元的放电频率为（5.88±1.87）Hz,4个神经元的放电频率为（16.75±5.40）Hz,两者有显著差异（P<0.01）。低频放电的神经元静息电位为（-66.54±6.48）m V、动作电位幅度为（76.08±10.07）m V,高频放电的神经元静息电位为（-52.74±5.27）m V、动作电位幅度为（55.54±7.46）m V,两者均有显著差异（P<0.05）。细胞其余电生理参数无明显差异。（3）持续灌流orexin-A（OXA）2 min后,在5例细胞中记录到4个脊髓腹角神经元的自发动作电位放电频率较灌流前增加了（63.64±5.25）%,幅度等参数无明显变化;（4）在15个神经元中,有12例细胞给予0.3 mmol/L尼古丁诱导出内向电流,幅度为（142.97±75.02）p A,用100 nmol/L OXA进行2 min的预处理,可显著抑制电流幅度至（69.07±61.07）p A（P<0.001）,抑制率为（54.75±22.62）%。（5）在9个神经元中,有7例细胞给予尼古丁诱导的电流幅度为（127.94±68.78）p A,将100 nmol/L OXA共同施用于神经元,尼古丁诱导的电流幅度降为（64.58±34.03）p A,在此基础上,通过施用orexin-1受体（OX1R）选择性拮抗剂SB334867（10μmol/L）2min后可阻断OXA对尼古丁诱导电流的抑制作用,电流幅值为（111.06±58.25）p A。因此,SB334867可取消OXA对尼古丁电流的抑制作用。但对于另两例神经元,SB334867并未阻断OXA的抑制作用。结论:实验所分离出的脊髓腹角神经元胞体较大而立体,突起多且多分支,细胞状态良好;记录的神经元自发动作电位,根据放电频率可分为低频、高频两类,且这两类细胞的静息电位与动作电位幅度有明显差异,提示可能在此实验中所钳制的细胞有两种及以上;orexin-A可增加脊髓腹角神经元的放电频率,但其他电生理参数无明显变化;orexin-A可能通过OX1R对脊髓大部分腹角神经元的n ACh R具有抑制作用,但不能排除orexin-2受体（OX2R）也参与OXA作用的可能性。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 黄艳
导师: 郑超
关键词: 脊髓腹角神经元,型乙酰胆碱受体,穿孔膜片钳记录
来源: 皖南医学院
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 皖南医学院
基金: 国家自然基金项目(31200828,31271155,81601158),安徽省高校优秀青年人才支持计划项目(gxyqZD2016175,gxyq2017034),皖南医学院博士科研启动基金(rcqd201609)
分类号: Q42
总页数: 82
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