洛阳地区宠物犬沙门菌的分离鉴定及耐药性研究

论文摘要

伴随宠物犬与人类密切接触,造成沙门菌在犬与人之间扩散传播,给宠物犬及人类健康造成巨大威胁。目前,临床上治疗宠物犬沙门菌病主要依靠于抗生素。然而由于抗生素的广泛使用,导致沙门菌耐药性的增加与扩散,使临床沙门菌感染面临严峻挑战。本研究通过肛门拭子法采集样品,对洛阳地区宠物犬沙门菌进行分离、鉴定,检测宠物犬沙门菌的耐药性及耐药基因,为宠物犬沙门菌病的防治及宠物犬临床用药提供参考。研究结果如下:（1）采用肛门拭子法从洛阳市及周边县城共采集宠物犬粪便样品310份,通过TTB增菌液、麦康凯培养基和SS琼脂培养基对沙门菌进行初步分离,再利用革兰氏染色、生化鉴定、分子鉴定及血清型鉴定最终获得73株沙门菌。（2）选用临床常用的23种抗生素,通过纸片扩散法,进行药物敏感性试验。试验结果表明73株沙门菌表现不同程度的耐药。对阿莫西林、四环素和磺胺异噁唑耐药率最高,分别为84.93%、84.93%和82.19%;其次是氨苄西林、多西环素、氯霉素、复方新诺明和甲氧苄氨嘧啶,耐药率分别为78.08%、71.23%、64.38%、64.38%和76.71%;哌拉西林、头孢曲松、头孢克肟、头孢西丁、庆大霉素、环丙沙星和诺氟沙星的耐药率分别为42.47%、43.84%、41.10%、43.84%、31.51%、39.73%和31.51%;头孢噻肟和左氧氟沙星和的耐药率分别为28.77%和20.55%;耐药率较低的药物有头孢他啶、氧氟沙星、磷霉素、丁胺卡那、头孢吡肟和美罗培南,耐药率分别为10.96%、8.22%、6.85%、5.48%、2.74%和2.74%。多重耐药结果统计发现,73株沙门菌耐药范围从耐1种抗生素到耐20种抗生素不等,多重耐药谱较广,具有多重耐药性的菌株数占91.78%（67/73）。（3）试验设计氨基糖苷类、四环素类、β-内酰胺类、磺胺类、氯霉素类药物耐药基因引物共22种,进行耐药基因的检测。其中,氨基糖苷类耐药基因aadA1、aadA2、aadB、aacC2、aacC4、aac（3）-IIa、aadD和aph（3）-IIa的检出率分别为65.75%、79.45%、30.14%、80.82%、100%、50.68%、0和58.90%;四环素类耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG的检出率分别为36.99%、23.29%、73.97%、9.59%、61.64%和2.74%;β-内酰胺类药物耐药基因blaCMY、blaPSE和blaTEM的检出率分别为41.10%、72.60%和72.60%;磺胺类药物耐药基因sulⅠ、sulⅡ和sulⅢ的检出率分别为89.04%、94.52%和16.44%;氯霉素类药物耐药基因catⅠ和flo的检出率分别为64.38%和71.23%。综上所述,洛阳地区宠物犬沙门菌的耐药情况尤为严重,本研究将为防治宠物犬沙门菌病及宠物犬临床用药提供参考。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 符号表
• 第1章 文献综述
•   1.1 沙门菌概述
•     1.1.1 沙门菌病原学特征
•     1.1.2 沙门菌的危害
•     1.1.3 沙门菌的检测技术与方法
•   1.2 宠物犬沙门菌病概述
•   1.3 沙门菌耐药性研究进展
•     1.3.1 沙门菌耐药现状
•     1.3.2 沙门菌耐药机制
• 第2章 宠物犬沙门菌样品的采集和分离鉴定
•   2.1 引言
•   2.2 材料
•     2.2.1 样品来源
•     2.2.2 试验菌株
•     2.2.3 主要试剂与培养基
•     2.2.4 主要仪器设备
•   2.3 方法
•     2.3.1 样品的采集
•     2.3.2 培养基的配制
•     2.3.3 细菌的分离培养
•     2.3.4 疑似菌株革兰氏染色镜检
•     2.3.5 疑似菌株生化鉴定
•     2.3.6 疑似菌株分子鉴定
•     2.3.7 血清型鉴定
•     2.3.8 菌株的冻存
•   2.4 结果与分析
•     2.4.1 细菌的分离培养结果
•     2.4.2 疑似菌株革兰氏染色结果
•     2.4.3 疑似菌株生化鉴定结果
•     2.4.4 疑似菌株分子鉴定结果
•     2.4.5 沙门菌血清型鉴定结果
•     2.4.6 沙门菌分离株样品分布情况
•   2.5 讨论
• 第3章 宠物犬沙门菌药敏试验
•   3.1 引言
•   3.2 材料
•     3.2.1 试验菌株
•     3.2.2 药敏纸片
•     3.2.3 主要试剂与培养基
•     3.2.4 主要仪器设备
•   3.3 方法
•     3.3.1 培养基的配制
•     3.3.2 菌株的复苏
•     3.3.3 药敏试验
•   3.4 结果与分析
•     3.4.1 沙门菌药敏试验抑菌圈观察
•     3.4.2 73株沙门菌药敏试验结果
•     3.4.3 73株沙门菌多重耐药结果
•   3.5 讨论
• 第4章 宠物犬沙门菌耐药基因检测
•   4.1 引言
•   4.2 材料
•     4.2.1 试验菌株
•     4.2.2 主要试剂
•     4.2.3 主要仪器设备
•   4.3 方法
•     4.3.1 沙门菌总DNA提取
•     4.3.2 氨基糖苷类耐药基因PCR扩增
•     4.3.3 四环素类耐药基因PCR扩增
•     4.3.4 β-内酰胺类耐药基因PCR扩增
•     4.3.5 磺胺类耐药基因PCR扩增
•     4.3.6 氯霉素类耐药基因PCR扩增
•     4.3.7 PCR产物凝胶电泳检测
•   4.4 结果与分析
•     4.4.1 氨基糖苷类耐药基因检出结果
•     4.4.2 四环素类耐药基因检出结果
•     4.4.3 β-内酰胺类耐药基因检出结果
•     4.4.4 磺胺类耐药基因检出结果
•     4.4.5 氯霉类耐药基因检出结果
•   4.5 讨论
• 第5章 结论
• 参考文献
• 缩略语词汇表
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李小婷

导师: 王宏伟,郭宏伟

关键词: 宠物犬,沙门菌,分离鉴定,耐药性,耐药基因

来源: 河南科技大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南科技大学

基金: 河南科技大学学术技术带头人项目

分类号: S852.61

总页数: 76

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