瘤胃微生物元基因组来源的新的组成型启动子获取

论文摘要

【目的】自极端环境来源的微生物的基因组中筛选新型的可用于合成生物学底盘细胞设计的启动子元件。【方法】本研究以含有绿色荧光蛋白结构基因和核糖体结合位点的探针型质粒pUC18-GFP为载体,通过构建瘤胃微生物元基因组质粒文库,从文库中快速高效筛选具有启动子功能的DNA片段。并且通过基于神经网络的启动子预测分析,获得可能的启动子区域。以绿色荧光蛋白和施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri来源的麦芽四糖淀粉酶作为报告基因验证所获得的新启动子片段的功能。【结果】我们从约3750个转化子中筛选到22条具有组成型启动子功能的DNA片段。这些片段与NCBI数据库中已报道的基因序列同源性较低,启动效率高低不等。我们通过启动子预测和亚克隆的方法获得两条全新的启动子片段RFa1p2 （76 bp）和RFb4p （547 bp）。此新的组成型启动子可以在不添加任何诱导剂的情况下启动异源蛋白在大肠杆菌基因工程菌中高效表达。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 启动子探针型载体pUC18-GFP构建
•   1.2 瘤胃胃液混合微生物元基因组文库构建
•   1.3 组成型启动子筛选、鉴定
•     1.3.1 组成型启动子筛选：
•     1.3.2 荧光强度测定：
•     1.3.3启动子片段鉴定：
•     1.3.4 部分启动子启动麦芽四糖淀粉酶基因表达鉴定：
•   1.4 启动子功能区域确定
• 2 结果和分析
•   2.1 瘤胃胃液元基因组质粒文库组成型启动子分析
•   2.2 组成型启动子RFa1分析及启动子功能区域确定
•   2.3 组成型启动子RFb4分析及启动子功能区域确定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王丽,赵云,杨茜,戴欣,朱雅新,董志扬

关键词: 元基因组文库,组成型启动子,瘤胃微生物,绿色荧光蛋白,麦芽四糖淀粉酶

来源: 微生物学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发国家重点实验室,中国科学院生物物理研究所蛋白质与多肽药物所重点实验室

基金: 国家自然科学基金(31300007,30770053,31240050)~~

分类号: Q78

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20190030

页码: 2218-2228

总页数: 11

文件大小: 1698K

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