导读:本文包含了成纤维细胞样滑膜细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,韧带,基质,蛋白酶,关节炎,前列腺素,类风湿。
成纤维细胞样滑膜细胞论文文献综述
朱嘉婧[1]（2019）在《佐剂诱导类风湿关节炎大鼠模型中SOCS3参与成纤维细胞样滑膜细胞增殖和凋亡中的研究》一文中研究指出类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性炎症性关节病变为特点的自身免疫性疾病,特征性表现为关节疼痛、肿胀、晨僵,如不能及早控制控制病情,可引起关节结构的严重破坏,最终导致患者残疾,其症状发作时可严重影响患者的劳动能力和生活质量,是威胁人类健康的重要疾病之一。RA的发病的分子机制一直是研究的热点、难点。细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)是STAT抑制因子(SSI)蛋白家族的成员,可作为STAT细胞因子信号通路的负调控因子,类风湿关节炎患者的滑膜细胞中存在过量表达。目的:本研究旨在阐明SOCS3基因表达在大鼠类风湿关节炎模型中成纤维细胞样滑膜细胞增殖和凋亡中的作用。方法:本研究采用20只佐剂诱导类风湿关节炎的Lewis大鼠,随机分为实验组和对照组,28天后处死实验组大鼠,收集第叁代成纤维细胞样滑膜细胞,通过慢病毒表达系统将基因转导入细胞,根据转导基因不同分为实验组(SOCS3组)、对照组(空载体组)和空白组。采用MTT比色法检测细胞活力;采用流式细胞术分析细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附试验检测炎症因子白介素-2(IL-2),干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达情况;采用RNA干扰技术沉默细胞中内源SOCS3的表达,检测SOCS3缺失对细胞增殖造成的影响。结果:与对照组和空白组相比,SOCS3表达组细胞增殖加强,凋亡减少,炎症因子IL-2、IFN-γ和TNF-α表达增多;在细胞内沉默SOCS3的表达,则抑制了细胞的增殖。本研究表明,SOCS3因子在大鼠类风湿关节炎模型可以显着促进成纤维细胞样滑膜细胞活力,抑制细胞凋亡。结论:1.在大鼠佐剂型类风湿关节炎模型中,慢病毒介导的SOCS3过量表达可使FLS;2.在大鼠佐剂型类风湿关节炎模型中,慢病毒介导的SOCS3过量表达抑制了FLS细胞发生凋亡;3.在大鼠佐剂型类风湿关节炎模型中,慢病毒介导的SOCS3过量表达可使炎症因子白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)表达。4.在大鼠佐剂型类风湿关节炎模型中,利用慢病毒沉默SOCS3表达抑制了FLS的增殖。综上所述,本研究不仅在动物、细胞和分子叁个水平探究了SOCS3在RA中扮演的角色,并且提示SOCS3是治疗RA的潜在作用靶点。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
刘亚明,葛贤明,郭滨,甄诚,魏芳[2]（2019）在《化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和凋亡的影响及其机制》一文中研究指出目的观察谷氨酰胺酶1(GLS1)抑制剂化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的增殖和凋亡的影响,并探讨相关机制。方法不同浓度的化合物968(0,5. 0,10. 0,20. 0,40. 0,80. 0μmol/L)刺激RA-FLS细胞24,48和72 h,0μmol/L组为空白对照组。MTT法检测化合物968刺激RA-FLS细胞24,48,72 h,对细胞的增殖抑制作用。倒置显微镜观察化合物968刺激细胞48 h细胞形态的变化。DAPI染色观察化合物968刺激细胞后细胞核的变化。Annexin-Ⅴ/PI双染法检测在化合物968作用下细胞的凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Mcl-1的表达。结果 MTT法结果显示,化合物968能显着抑制RA-FLS细胞的增殖(P<0.05),呈浓度和时间依赖性,作用24,48,72 h的IC50值分别为48. 45,35. 66,20. 95μmol/L。DAPI染色显示,随着药物浓度的增加,细胞核浓染,核固缩现象显着。Annexin-Ⅴ/PI双染法结果表明,化合物968可诱导RA-FLS细胞发生凋亡,20,40,80μmol/L化合物968作用48 h时,细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,化合物968可下调抗凋亡蛋白Mcl-1的表达,并上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论化合物968可以明显降低RA-FLS细胞的生存率并可以诱导细胞发生凋亡,其可能的机制是调节细胞凋亡相关蛋白Mcl-1和Bax的表达。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2019年03期）
蔡林奕,皮彩霞,谢静[3]（2019）在《前交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞共培养条件下前列腺素E_2的作用》一文中研究指出背景:滑膜细胞与前交叉韧带成纤维细胞共培养体系的建立能在较大程度上模拟韧带损伤后的微环境变化。在前列腺素E_2等炎症因子的刺激下,基质金属蛋白酶家族与基质金属蛋白酶组织抑制剂家族(tissue inhibitorsof metalloproteinases,TIMPs)表达量的严重失衡可在一定程度上解释前交叉韧带的不可自我修复特性。目的:在前交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞共培养的条件下,研究前列腺素E_2对滑膜细胞迁移和TIMPs基因表达的影响。方法:体外分别进行人滑膜细胞的单培养以及前交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞的Transwell共培养,用前列腺素E_2干预后,细胞划痕实验检测24 h时的滑膜细胞迁移率;半定量PCR分析滑膜细胞中TIMPs基因表达的变化。结果与结论:①前列腺素E_2处理单培养的滑膜细胞后,细胞迁移率显着下降(P <0.05);与共培养滑膜细胞比较,前列腺素E_2对单培养滑膜细胞迁移的抑制作用更为显着(P <0.05);②在单培养滑膜细胞中,前列腺素E_2呈浓度依赖性地抑制TIMPs基因的表达(P <0.05);对TIMP2和TIMP4而言,这种抑制作用具有时间依赖性;对TIMP1和TIMP3而言,随时间增加,基因表达上调;③共培养滑膜细胞TIMPs基因表达的变化幅度不如单培养细胞显着,且各个时间点的TIMPs基因表达量均高于单培养处理组(P <0.05);④结果提示,前列腺素E_2能显着抑制滑膜细胞的迁移和TIMPs的基因表达,而共培养的旁分泌作用可在一定程度上解除这种抑制。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年13期）
邓莉,冯健,何成松[4]（2018）在《齐墩果酸抑制肿瘤坏死因子-α诱导的成纤维细胞样滑膜细胞炎症因子表达及其机制研究》一文中研究指出探讨齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成纤维细胞样滑膜细胞的炎症因子表达的影响及其机制。首先复苏培养人成纤维细胞样滑膜细胞(FLS),通过RT-PCR检测细胞IL-6及IL-1βmRNA表达,采用Western blot方法检测p38MAPK及NF-κB蛋白表达变化,通过ELISA法检测细胞上清液中IL-6及IL-1β浓度。与对照组比较,TNF-α明显诱导FLS细胞IL-6及IL-1βmRNA的表达及上清液中IL-6及IL-1β的分泌(P<0.05),同时磷酸化p38蛋白和核NF-κB明显增加(P<0.05),且p38MAPK阻断剂SB203580能抑制TNF-α诱导的核NF-κB增加。OA呈浓度依赖性抑制TNF-α诱导的FLS细胞p38蛋白磷酸化和核NF-κB增加(P<0.05)。且OA、p38MAPK通路抑制剂SB203580或NF-κB阻断剂BAY 11-7082均能抑制TNF-α诱导的IL-6及IL-1β分泌增加(P<0.05)。综上所述,OA能抑制TNF-α诱导的FLS细胞炎症因子IL-6及IL-1β的产生,其机制可能与抑制p38MAPK/NF-κB信号通路有关。(本文来源于《天然产物研究与开发》期刊2018年07期）
赵薇,穆楠,舒震,张昭,张伟[5]（2015）在《类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞中膜联蛋白A2磷酸化修饰增强基质金属蛋白酶9的活性》一文中研究指出目的研究膜联蛋白A2(ANXA2)磷酸化修饰对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RAFLS)基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9水平及活性的影响。方法原代培养RAFLS,构建包装ANXA2干涉慢病毒,制备ANXA2显着下调的FLS(si ANXA2/FLS)及同型对照作为细胞模型,采用2型胶原蛋白刺激法间接磷酸化RAFLS中的ANXA2。实时定量PCR(qRT-PCR)分析ANXA2磷酸化对RAFLS细胞中MMP-2和MMP-9表达的影响,明胶酶谱实验观察ANXA2活化对RAFLS中MMP-2和MMP-9活性的影响。结果 qRT-PCR结果提示ANXA2磷酸化修饰对RAFLS中MMP-2和MMP-9的水平无显着影响,明胶酶谱实验显示ANXA2磷酸化修饰能够增强MMP-9的活性。结论通过胶原蛋白刺激法间接促进RAFLS中ANXA2的磷酸化修饰,显着增强MMP-9的活性。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2015年10期）
陈文琦[6]（2014）在《损伤滑膜细胞上清液作用下应力损伤和PGE_2对前交叉韧带成纤维细胞中LOX家族及MMP-1,2,3表达的影响》一文中研究指出随着进行体育运动的人数不断增多,膝关节韧带损伤的机率也大幅增加。前交叉韧带(anterior cruciate ligament, ACL)以及后交叉韧带在损伤后缺乏自我修复的能力,因此其损伤后康复治疗十分重要。目前对前交叉韧带损伤大部分采用关节置换外科手术进行治疗,但效果不佳并不能恢复其本来的生物力学特性,因此寻找新的有效治疗方法显得格外迫切。大量研究已经证实,在前交叉韧带损伤后关节液中炎症因子以及基质金属蛋白酶的大量积累打破了胞外基质合成与降解的动态平衡,阻碍了前交叉韧带重塑的进程,因此我们推测促炎因子可能在ACL损伤修复过程中起重要作用。本研究选用体外培养的正常滑膜细胞(Synovial cells, SC)上清液、损伤滑膜细胞上清液、损伤滑膜细胞上清液与PGE2分别作用于ACL成纤维细胞,观察细胞的迁移能力；12%应力刺激或与lOng/ml前列腺素E2(Prostaglandin E2, PGE2)协同处理损伤SC上清液培养下的ACL成纤维细胞,在处理后第1,3,6,12小时RT-PCR检测MMP-1,2,3的表达；分别在处理后第12、24、48、72小时明胶酶谱法检测培养液中MMP-2活性,并进行相对定量分析。结果显示,损伤SC上清液或与PGE2协同作用可以增强ACL成纤维细胞的迁移能力且协同作用下更为明显。在损伤SC上清液作用下,应力损伤或与PGE2对前交叉韧带成纤维细胞中LOXS基因表达下调,对MMP-1,2,3基因表达上调。酶谱结果显示应力损伤或与PGE2均促进ACL成纤维细胞中MMP-2活性,且具时间依赖性。在单独培养和与滑膜细胞共培养条件下用FX-4000柔性基底拉伸系统对ACL成纤维细胞施加4h,6%,1.0Hz的周期性机械拉伸。继续培养12h后,观察细胞形态,用MTS检测不同培养体系对ACL成纤维细胞活性的影响,明胶酶谱法检测ACL成纤维细胞上清液中MMP-2活性。结果显示,各组细胞均生长良好,未受到物理损伤。实验共分为四组：单培养组(对照组)；单培养且对ACL成纤维细胞施加6%周期性机械拉伸(动态组)；ACL成纤维细胞(下室)与SC(共培养组)；共培养组且对位于下室的ACL成纤维细胞施加6%周期性机械拉伸(动态共培养组)。动态组和动态共培养组的ACL成纤维细胞呈现垂直于拉伸方向定向排列。共培养组、动态共培养组与对照组比较,ACL成纤维细胞活性有显着增加,且ACL成纤维细胞上清液中MMP-2的活性显着增强。综上所述,滑膜组织及炎症因子PGE2对ACL损伤和修复起着至关重要的作用。并且通过对ACL成纤维细胞和SC动态共培养体系的研究,发现利用共培养体系膝关节腔微环境的方法能较好的模拟膝关节腔微环境。本研究将为ACL损伤修复的后续研究奠定基础,同时研究的结果也将为开发有效的治疗新方法奠定理论基础。(本文来源于《西南大学》期刊2014-05-14）
徐卫东,梁志民,袁恒锋[7]（2012）在《强直性脊柱炎滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞成骨分化的影响》一文中研究指出目的探讨强直性脊柱炎(AS)滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞成骨分化的影响。方法分别进行AS患者滑膜和韧带成纤维细胞原代培养,收集第1代的滑膜细胞培养液上清液,应用此上清液对韧带成纤维细胞进行诱导,分别于0、5、10、15、20d检测碱性磷酸酶和骨钙素表达水平,并于25d时进行钙结节染色。结果在应用AS滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞进行诱导的第10天,碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OC)表达水平明显升高,并在第15天达到高峰。第25天时进行钙结节VonKossa染色,发现有钙结节形成。结论 AS滑膜细胞培养上清液对韧带成纤维细胞具有成骨诱导分化的能力。(本文来源于《中华关节外科杂志(电子版)》期刊2012年05期）
陈荣富,王春莉,谢静,黄伟,梁熙[8]（2012）在《前列腺素E_2干预后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移》一文中研究指出背景:细胞迁移是组织损伤后修复过程中的重要环节之一,但是膝关节交叉韧带损伤后局部产生的细胞因子前列腺素E2对后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞迁移的影响尚未见报道。目的:在后交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞单培养和共培养的条件下,研究前列腺素E2对此2种细胞迁移的影响。方法:体外培养人后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞,分别进行2种细胞的单培养和Transwell共培养,并用质量浓度10μg/L的前列腺素E2干预。比较单培养和共培养下细胞生长状态;细胞划痕试验检测24h时细胞的迁移率。结果与结论:共培养使后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移率较单培养增高128%和48%。前列腺素E2分别使单培养下后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞的迁移率降低了28%和14%;使共培养下细胞的迁移率较相应的共培养组未处理细胞下降37%和24%。证实,在前列腺素E2的刺激下,后交叉韧带成纤维细胞和滑膜细胞迁移率均明显降低,尤其对共培养下后交叉韧带成纤维细胞迁移率的抑制更显着。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年28期）
闫杰[9]（2012）在《穿心莲内酯诱导人类风湿关节炎纤维细胞样滑膜细胞凋亡和细胞周期停滞作用的研究》一文中研究指出[背景]类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis)是一种自身免疫性疾病,病理上以滑膜增生和软骨降解为特征,滑膜的前端以血管翳进行性侵袭和破坏骨关节,这种血管翳中主要由纤维细胞样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLSs)组成,同时伴有大量的淋巴细胞和巨噬细胞浸润。在类风湿关节炎病人中,这种纤维细胞样滑膜细胞的侵袭是破坏骨关节的主要因素。我们认为,如果有办法抑制纤维细胞样滑膜细胞的生长,则可以对类风湿关节炎病人的病情缓解起到一定的作用。穿心莲(Andrographis paniculata)是爵床科穿心莲属植物,穿心莲内酯(Andrographolide)是中药穿心莲的主要活性成分,它是一种二萜类内酯类化合物,具有清热解毒,凉血消肿的功效。基础研究和临床领域的多项研究证明,穿心莲内酯有多种功效,如免疫调节、抗菌、抗炎、抗肿瘤、治疗心脑血管疾病等。以往的研究中也有穿心莲内酯诱导细胞凋亡和降低细胞活性的报道,大型临床试验中也发现穿心莲内酯对类风湿关节炎病人的症状缓解有一定的作用。但是,其具体的作用机制还不是十分清楚。因此,通过本实验,我们探讨穿心莲内酯对风湿性关节炎骨关节滑膜细胞的作用及其机制,以期为临床用药提供参考。[目的]培养纤维细胞样滑膜细胞,研究穿心莲内酯对纤维细胞样滑膜细胞的作用,并对其作用机制进行研究。具体研究内容包括：1.细胞培养,培养纤维细胞样滑膜细胞；2.研究穿心莲内酯对滑膜细胞的诱导凋亡作用及其机制；3.研究穿心莲内酯对滑膜细胞的诱导细胞周期停滞作用及相关机制。[方法]1.从15位接受关节置换术的类风湿关节炎病人中的关节滑膜中提取出纤维细胞样滑膜细胞。15位病人随即分为3个亚组,每一亚组中将提取出的滑膜组织混合在一起后再来提取细胞。首先将分离出的滑膜组织粉碎成直径小于1mm的小颗粒,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗后,在37度用1mg/mL的胶原酶1进行溶解,震荡2小时。反应后的细胞悬液用孔径70umn的细胞过滤网过滤,然后用细胞培养瓶进行培养,培养基为达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM),培养基中有10%的胎牛血清和抗生素(100U/mL青霉素,100μg/mL链霉素),,条件设置为37摄氏度、二氧化碳浓度为5%。细胞培养基每3天更换一次,细胞铺满后按1：3的比例传代培养。培养后的细胞与纤维细胞样滑膜细胞形态一致,在显微镜下呈现出典型的双极形状。在后续的实验中每个实验均做3次,每个亚组一次。2.培养后的滑膜细胞在无血清培养基中放置24小时后,用不同浓度的穿心莲内酯进行干预,实验分为四组：(1)空白对照组；(2)低浓度干预组,穿心莲内酯用药浓度为10μM/L；(3)中浓度干预组,穿心莲内酯用药浓度为20μM/L；(4)高浓度干预组,穿心莲内酯用药浓度为30μM/L。在药物干预48小时后,进行各项实验检测。3.检测内容(1)MTT法测定细胞生存率。将细胞种植于96孔板中,每个孔中的细胞数大约为10000个,24小时后用上述四组药物进行干预48小时,然后每孔中加入20μL的PBS溶液,其中MTT浓度为5 mg/mL,37摄氏度下培育4小时。用二甲基亚砜充分溶解还原物后用酶联检测仪上测定光密度(OD)值,检测波长540nm,参考波长690nm。(2)流式细胞术检测细胞周期。将细胞种植于六孔板中,每孔中的细胞数量为2×105,用上述四组药物进行干预,48小时后,收集细胞,碘化丙啶染色,流式细胞仪检测DNA含量。(3)凋亡检测。参照说明书,用膜连蛋白异氰酸荧光素试剂盒进行凋亡检测。将细胞种植于6孔板中,每孔数量为2×105细胞,孵育24小时后,用上述四组不同浓度药物干预48小时后,在暗房中用5μ1膜连蛋白异氰酸荧光素和10μ1碘化丙啶染色15分钟,染色后马上进行检测。早期的凋亡细胞用膜连蛋白异氰酸荧光素染色为阳性,碘化丙啶染色为阴性。(4)在提取细胞前,先用1%的十二烷硫酸钠,0.1mM/L苯甲磺酰基氟化物和蛋白酶抑制剂将细胞溶解,裂解物用离心机以13000的转速离心15分钟,取上清以—80℃保存。提取细胞时先加入预冷的抽提试剂,抽提试剂中含有20mM/L羟乙基哌嗪乙硫磺酸/氢氧化钾(pH 7.5),1.5 mM/L氯化镁,1 mM/L EDTA,1 mM/L二硫苏糖醇,0.1mM苯甲基磺酰氟化物(PMSF)和蛋白酶抑制剂。然后,将裂解液以每分1000转的转速离心分离细胞核和未破损的细胞。上清液在4℃条件下以每分13000转速离心15分钟。剩余的上清液保存在—80℃以备后续检测。用布拉德福德蛋白检测试剂盒检测蛋白浓度。(5)蛋白印迹分析。包括制胶、预电泳、加样、电泳分离、转膜、杂交、显色和显影定影等步骤。(6)细胞凋亡蛋白酶3活性检测。用凋亡蛋白酶3比色测定试剂盒,按照说明书进行检测。将细胞种植于6孔板中,每孔数量为2×105细胞,孵育24小时后,用上述四组不同浓度药物进行干预48小时,加入含有50 mM HEPES. 0.1%CHAPS、1 mM DTT、0.1 mM EDTA和0.1%Triton X-100的溶解剂.细胞裂解液在4℃下以12000转每分转速离心10分钟,将Caspase-3显色底物Ac-DEVD-pNA加入离心后的上清液中,在37摄氏度条件下孵育1小时。阴性对照组未加入显色底物。通过测量吸光度(405nm)来检测凋亡蛋白酶3活性。[结果]1.穿心莲内酯可以抑制类风湿关节炎纤维细胞样滑膜细胞的细胞增值并诱导细胞周期停滞。MTT结果说明穿心莲内酯干预显着抑制了滑膜细胞的增生；细胞周期检测显示S期和G2/M期的细胞比例显着下降,而G0/G1期的细胞比例上升。其中,在穿心莲内酯高剂量干预组中,G0/G1期的细胞增多接近30%,S和G2/M期的细胞下降达到50%。在药物干预组中我们还发现,细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21和p27表达水平升高,细胞周期蛋白依赖激酶4水平下降。2.穿心莲内酯诱导类风湿关节炎纤维细胞样滑膜细胞的细胞凋亡。V/PI染色显示凋亡细胞的数量呈剂量依赖性增多。免疫印迹法显示凋亡相关基因Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平下降。同对照组相比,药物干预组的Bcl-2/Bax的比率显着下降。3.穿心莲内酯促进细胞色素C的释放和细胞凋亡蛋白酶3的激活。免疫印迹结果显示药物干预组的剪切后细胞凋亡蛋白酶3表达水平升高,且这种表达水平的升高具有浓度依赖性。荧光底物标记的细胞凋亡蛋白酶3的水平也显着升高。Western blot analysis显示细胞色素c的表达水平也呈剂量依赖性的升高。[结论]1.穿心莲内酯抑制类风湿关节炎纤维细胞样滑膜细胞的细胞增值。诱导G0/G1期的细胞生长停滞。2.穿心莲内酯诱导细胞凋亡。穿心莲内酯可以促进细胞色素c从线粒体释放,继而激活凋亡蛋白酶3,引起细胞凋亡。3.穿心莲内酯有可能为临床上治疗类风湿关节炎的治疗提供参考。(本文来源于《华中科技大学》期刊2012-05-01）
张晓静,丛斌,张凤华,李淑瑾,马春玲[10]（2010）在《细胞因子诱导的蛋白质巯基亚硝基化对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞中CREB蛋白的DNA结合活性的影响》一文中研究指出目的:观察重组白细胞介素-1β(rIL-1β)和重组干扰素-γ(rIFN-γ)联合诱导的亚硝基化反应对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的影响。方法:(1)分别用细胞因子(rIL-1β和rIFN-γ的混合物)、诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)及溶剂单独或联合孵育大鼠滑膜细胞12h,收集培养液上清进行一氧化氮(NO)含量测定;并提取各组总蛋白,其中细胞因子组的蛋白与巯基氧化修饰还原剂二硫苏糖醇(DTT)反应15min,采用生物素转化法与免疫印迹技术检测各组蛋白质的亚硝基化修饰水平。(2)分别用rIL-1β、rIL-1β和rIFN-γ的混合物、AG及溶剂单独或联合孵育滑膜细胞12h,提取各组核蛋白,其中rIL-1β+rIFN-γ组核蛋白与DTT反应15min,采用电泳迁移率改变分析技术观察各组CREB的DNA结合活性。结果:(1)细胞经rIL-1β和rIFN-γ孵育后,NO生成增多(P<0.01),蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,而AG降低了NO的水平(P<0.01)并抑制了亚硝基化反应,DTT与总蛋白直接作用也可抑制亚硝基化反应。(2)rIL-1β和rIFN-γ共孵育明显抑制rIL-1β单独诱导的CREB的DNA结合活性(P<0.01),而AG抑制了rIL-1β和rIFN-γ的作用,DTT与核蛋白直接反应也可逆转细胞因子共孵育的作用,使CREB的DNA结合活性增高(P<0.01)。结论:IL-1β和IFN-γ共同孵育滑膜细胞可诱导细胞适度产生NO,使细胞内蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,导致CREB发生可逆性巯基氧化修饰,抑制其DNA结合活性。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2010年07期）
成纤维细胞样滑膜细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的观察谷氨酰胺酶1(GLS1)抑制剂化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的增殖和凋亡的影响,并探讨相关机制。方法不同浓度的化合物968(0,5. 0,10. 0,20. 0,40. 0,80. 0μmol/L)刺激RA-FLS细胞24,48和72 h,0μmol/L组为空白对照组。MTT法检测化合物968刺激RA-FLS细胞24,48,72 h,对细胞的增殖抑制作用。倒置显微镜观察化合物968刺激细胞48 h细胞形态的变化。DAPI染色观察化合物968刺激细胞后细胞核的变化。Annexin-Ⅴ/PI双染法检测在化合物968作用下细胞的凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Mcl-1的表达。结果 MTT法结果显示,化合物968能显着抑制RA-FLS细胞的增殖(P<0.05),呈浓度和时间依赖性,作用24,48,72 h的IC50值分别为48. 45,35. 66,20. 95μmol/L。DAPI染色显示,随着药物浓度的增加,细胞核浓染,核固缩现象显着。Annexin-Ⅴ/PI双染法结果表明,化合物968可诱导RA-FLS细胞发生凋亡,20,40,80μmol/L化合物968作用48 h时,细胞凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。Western blot结果显示,化合物968可下调抗凋亡蛋白Mcl-1的表达,并上调促凋亡蛋白Bax的表达。结论化合物968可以明显降低RA-FLS细胞的生存率并可以诱导细胞发生凋亡,其可能的机制是调节细胞凋亡相关蛋白Mcl-1和Bax的表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
成纤维细胞样滑膜细胞论文参考文献
[1].朱嘉婧.佐剂诱导类风湿关节炎大鼠模型中SOCS3参与成纤维细胞样滑膜细胞增殖和凋亡中的研究[D].吉林大学.2019
[2].刘亚明,葛贤明,郭滨,甄诚,魏芳.化合物968对类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和凋亡的影响及其机制[J].山西医科大学学报.2019
[3].蔡林奕,皮彩霞,谢静.前交叉韧带成纤维细胞与滑膜细胞共培养条件下前列腺素E_2的作用[J].中国组织工程研究.2019
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