导读:本文包含了热休克反应论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:休克,因子,蛋白,基因,内毒素,内皮,干扰素。
热休克反应论文文献综述
王翔翔[1]（2019）在《抗肿瘤药物PEITC对热休克反应双重调控机制的研究》一文中研究指出背景热休克反应(heat shock response,HSR)是生物体在外界某些刺激(如高热、氧化应激和重金属等)下,为维持自身稳态而激活热休克蛋白(Heat shock proteins,HSPs)表达的保护反应。高表达的HSPs(如Hsp70,Hsp40等)通过帮助其它蛋白质进行正确折迭、转运或降解以防止蛋白质发生变性后在细胞内大量堆积从而破坏细胞自身的稳态。多项研究表明,热休克转录因子1(Heat shock transcription factor 1,HSF1)在多种肿瘤细胞中高表达,并与肿瘤的演进和不良预后密切相关,主要作用机制是通过增强其自身326位点的丝氨酸(S326)进行磷酸化,从而上调Hsp70、Hsp27等的表达后促进其下游靶基因c-myc,Ras,c-fos等的激活,导致细胞发生恶性增殖和凋亡抵抗。大量证据表明HSF1可作为一个很好的抗肿瘤靶点。近期研究表明HSF1调控HSP转录表达的同时也受HSP的反馈调节。其相对分子机制目前尚不完全清楚。其中广为研究的为Hsp70。热休克蛋白70是一种高度保守且普遍表达的HSPs家族,几乎存在于所有生物体中,受HSF1调控作用最强。应激诱导的Hsp70(由叁个非常密切相关的旁系同源物编码:HSPA1A、HSPA1B和HSPA1L)属于Hsp70家族的成员之一。细胞可以通过响应高热、过氧化和pH值变化等应激条件而活化HSF1,进而诱导Hsp70高水平表达,进而维护细胞内蛋白质的稳定,降低细胞内蛋白毒性压力。已有研究指出HSF1的转录活性主要受HspA1A的负反馈调节。异硫氰酸苯乙酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)是一种天然存在十字花科蔬菜中的异硫氰酸酯。PEITC已被研究用于预防多种癌症,此外还在神经退行性疾病、心血管疾病和细菌感染发炎等方面发挥着保护作用。研究发现PEITC可以激活多种细胞保护途径,如由HSF1介导的热休克反应,并可引起细胞转化因子的变化。因此,我们设计并合成针对HSPA1A基因的gRNA(guide RNA),转染细胞后引导Cas9内切酶在HSPA1A基因组的特定位点进行酶切,在HSPA1A基因外显子的ATG前定点引入GFP的核酸序列,使得GFP基因的转录水平受控于HSPA1A启动子的活性;GFP核酸序列末尾的终止密码子TAA使得HSPA1A的翻译被阻断。将重组质粒转染Hela细胞,经抗生素加压筛选和流式细胞术分离,测序鉴定得到HSPA1A~(-/-)/GFP的重组单克隆细胞系,以此重组细胞为模型进行筛选调控HSF1/Hsp70的药物。鉴于HSF1与肿瘤的耐药、转移等恶性生物学行为密切相关。系统、精准地筛选调控热休克反应的药物就变得尤为重要。本课题旨在丰富能调控HSF1的化合物库并完善相关的分子机制研究。目的利用CRISSPR/Cas9基因编辑技术在宫颈癌细胞(Hela)的HSPA1A基因外显子的ATG前定点引入GFP的核酸序列。使得GFP基因的转录水平受控于HSPA1A启动子的活性,通过在GFP编码基因的3'末端添加终止密码子TAA使HSPA1A的翻译被提前阻断。以重组细胞Hela/HSPA1A~(-/-)/GFP为模型筛选调控热休克反应的药物并探索相关调控机制。方法和结果1.构建靶向人HSPA1A基因的CRISPR/Cas9 PX333-gRNA质粒和HSPA1A~(-/-)/GFP重组片段质粒。为提高gRNA的切割效率,我们在HSPA1A基因的起始密码子上下游各设计了2个gRNA位点。2.将质粒共转染宫颈癌细胞系(Hela),通过高速流式细胞分选系统(FACS)筛选得到荧光重组单克隆细胞,通过PCR,WB和FACS在DNA水平、蛋白水平、细胞水平验证基因重组结果。3.通过WB和FACS意外发现PEITC与热休克处理没有协同作用,PEITC反而拮抗由热休克介导的应激作用。4.通过核质分离,叁聚体实验和CHIP检测PEITC处理下HSF1的转录活性状态。结果显示PEITC增强HSF1在热应激期间的活化水平。5.为了排除敲除HSPA1A对PEITC处理3~#重组细胞结果的影响,在同样处理条件下处理Hela细胞后进行核质分离,WB和RT-PCR结果比较。结果显示HspA1A反馈调节HSF1磷酸化状态。6.RNA免疫共沉淀(RIP)实验发现并证明HSF1能直接结合Hsp70的mRNA进行翻译调控;免疫共沉淀(Co-IP)实验发现并证明HSF1参与调控应激状态下核糖体的组装;PEITC影响HSF1在应激状态下与mRNA或核糖体的相互作用。结论PEITC是HSF1的激活剂;PEITC使HSF1在热应激期间持续活化并抑制下游靶蛋白的翻译;HspA1A负反馈调节HSF1的磷酸化状态,与HSF1共同参与调控应激状态下核糖体的组装及对Hsp70 mRNA的翻译。(本文来源于《河南大学》期刊2019-06-01）
韩文秀[2]（2016）在《自噬缺失激活HSF1介导的热休克反应的分子机制》一文中研究指出背景自噬(autophagy)是真核生物细胞内去除破损细胞器和半衰期较长蛋白质的一种生理过程,是调控细胞内稳态应激反应之一,在进化上十分保守。自噬根据发生过程的不同,可以分为叁种:巨自噬(macroautophagy)、微自噬(microautophagy)和分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)。其中最典型的是巨自噬,其主要是通过形成自噬体并与溶酶体融合成自噬溶酶体来降解细胞自身物质。自噬的发生主要由自噬相关基因(autophagy relation genes,ATGs)控制。ATG7是自噬体形成的关键调节因子,在ATG12和ATG5结合过程以及LC3的脂化过程中起重要作用,能够有效的激活自噬,防止错误折迭蛋白的累积。在正常生理条件下,自噬负责去除损坏的或无功能的细胞器和蛋白质,从而给细胞代谢提供氨基酸和其它必需成分。在应激刺激下(如营养匮乏,氧化应激,有毒化合物,以及病原体的侵入),自噬被激活去除损坏的细胞内组分。自噬对于细胞分化和组织重塑必不可少,同时对细胞的生存和死亡发挥重要作用。热休克反应是细胞中另外一种重要的保护性机制。热休克反应(heat shock response,HSR)是生物体和细胞应对各种外界压力条件,通过激活热休克转录因子(HSFs),调节热休克蛋白(HSPs)的表达,从而保持细胞内稳态的一种生理过程。已知的热休克转录因子有四种:HSF1、HSF2、HSF3和HSF4,其中HSF1是介导热休克反应的主要转录因子。在正常生理条件下,热休克蛋白的表达量很少,只占总蛋白的1-2﹪。在热激、活性氧过多或炎症的刺激下,Hsf1被激活后结合到下游热休克蛋白基因的启动子上,促进热休克蛋白的表达,从而维持细胞内环境稳态。热休克蛋白根据分子量不同,可以分成两类:一类是ATP依赖型的大分子HSPs,如HSP100、HSP90、HSP70和HSP60;一类是不依赖ATP的小分子HSPs,如HSP25和αB-crystallin等。在不同的组织或细胞中,热休克蛋白的功能具有差异性。有研究表明,HSP70、HSP25和αB-crystallin热休克蛋白具有抗凋亡的功能。HSP25在亨廷顿氏舞蹈症的发生中起重要的保护作用,HSP25的突变可能会导致运动神经元的病变。近来发现应激反应的转录因子如p53,NF-κB和STAT3在自噬中发挥重要调节作用。同样作为转录因子,HSF1被发现可以通过直接调节ATG7介导自噬来保护肿瘤细胞抵抗化疗作用。肺腺癌A549细胞系中过表达的HSP70可以调节m TOR/Akt信号通路从而抑制细胞自噬。然而,小鼠成纤维细胞和小鼠近端肾小管细胞中自噬对HSF1介导的热休克反应的调控并不清楚。据研究报道,自噬的缺失和许多疾病的发生相关,比如肌肉萎缩、神经退行性疾病、肿瘤的发生以及衰老等。热休克反应和自噬均为细胞应对外界环境压力的重要保护性机制。通过本课题的研究,我们将深入探讨HSF1介导的热休克反应是否在自噬缺失的细胞中存在代偿作用。目的本课题以敲除ATG7的小鼠成纤维细胞和小鼠近端肾小管细胞为研究对象,探究自噬缺失引发的HSF1介导的热休克反应及其分子机制。方法1.应用NIH3T3的方法建立ATG7~(F/F)转基因小鼠成纤维细胞(MEF/ATG7~(F/F))和敲除ATG7的小鼠成纤维细胞(MEF/ATG7~(-/-)),并应用免疫印记检测两种细胞中的自噬和热休克反应水平;2.在应激刺激(43℃热激和MG132处理)处理下,用Real time PCR和免疫印记测定细胞内热休克蛋白的m RNA和蛋白表达水平;3.在不处理和热休克刺激下进行免疫印记测定小鼠近端肾小管细胞MPTC/ATG7~(F/F)和MPTC/ATG7~(-/-)中的自噬和热休克反应水平;4.染色质免疫沉淀实验(ChIP)检测43℃热激刺激下两种稳定株细胞中HSF1和热休克蛋白基因启动子的结合情况;5.分别用细胞核质分离实验和HSF1的叁聚化检测实验探究43℃热激刺激下HSF1转录活性激活的分子机制;6.分别用EBSS和顺铂(cis-platin)处理两种细胞,应用免疫印迹方法探究敲除ATG7后高表达的HSP25对自噬缺失细胞的作用。结果敲除小鼠成纤维细胞和小鼠近端肾小管细胞中的ATG7基因,可以阻断细胞自噬;自噬被阻断后,细胞内HSP25的蛋白及m RNA表达量均增多;HSF1叁聚化增加使HSF1活性增强,从而直接促进HSP25的表达;高表达的HSP25与自噬缺失细胞的抗凋亡有关。结论敲除ATG7基因后,细胞内HSF1介导的HSP25表达被激活,从而参与自噬缺失细胞内稳态的调控。(本文来源于《河南大学》期刊2016-05-01）
王钰铖[3]（2013）在《光动力氧化应激引起的细菌热休克反应研究》一文中研究指出背景与目的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)能有效杀伤细菌及其他病原微生物,其原理是光化学反应过程中的毒性活性产物作用于微生物核酸、脂质及蛋白质,引起微生物失活及死亡。热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSP)是一组普遍存在的蛋白质分子伴侣,能在细胞应激时行使再折迭、修复及再利用受损蛋白等功能,并且能稳定细胞膜脂质。HSP的两个家族GroEL/GroES和DnaK/DnaJ/GrpE对应激起主要的保护作用。细菌在氧化、抗生素、高渗、酸性等环境压力下HSP表达升高,而应激前上调HSP水平则使细菌能耐受应激条件。本研(本文来源于《中国激光医学杂志》期刊2013年05期）
丁淼[4]（2012）在《构建基于热休克反应信号转导的“与门”基因电路及其在肿瘤靶向基因治疗中的作用机制研究》一文中研究指出目的：放射导向的基因治疗是近年来提出的肿瘤治疗新策略，利用射线诱导治疗基因表达，二者协同作用杀伤肿瘤具有可喜的应用前景。但放射线虽然可严格控制治疗基因局限于照射野内表达，但照射野内不免包括瘤周正常组织，而治疗基因在瘤周表达将导致不必要的正常组织损伤。本研究利用肿瘤组织的缺氧特异性，设计一个以放射、缺氧为输入因子的“与门”基因电路，使其在放射、缺氧同时存在的条件下，治疗基因表达才得以启动，使治疗基因表达局限于受照射的缺氧肿瘤组织，增加了基因治疗的肿瘤特异性，最大限度的保护了正常组织。本实验的目的是利用连接天然存在的基因逻辑电路-热休克反应信号转导通路中各个信号反应元件和cArG启动子的辐射诱导特性，通过连接抑癌基因wtp53，构建辐射/乏氧双敏感性调控治疗基因表达的“与门”基因电路。方法：在GenBank中查找放射敏感性反应元件cArG和酵母热休克反应元件HSE的基因序列，应用DNA合成仪，采用互补寡核苷酸退火方法分别合成双链增强子序列。采用反转录病毒载体plxsn-EGFP为骨架，在转录调控位点插入上述合成序列。应用PCR扩增技术扩增SNF1、HSF1和p53的cDNA序列，然后分别在cArG6的下游插入SNF1和HSF1的序列构成对照载体plxsn-EGFP；将位于HSE4下游的EGFP更换为wtp53的cDNA序列，构成治疗载体plxsn-wtp53。分别采用测序分析、单酶切和双酶切方法鉴定重组载体的构建是否成功。结果：经测序分析，重组载体的DNA序列结果与预期全相符，与NCBI公布的cArG、SNF1、HSF1、HSE、EGFP和p53序列的ORF进行比对，发现正确性高达100%。而SNF1、HSF1和p53的基因片段经单酶切和双酶切处理后，酶切产物经1%琼脂糖凝胶电泳可见与预期的基因片段大小相符的特异性片段。结论：1、测序结果证明重组“与门”基因电路的各个反应元件未发生基因突变。2、测序和酶切鉴定证明重组“与门”基因电路构建成功。目的：验证前期构建的重组质粒能否产生“与门”效应，即是否仅在照射和缺氧条件下被激活。方法：将前期构建的报告载体plxsn-EGFP和治疗载体plxsn-wtp53转染A549细胞株后给予不同处理，荧光显微镜下观察各处理组绿色荧光蛋白的表达，并采用western-blotting方法检测基因电路中各个反应元件SNF1、HSF1和p53的蛋白表达差异。结果：1、转染plxsn-EGFP质粒的A549细胞经6Gy照射与1%O_2处理24h后，可见绿色荧光蛋白表达，但表达量较低，48h后EGFP表达量急剧升高，满视野呈片状融合，72h呈持续高表达状态。但经单纯照射或缺氧处理的A549细胞内却未见EGFP表达。2、western-blotting实验证明SNF1和HSF1蛋白在转染后并经照射与缺氧处理的A549细胞内表达最强（P<0.01），在转染后经照射处理的细胞内表达量也较其他组有明显升高（P<0.01），证明了射线能够激活SNF1和HSF1的表达。但p53表达情况则略有不同，虽然在转染经照射和缺氧处理后的细胞内表达量最高（P<0.01），但在接受照射的细胞内，其表达量也较其他组略有升高。结论：1、EGFP表达结果证明重组“与门”基因电路仅能在放射和缺氧条件下得以激活，具有“与门”特征。2、Western-blotting结果证明放射反应元件的射线敏感性，能够在6Gy照射条件下激活下游基因的表达。3、p53的western-blotting结果证明在A549细胞内，射线能够激活p53的表达，这也与此前的多个研究结果相一致。目的：评估前期构建的“与门”基因电路被激活后产生的抗癌效应，以期为临床提供新的并且有效的肿瘤治疗方法。方法：A549细胞转染plxsn-wtp53质粒并经不同处理后，分别于24h、48h和72h收集细胞，采用流式细胞仪测定细胞周期改变和细胞凋亡比例。采用CCK-8方法测定不同处理组的细胞增殖速率。裸鼠荷瘤，并在肿瘤体积生长至60mm~3，体重达到18g时进行瘤内质粒注射，并于第二天行局部2Gy照射，质粒注射和局部照射连续重复叁次。观察不同处理组裸鼠移植瘤生长情况，绘制肿瘤生长曲线。治疗3天后处死裸鼠，摘取肿瘤标本，采用H＆E染色观察移植瘤的常规病理改变，免疫组化方法检测wtp53在不同处理组的表达和移植瘤内的细胞凋亡率。结果：1、与对照组相比，经放射和缺氧处理24h、48h和72h后，转染plxsn-wtp53质粒的A549细胞进入G0/G1期、S期的细胞明显增多，进入G2/M期的细胞明显减少，与正常组和对照组相比都具有显着性差异（P<0.05）。2、A549细胞经plxsn-wtp53转染并经放射与缺氧处理后，凋亡细胞显着增多，在24h、48h和72h的细胞凋亡率与正常组和对照组相比都具有显着性差异（P<0.01）。3、以转染plxsn-wtp53质粒干预A549细胞增殖情况。结果表明转染的A549细胞经放射与缺氧处理后，在48h和72h时增殖效应明显减慢，与正常组和对照组相比具有显着性差异（P<0.05）。4、明显的肿瘤抑制效应在wtp53+radiation组可以观察到。虽然肿瘤在处理的6天内生长缓慢，从60mm~3到70mm~3，但是处理结束后，肿瘤平均体积随时间延长持续缩小，到第13天时，已缩小到59mm3，与其他对照组相比，具有统计学差异（P<0.05）。5、病理检查发现，注射plxsn-wtp53组在经照射3天后的移植瘤标本内出现显着性细胞凋亡，细胞缩小，胞核固缩，胞质空泡明显，形成较多凋亡小体。6、给药3天后采用免疫组化染色法检测p53的表达。从图中可以看出，p53主要表达于核被膜及核周间隙。并且可见正常组和单纯质粒注射组表达p53的阳性细胞数量极少，经过照射处理后的移植瘤内阳性细胞数有所升高，而注射plxsn-wtp53质粒并接受6Gy局部照射的移植瘤内的阳性细胞数量最多，与其他组相比具有统计学差异（P<0.01）。7、给药3天后采用TUNEL原位凋亡检测试剂盒检测移植瘤内A549细胞凋亡率。结果可见凋亡细胞呈深褐色阳性反应，正常组阳性细胞数量极少，经过照射或注射质粒处理后的移植瘤内凋亡细胞数量有所升高，而注射plxsn-wtp53质粒并接受6Gy局部照射的移植瘤内阳性细胞数量最多，凋亡率较其他组升高明显（P<0.01）。8、给药3天后免疫组化检测不同处理组内缺氧诱导因子HIF-1α的表达。结果表明各个处理组内均可见HIF-1α蛋白表达。且表达量各组未见明显差异。结论：1、“与门”基因电路激活后能够产生明显的促进A549细胞凋亡，抑制增殖和抑制细胞有丝分裂作用。2、“与门”基因电路在活体内同样能够产生抑制肿瘤生长和促进肿瘤细胞凋亡作用，从侧面证实了“与门”基因电路应用于人体的可行性。3、缺氧诱导因子HIF-1α的表达证实了A549移植瘤内存在缺氧区域。目的：由于不同类型的肿瘤细胞对射线的反应性不同，甚至同一类型的肿瘤组织的不同区域也对射线的反应性有差异，因此，不同肿瘤对射线的吸收程度也不相同，这就造成了我们前期构建的“与门”基因电路的效应在不同程度上的削弱。因此，本研究将进一步探讨前期构建的“与门”基因电路是否可以根据射线的照射剂量调节，使其更适用于临床应用。方法：采用流式细胞仪检测不同照射剂量引起的A549细胞和293细胞的凋亡率，分析2Gy照射剂量与前期的6Gy射线引起的肿瘤细胞和正常细胞的凋亡差异。A549细胞、HeLa细胞、HepG2细胞和MCF-7细胞分别转染plxsn-EGFP质粒，并经过2Gy照射和1%O2处理，于不同时间段观察绿色荧光蛋白的表达改变。A549细胞转染治疗质粒plxsn-wtp53，分别于24h、48h和72h于倒置显微镜下观察细胞形态学改变。RT-PCR和western-blotting方法检测不同处理组wtp53mRNA和蛋白的改变。采用流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡比例。采用CCK-8方法测定不同处理组的细胞增殖速率。Western-blotting方法检测凋亡相关因子BAX和BCL-2的改变。裸鼠荷瘤，并在肿瘤体积生长至60mm3，体重达到18g时进行瘤内plxsn-wtp53质粒注射，并于第二天进行局部2Gy照射。治疗3天后处死动物，采用H＆E染色观察移植瘤的常规病理改变，免疫组化方法检测EGFP和wtp53蛋白在不同处理组的表达和移植瘤内的肿瘤细胞凋亡率。免疫荧光双标检测不同处理的移植瘤内HIF-1α和wtp53的共表达情况。结果：1、从不同放射剂量照射下的细胞凋亡曲线中可以看出，6Gy引起的293细胞凋亡率很高，达到70%左右，但2Gy引起的293细胞的凋亡率较低，只有20%左右，因此我们选择2Gy作为照射刺激因子，能够引起较少的正常细胞损伤。同样，从图中可以看到，缺氧能够引起更多的正常细胞损伤，但是缺氧却能够使肿瘤细胞对射线产生耐受，引起的细胞死亡率较正常A549细胞低。2、荧光显微镜下观察不同处理组的EGFP表达。可见转染plxsn-EGFP质粒的A549细胞经2Gy照射与3h缺氧处理后，24h绿色荧光蛋白表达明显，但表达量低，48h后表达量急剧升高，72h呈持续高表达状态。而其他处理组的细胞内却未见任何EGFP表达。3、采用RT-PCR方法检测不同时间段wtp53mRNA的表达。可见放射和缺氧处理24h后，转染组内有少量wtp53表达，较正常组有少量升高，48h后wtp53表达量急剧升高，显着高于正常组和对照组（P<0.01），72h wtp53呈持续高表达状态，与正常组和对照组相比，同样具有显着性差异（P<0.01）。4、由于肿瘤细胞内的p53为突变型，因此p53蛋白在正常组和对照组内均未见表达。24h转染组也未见wtp53表达，说明24h蛋白表达量低，但48h和72h后转染组可见高表达的wtp53蛋白，与正常组和对照组相比具有显着性差异（P<0.01）。这与wtp53基因的mRNA表达水平检测结果一致。5、以转染plxsn-wtp53质粒干预A549细胞。24、48和72h时400倍显微镜下观察到的wtp53组与正常组和对照组相比，细胞间隙增大，细胞量见少，凋亡细胞增多。6、采用细胞增殖实验检测不同处理组的细胞增殖效应。结果表明在24h和48h时转染组细胞增殖率低于正常组和对照组，具有统计学差异（P<0.05）。但转染72h后各组细胞增殖差异不显着，可能与肿瘤细胞生长速度快，72h时叁组细胞全部布满瓶底有关。7、wtp53组经放射和缺氧处理24h后，进入G0/G1期、S期的细胞数量叁组并无明显差异；当作用48h后，转染组与正常组和对照组相比进入G0/G1期、S期的细胞明显增多，进入G2/M期的细胞明显减少。8、转染组在放射与缺氧处理后，凋亡率显着升高，在24h、48h和72h都具有明显促凋亡作用，与正常组和对照组相比均具有显着性差异（P<0.01）。9、转染48h后，wtp53组可见促凋亡蛋白BAX表达明显增高，抑凋亡蛋白BCL-2表达量明显减少，与正常组和对照组相比具有显着性差异（P<0.01）。10、给药3天后采用免疫组化法检测EGFP的表达。可见EGFP表达仅在注射过plxsn-EGFP质粒并接受照射处理的肿瘤组织内可以检测到，其余处理组内均未见阳性细胞表达。11、裸鼠皮下注射A549细胞，在肿瘤生长至第13天的时候瘤内注射plxsn-wtp53质粒，并进行2Gy局部照射，给药3天后将裸鼠处死，摘取肿瘤标本，H＆E染色行病理检查。结果提示注射plxsn-wtp53并接受照射的移植瘤内出现显着性细胞凋亡，细胞缩小，胞核固缩，胞质空泡明显，形成较多凋亡小体。12、给药3天后采用TUNEL原位凋亡检测试剂盒检测移植瘤内A549细胞凋亡率，凋亡细胞呈深褐色阳性反应。结果可见正常组和对照组阳性细胞数量极少，经过2Gy照射处理后的移植瘤内阳性细胞数量有所升高，而注射plxsn-wtp53质粒并接受2Gy局部照射的移植瘤内凋亡细胞数量最多，其凋亡率较其他组升高明显（P<0.01）。13、给药3天后采用免疫组化染色法检测p53的表达。可见p53主要表达于核被膜及核周间隙，且正常组表达p53的阳性细胞数量极少，经过照射处理后的移植瘤内阳性细胞数量有所升高，证明射线能够诱导p53的表达。而注射plxsn-wtp53质粒并接受2Gy局部照射的移植瘤内表达p53的阳性细胞数量较其他组升高明显（P<0.01）。14、给药3天后采用免疫荧光双标检测HIF-1α和wtp53蛋白的共表达。可见不同组间的HIF-1α蛋白的表达未见明显区别（绿色荧光），但是，wtp53的表达（红色荧光）在不同处理组却有明显区别。正常组，照射组，注射plxsn-wtp53质粒组的肿瘤组织内仅见少量wtp53表达，但是注射plxsn-wtp53质粒并接受照射处理的肿瘤组织内却可见明显的wtp53表达，且与HIF-1α蛋白成共表达状态。15、为了进一步验证我们构建的基因电路的“与门”特点，我们将重组的plxsn-EGFP质粒转染HeLa、HepG2和MCF-7细胞株，并经过照射和缺氧处理48h后，观察绿色荧光蛋白表达情况。从图中可以看出，EGFP仅在接受6Gy照射和缺氧的细胞内表达，其余各组均未见表达。结论：1、2Gy射线和1%O2可以激活重组的“与门”基因电路。2、重组“与门”基因电路可以根据放射剂量进行调节。3、被激活的“与门”电路能够产生明显的抑癌效应，并引起更小的正常组织损伤。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2012-05-01）
彭敏,朱熊兆,姚树桥,陈向一[5]（2010）在《热休克反应及热休克因子1对慢性心理应激小鼠探索行为的保护作用及其机制》一文中研究指出目的采用热休克因子1(HSF1)基因敲除小鼠模型,探讨HSF1基因及热休克预处理在慢性心理应激中对小鼠探索行为的保护作用,以及其机制是否与CA1区神经元凋亡有关。方法选取HSF1基因野生型小鼠40只和HSF1基因敲除小鼠36只,均随机分为热应激组、心理应激组、热应激加心理应激组和对照组,除对照组外各组给予相应的应激措施2个月,热应激加心理应激组小鼠在暴露于慢性心理应激前给予热休克预处理。2个月后检测各组小鼠高架十字迷宫中总探索次数、简易迷津探索格数及小鼠海马CA1区神经元的凋亡。结果野生型小鼠和基因敲除小鼠中心理应激组高架十字迷宫中总探索次数、简易迷津探索格数均较对照组减少(P<0.05)。野生型小鼠热应激加心理应激组高架十字迷宫中总探索次数、简易迷津探索格数均较心理应激组多(P<0.05),而基因敲除小鼠中不存在这一差异(P>0.05)。基因敲除小鼠心理应激组CA1区海马神经元凋亡数目多于对照组(P<0.05)。在全部76只小鼠中进行分析,小鼠高架十字迷宫总探索次数、简易迷津探索总格数与CA1区神经元凋亡负相关(r=-0.50,P<0.01;r=-0.51,P<0.01)。结论热应激预处理通过HSF1基因,抑制慢性心理应激所致探索行为减少,热应激预处理及HSF1基因对CA1区神经元的内源性保护作用可能是维持小鼠探索行为的重要机制。(本文来源于《中国神经精神疾病杂志》期刊2010年07期）
龚俊松,景亮[6]（2010）在《谷氨酰胺——热休克反应诱导剂》一文中研究指出谷氨酰胺是一种重要的条件必须氨基酸。在休克状态下,谷氨酰胺能诱导热休克蛋白表达,对保护脏器功能,维持机体内环境稳定、改善预后起重要作用。本文介绍了谷氨酰胺、热休克蛋白的结构及生物学功能,谷氨酰胺诱导热休克蛋白表达的可能机制,为谷氨酰胺应用于临床打下理论基础。(本文来源于《第十五次长江流域麻醉学学术年会暨2010年中南六省麻醉学学术年会暨2010年湖北省麻醉学学术年会论文集》期刊2010-05-28）
肖献忠[7]（2009）在《热休克反应-全身炎症反应综合征的重要内源性保护机制》一文中研究指出全身炎症反应综合征(Systemic Inflammatory Response Syndrome,SIRS)常并发于严重感染、创伤、烧伤及各种类型的休克,是临床各科特别是ICU十分常见的危重病症。多年来,尽管学术界对其发生机制进行了广泛研究,且采用了多(本文来源于《微循环学杂志》期刊2009年04期）
梁秋娟,张华莉,涂自智[8]（2009）在《热休克反应对内毒素诱导的IP-10基因表达的影响》一文中研究指出目的探讨在RAW264.7巨噬细胞中热休克反应(HSR)对大肠杆菌内毒素(脂多糖,LPS)诱导的干扰素诱导蛋白10(IP-10)表达的影响。方法RAW264.7巨噬细胞分别给予不同剂量及不同反应时间的LPS处理,并行HSR后抽提总RNA进行RT-PCR实验。结果LPS可促进RAW264.7巨噬细胞中IP-10基因的转录,具有剂量依赖性;用浓度为600μg/L的LPS刺激2h并行HSR时,IP-10的mRNA表达量最大。结论HSR能促进LPS诱导的IP-10基因mRNA表达水平。(本文来源于《右江民族医学院学报》期刊2009年04期）
苏开新,罗成群,尹朝奇[9]（2007）在《热休克反应对人HMGB1诱导内皮细胞分泌TNF-α的影响》一文中研究指出目的探讨热休克反应(HSR)对人HMG1诱导内皮细胞分泌TNF-α的影响及其意义。方法分别用含有HMGB10、0.1、1.0、10、20、50μg/ml的培养基处理热休克或未热休克的人脐静脉内皮细胞株ECV-304共10h,分别收取细胞和培养上清,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量,采用流式细胞技术观察内皮细胞的凋亡情况。结果将HMG1加入到血管内皮细胞培养液中能明显刺激其TNF-α的分泌。在0.1～50ug/ml范围内,HMG1诱导EVC-304的TNF-α分泌增加,呈明显的剂量依赖关系;50ug/ml HMG1能明显的诱导EVC-304细胞的凋亡;热休克反应能明显的降低HMG1诱导EVC-304的TNF-α分泌和EVC-304细胞的凋亡。结论热休克反应抑制了人HMG1诱导的血管内皮细胞的凋亡和TNF-α的分泌。(本文来源于《实用预防医学》期刊2007年04期）
[10]（2007）在《1个基因同时控制热休克反应与缺氧反应》一文中研究指出俄勒冈州立大学Johnson等发现,细胞对缺氧和热休克的反应有一相同的调节基因,即缺氧诱导因子-1(hypoxia induciblefactor-1,HIF-1)。HIF-1对于常态和病态的转换都发挥关键作用,使其成为促进健康和治疗癌症的有力候选靶标。(本文来源于《中华妇幼临床医学杂志》期刊2007年02期）
热休克反应论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景自噬(autophagy)是真核生物细胞内去除破损细胞器和半衰期较长蛋白质的一种生理过程,是调控细胞内稳态应激反应之一,在进化上十分保守。自噬根据发生过程的不同,可以分为叁种:巨自噬(macroautophagy)、微自噬(microautophagy)和分子伴侣介导的自噬(chaperone-mediated autophagy,CMA)。其中最典型的是巨自噬,其主要是通过形成自噬体并与溶酶体融合成自噬溶酶体来降解细胞自身物质。自噬的发生主要由自噬相关基因(autophagy relation genes,ATGs)控制。ATG7是自噬体形成的关键调节因子,在ATG12和ATG5结合过程以及LC3的脂化过程中起重要作用,能够有效的激活自噬,防止错误折迭蛋白的累积。在正常生理条件下,自噬负责去除损坏的或无功能的细胞器和蛋白质,从而给细胞代谢提供氨基酸和其它必需成分。在应激刺激下(如营养匮乏,氧化应激,有毒化合物,以及病原体的侵入),自噬被激活去除损坏的细胞内组分。自噬对于细胞分化和组织重塑必不可少,同时对细胞的生存和死亡发挥重要作用。热休克反应是细胞中另外一种重要的保护性机制。热休克反应(heat shock response,HSR)是生物体和细胞应对各种外界压力条件,通过激活热休克转录因子(HSFs),调节热休克蛋白(HSPs)的表达,从而保持细胞内稳态的一种生理过程。已知的热休克转录因子有四种:HSF1、HSF2、HSF3和HSF4,其中HSF1是介导热休克反应的主要转录因子。在正常生理条件下,热休克蛋白的表达量很少,只占总蛋白的1-2﹪。在热激、活性氧过多或炎症的刺激下,Hsf1被激活后结合到下游热休克蛋白基因的启动子上,促进热休克蛋白的表达,从而维持细胞内环境稳态。热休克蛋白根据分子量不同,可以分成两类:一类是ATP依赖型的大分子HSPs,如HSP100、HSP90、HSP70和HSP60;一类是不依赖ATP的小分子HSPs,如HSP25和αB-crystallin等。在不同的组织或细胞中,热休克蛋白的功能具有差异性。有研究表明,HSP70、HSP25和αB-crystallin热休克蛋白具有抗凋亡的功能。HSP25在亨廷顿氏舞蹈症的发生中起重要的保护作用,HSP25的突变可能会导致运动神经元的病变。近来发现应激反应的转录因子如p53,NF-κB和STAT3在自噬中发挥重要调节作用。同样作为转录因子,HSF1被发现可以通过直接调节ATG7介导自噬来保护肿瘤细胞抵抗化疗作用。肺腺癌A549细胞系中过表达的HSP70可以调节m TOR/Akt信号通路从而抑制细胞自噬。然而,小鼠成纤维细胞和小鼠近端肾小管细胞中自噬对HSF1介导的热休克反应的调控并不清楚。据研究报道,自噬的缺失和许多疾病的发生相关,比如肌肉萎缩、神经退行性疾病、肿瘤的发生以及衰老等。热休克反应和自噬均为细胞应对外界环境压力的重要保护性机制。通过本课题的研究,我们将深入探讨HSF1介导的热休克反应是否在自噬缺失的细胞中存在代偿作用。目的本课题以敲除ATG7的小鼠成纤维细胞和小鼠近端肾小管细胞为研究对象,探究自噬缺失引发的HSF1介导的热休克反应及其分子机制。方法1.应用NIH3T3的方法建立ATG7~(F/F)转基因小鼠成纤维细胞(MEF/ATG7~(F/F))和敲除ATG7的小鼠成纤维细胞(MEF/ATG7~(-/-)),并应用免疫印记检测两种细胞中的自噬和热休克反应水平;2.在应激刺激(43℃热激和MG132处理)处理下,用Real time PCR和免疫印记测定细胞内热休克蛋白的m RNA和蛋白表达水平;3.在不处理和热休克刺激下进行免疫印记测定小鼠近端肾小管细胞MPTC/ATG7~(F/F)和MPTC/ATG7~(-/-)中的自噬和热休克反应水平;4.染色质免疫沉淀实验(ChIP)检测43℃热激刺激下两种稳定株细胞中HSF1和热休克蛋白基因启动子的结合情况;5.分别用细胞核质分离实验和HSF1的叁聚化检测实验探究43℃热激刺激下HSF1转录活性激活的分子机制;6.分别用EBSS和顺铂(cis-platin)处理两种细胞,应用免疫印迹方法探究敲除ATG7后高表达的HSP25对自噬缺失细胞的作用。结果敲除小鼠成纤维细胞和小鼠近端肾小管细胞中的ATG7基因,可以阻断细胞自噬;自噬被阻断后,细胞内HSP25的蛋白及m RNA表达量均增多;HSF1叁聚化增加使HSF1活性增强,从而直接促进HSP25的表达;高表达的HSP25与自噬缺失细胞的抗凋亡有关。结论敲除ATG7基因后,细胞内HSF1介导的HSP25表达被激活,从而参与自噬缺失细胞内稳态的调控。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
热休克反应论文参考文献
[1].王翔翔.抗肿瘤药物PEITC对热休克反应双重调控机制的研究[D].河南大学.2019
[2].韩文秀.自噬缺失激活HSF1介导的热休克反应的分子机制[D].河南大学.2016
[3].王钰铖.光动力氧化应激引起的细菌热休克反应研究[J].中国激光医学杂志.2013
[4].丁淼.构建基于热休克反应信号转导的“与门”基因电路及其在肿瘤靶向基因治疗中的作用机制研究[D].重庆医科大学.2012
[5].彭敏,朱熊兆,姚树桥,陈向一.热休克反应及热休克因子1对慢性心理应激小鼠探索行为的保护作用及其机制[J].中国神经精神疾病杂志.2010
[6].龚俊松,景亮.谷氨酰胺——热休克反应诱导剂[C].第十五次长江流域麻醉学学术年会暨2010年中南六省麻醉学学术年会暨2010年湖北省麻醉学学术年会论文集.2010
[7].肖献忠.热休克反应-全身炎症反应综合征的重要内源性保护机制[J].微循环学杂志.2009
[8].梁秋娟,张华莉,涂自智.热休克反应对内毒素诱导的IP-10基因表达的影响[J].右江民族医学院学报.2009
[9].苏开新,罗成群,尹朝奇.热休克反应对人HMGB1诱导内皮细胞分泌TNF-α的影响[J].实用预防医学.2007
[10]..1个基因同时控制热休克反应与缺氧反应[J].中华妇幼临床医学杂志.2007
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