论文摘要
目的探讨雷帕霉素（rapamycin, RAPA）诱导软骨细胞自噬抑制骨关节炎（osteoarthritis, OA）进展的可能性。方法体外分离培养软骨细胞,应用地塞米松（dexamethasone, DEX）诱导凋亡,然后用RAPA干预。将正常软骨细胞和OA软骨细胞分别分为3组:BSA组、DEX-BSA组、RAPA+DEX-BSA组。MTT法检测软骨细胞活性,GFP-RFP-LC3腺病毒、Western-Blot和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测自噬流水平和自噬相关蛋白LC3、Beclin1和ULK1蛋白及基因表达。qRT-PCR和ELISA法检测IL-1、TNF-α浓度。Annexin V-FITC/PI法及TUNEL法检测凋亡。结果 Western-Blot显示无论正常和OA软骨细胞,与DEX-BSA组比较,RAPA+DEX-BSA组总LC3B、LC3B-Ⅱ、Beclin1和ULK1表达显著增加[正常软骨细胞DEX-BSA组分别为（1.477±0.0297）、（0.727±0.0231）、（0.240±0.0063）、（0.261±0.008）,正常软骨细胞RAPA+DEX-BSA组分别为（3.648±0.0408）、（2.020±0.012）、（0.900±0.0284）、（0.604±0.0119）（P<0.01）;OA软骨细胞DEX-BSA组分别为（3.085±0.081）、（1.637±0.0503）、（0.586±0.0033）、（0.446±0.0188）,OA软骨细胞RAPA+DEX-BSA组分别为（5.579±0.1920）、（3.17±0.0844）、（0.970±0.0245）、（0.650±0.01）,P<0.01]。qRT-PCR显示正常和OA软骨细胞,与DEX-BSA组比较,RAPA+DEX-BSA组LC3表达显著增高[正常软骨细胞DEX-BSA组（1.00±0.050）,正常软骨细胞RAPA+DEX-BSA组（1.74±0.073）（P<0.01）;OA软骨细胞DEX-BSA组（2.04±0.098）,OA软骨细胞RAPA+DEX-BSA组（2.46±0.12）,P<0.01],TNF-α和IL-1表达显著下降[正常软骨细胞DEX-BSA组分别为（1.34±0.074）,（1.60±0.099）,正常软骨细胞RAPA+DEX-BSA组分别为（1.00±0.028）,（1.27±0.042）,P<0.01;OA软骨细胞DEX-BSA组分别为（1.54±0.033）,（3.08±0.167）,OA软骨细胞RAPA+DEX-BSA组分别为（1.34±0.052）,（1.05±0.022）,P<0.01]。ELISA法显示正常和OA软骨细胞,与DEX-BSA组比较,RAPA+DEX-BSA组TNF-α和IL-1显著下降[正常软骨细胞DEX-BSA组分别为（68.71±1.78）pg/ml,（226.13±5.93）pg/ml,正常软骨细胞RAPA+DEX-BSA组分别为（57.75±1.68）pg/ml,（189.75±4.10）pg/ml,P<0.01;OA软骨细胞DEX-BSA组分别为（95.07±2.25）pg/ml,（260.91±7.61）pg/ml,OA软骨细胞RAPA+DEX-BSA组分别为（79.55±2.48）pg/ml,（214.61±8.96）pg/ml,P<0.01]。Annexin V-FITC/PI法显示,RAPA+DEX-BSA组正常软骨和OA软骨细胞凋亡较DEX-BSA组显著降低[正常软骨细胞RAPA+DEX-BSA组和DEX-BSA组分别为（21.02±0.76）、（26.02±0.864）,P<0.01;OA软骨细胞RAPA+DEX-BSA组和DEX-BSA组分别为（27.98±0.811）、（34.96±0.68）,P<0.01]。结论 RAPA诱导软骨细胞自噬,通过降低TNF-α和IL-1的表达、抑制软骨细胞凋亡进而减轻DEX对软骨细胞的OA样损伤进程。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 王芳芳,李鸿斌
关键词: 雷帕霉素,自噬,凋亡,骨关节炎,软骨细胞
来源: 中华临床免疫和变态反应杂志 2019年06期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 外科学
单位: 内蒙古医科大学附属医院风湿免疫科
基金: 内蒙古科技创新引导项目(02039010),内蒙古草原英才创新团队项目(DC1900003135)~~
分类号: R684.3
页码: 505-510
总页数: 6
文件大小: 4752K
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