导读:本文包含了体外复制论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,体外,烟草,获得性免疫,抑制,折迭,细胞。
体外复制论文文献综述
周冬花[1]（2019）在《芷类对朊病毒体外复制的影响及作用机制研究》一文中研究指出白藜芦醇(Res)、紫檀芪(Pte)和白皮杉醇(Pic)是叁种常见的芷类化合物。研究发现Res能够抑制羊瘙痒因子感染的SMB-S15细胞系中朊病毒(PrPSc)复制的活性,并在动物实验中证实经白藜芦醇处理后的细胞裂解液对小鼠失去了感染性。但其他芷类化合物是否具有类似的效果,以及可能的作用机理仍不明确。本研究观察了Res、Pte和Pic对细胞培养、蛋白质体外错误折迭循环扩增(PMCA)和实时震动诱导蛋白扩增(RT-QuIC)中PrPSc复制增殖的抑制效果,并利用生物分子相互作用分析(Biacore)系统检测不同重组朊蛋白(PrPs)与Res和Pte的分子结合能力。结果显示叁种芷类均能有效抑制SMB-S15细胞中PrPSc的复制,在相同工作浓度下Res的抑制效果最强,其次分别是Pic和Pte。小鼠PMCA使用的种子是细胞朊病毒(SMB-S15细胞裂解液)和脑朊病毒(S15、139A或ME7感染小鼠的脑组织匀浆)。结果显示,叁种药物均对朊病毒扩增有抑制活性,其中Res的抑制活性最高,其次分别为Pic和Pte。小鼠RT-QuIC结果也证明了这叁种芷类化合物均能有效抑制体系中朊蛋白纤维的形成,但作用效果最强的是Pic,其次是Res,Pte作用效果最弱。此外,还利用PMCA和RT-QuIC检测了Res、Pte和Pic对另一种啮齿动物(仓鼠)脑源性朊病毒的抑制作用。结果显示,Pic是作用效果最强的,然后依次是Res、Pte。另外Biacore的结果显示,Res对小鼠和仓鼠重组PrP的亲和力强于Pte;小鼠重组PrP与这两种化合物的亲和力比仓鼠重组PrP强。这些数据表明,芷类化合物具有抑制不同种类PrPSc体外复制的能力。抑制作用可能跟化合物与PrPs的分子结合活性有关。(本文来源于《中国疾病预防控制中心》期刊2019-06-30）
都玉印[2]（2019）在《血红素加氧酶1抑制鸭坦布苏病毒在体外复制作用的研究》一文中研究指出鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)感染引起鸭的一种以发育缓慢、产蛋量骤降和瘫痪等为特征的传染病。DTMUV是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科、黄病毒属、恩塔亚病毒群,它不但可以感染鸭,而且还可以感染鸡、鹅等禽类,对包括人类在内的哺乳动物具有潜在的健康威胁。血红素加氧酶(HO)是细胞的一种催化血红素降解的起始酶和非常重要的限速酶,血红素加氧酶1(HO-1)是HO的一种亚型,它是在机体内正常存在的一种重要的内源性保护蛋白,其活性不仅与机体的抗炎、抗氧化、抗凋亡等功能密切相关,而且在病毒的感染及复制过程中发挥着非常重要的调控作用,但是对不同病毒调控作用不尽相同。DTMUV感染能否影响细胞中HO-1的表达以及HO-1在DTMUV感染细胞的过程中发挥什么作用尚不清楚。因此本研究拟通过试验明确DTMUV感染对宿主细胞HO-1表达的影响及HO-1在DTMUV感染细胞过程中的作用及其作用机制,从而为该病的防治提供理论依据。DTMUV感染对细胞HO-1基因表达的影响。以实验室保存DTMUV毒株接种鸭胚成纤维细胞(DEF细胞),同时设未接毒对照组,分别收集感染不同时间段的接毒细胞和对照组细胞,提取各组样品的总RNA进行反转录,以荧光定量PCR方法检测细胞HO-1的表达量。试验结果表明,随着DTMUV感染时间的延长,细胞内HO-1的表达量先短暂升高,随后迅速下降到较低水平,表明DTMUV的感染可以抑制细胞内HO-1基因的表达。上调HO-1的表达对DTMUV在DEF细胞上感染的影响。为探索HO-1在DTMUV感染过程中的作用,本试验使用HO-1的特异性诱导剂——钴原卟啉(CoPP)及构建特异性表达质粒诱导细胞HO-1基因的表达,以检测其对DTMUV感染的影响。结果表明,特异性质粒和CoPP均可以显着上调HO-1基因和蛋白的表达水平而不影响细胞的活性,HO-1的基因表达量与特异性质粒转染含量及CoPP浓度均呈正相关,而DTMUV基因表达水平与其呈负相关,转染HO-1过表达质粒后,细胞内病毒的增殖受到了显着抑制。试验中使用最适浓度的特异性质粒及CoPP处理细胞可使细胞中HO-1的表达量显着上调,随着感染时间的延长,细胞中DTMUV的E基因表达量逐渐降低,表明上调HO-1的表达可以有效抑制DTMUV的感染。下调HO-1的表达对DTMUV感染的影响。为明确HO-1的作用我们利用si RNA特异性沉默HO-1基因以降低HO-1的表达量,然后检测HO-1基因沉默后的细胞中E基因的表达情况。结果表明,转染si RNA的细胞HO-1的基因表达量明显降低,而细胞中E基因表达量明显升高,随着si RNA浓度的升高,HO-1蛋白的表达量逐渐减少,细胞中病毒的含量显着增多,从而说明特异性降低HO-1的表达量可以促进DTMUV在细胞上的增殖。HO-1抑制DTMUV感染的作用机制研究。为了弄清HO-1抑制DTMUV感染的机理,我们在DTMUV感染细胞前、后分别用CoPP处理细胞,结果表明,无论感染前还是感染后处理细胞,均能抑制DTMUV的感染,且结果无显着差异。用biliverdin、CORM及Fe Cl3溶液分别模拟HO-1的叁种催化产物biliverdin、CO和Fe~(2+)处理细胞发现,只有用Fe Cl3处理的细胞HO-1的m RNA表达水平明显升高且病毒E基因表达量明显降低,从而说明CoPP促进细胞抑制DTMUV感染的作用与病毒感染的时期无关,在此过程中细胞对病毒感染的抑制作用是由HO-1的催化产物Fe~(2+)介导的。(本文来源于《山东农业大学》期刊2019-06-02）
曹素芳[3]（2018）在《靶向HP-PRRSV ORF7基因的siRNA重组伪狂病病毒的体外复制抑制效果》一文中研究指出为了评价靶向高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)ORF7的siRNA重组伪狂犬病病毒(rPRV)对HP-PRRSV复制的体外抑制效果。将500MOI的siRNA rPRV:rPRV gG-/siRNA N1、rPRV gG-/siRNA N2、rPRV gG-/siRNA N3分别感染Marc-145细胞,24h后再分别接种10 MOI PRRSV,感染病毒48h后,观察其抑制HPPRRSV HN1株复制效果;待细胞感染病毒72h后,应用间接免疫荧光试验(IFA)、实时荧光定量PCR及Western blot检测重组rPRV介导的siRNA对HP-PRRSV在细胞中复制的抑制作用。结果显示,与表达突变siRNA的rPRV gG-/siRNA Neg及接毒对照组相比,HP-PRRSV在细胞中的复制均可被3个siRNA rPRV有效抑制,其中重组病毒rPRV gG-/siRNA N2抑制效果最佳;进一步检测siRNA重组rPRV在Marc-145细胞中抑制HP-PRRSV HN1株的复制效果,结果显示,与对照组相比,重组病毒rPRV gG-/siRNA N1和rPRV gG-/siRNA N3抑制作用不明显,而rPRV gG-/siRNA N2不但能够有效抑制HP-PRRSV引起的细胞病变,而且能够消减HP-PRRSV N蛋白的表达,明显降低ORF7mRNA的表达水平(P<0.05),且其抑制作用具有剂量依赖性,其抑制效果至少可持续5d,但随着时间的延长逐渐减弱。结果提示siRNA rPRV在体外能抑制HP-PRRSV的复制。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2018年11期）
于成明,逯晓明,耿国伟,原雪峰[4]（2018）在《烟草丛顶病毒RdRp介导的体外复制的对比研究》一文中研究指出烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)属于番茄丛矮病毒科幽影病毒属。TBTV基因组是一条(+)ssRNA,全长由4 152个核苷酸组成,有4个可读框(ORF),编码4个蛋白,5′端缺乏帽子结构(m7GPPPN),3′末端也不带poly(A)尾。TBTV的RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)是ORF1通过-1位移码机制表达,其分子量约等于ORF1和ORF2的分子量之和。原核表达TBTV RdRp,并利用其融合的MBP标签进行纯化,纯化后MBP-RdRp可特异性识别TBTV正链和负链的3′末端序列,实现对模板链的体外复制;并且对正负链的3′末端的体外复制效率存在差异性,对负链3′末端的复制效率约是对正链3′末端复制效率的3～5倍。通过对TBTV正链3′末端的定点突变结合体外复制分析,初步确定了以正链RNA为模板合成负链的核心调控区域。通过TBTV不同分离物TB-JC,TB-MDI,TB-MDII的RdRp介导的体外复制效率的比较,发现TBTV不同分离物的RdRp活性具有一定的差异性。本研究创建的TBTV RdRp介导的体外复制体系即比较研究为进一步研究TBTV基因组复制调控奠定了基础。(本文来源于《中国植物病理学会2018年学术年会论文集》期刊2018-08-24）
朱琳枫,鲍欣欣,姚辉,李海波[5]（2018）在《金银花和鱼腥草抑制甲型流感病毒体外复制研究》一文中研究指出目的研究金银花和鱼腥草乙醇提取物对流感病毒复制的抑制作用,为阐明药用植物有效抗流感物质基础提供科学依据。方法以流感病毒感染的MDCK细胞为模型,研究金银花和鱼腥草乙醇提取物对流感病毒复制的抑制作用。结果金银花和鱼腥草乙醇提取物对流感病毒复制有较强的抑制作用,对H3N2和H1N1流感病毒的半数抑制浓度(IC50)分别为(236.28±15.37)、(290.50±34.82)μg/mL和(428.97±38.54)、(522.28±36.48)μg/mL。结论金银花和鱼腥草乙醇提取物对流感病毒的复制有一定的抑制作用。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2018年04期）
杨晶[6]（2017）在《ISG15对JEV体外复制的抑制作用和叁种佐剂对乙脑灭活疫苗的增效作用》一文中研究指出日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科,感染后可损害人中枢神经系统或引起猪死胎、木乃伊胎等繁殖机能障碍。因为没有对其有效的治疗方法,接种疫苗是最有效的预防该病的方法。目前主要通过弱毒疫苗和灭活疫苗防止乙脑病毒感染和流行。干扰素刺激基因15是一种泛素样蛋白,由IFN-α/β刺激产生,具有抗病毒作用,已有很多研究证实其在体内外的抗病毒作用。ISG15可能作为潜在的免疫佐剂增强疫苗的免疫效果。目前还有很多新型化学合成类佐剂可以刺激先天性免疫和适应性免疫应答,成为研究热点并应用于人用疫苗。本研究证实了 ISG15的体外抗病毒效应,探究了叁种免疫增强剂对JEV灭活疫苗免疫效果的影响,以及对体内ISG15表达的影响。1.建立 JEV、ISG15、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和 β-actin基因 RealTimePCR检测方法本研究根据GenBank中JEV核酸序列和猪源ISG15、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和β-actin mRNA核酸序列设计Real Time PCR引物。JEV病毒以感染复数M.O.I.=1接种猪外周血淋巴细胞,24 h后提取细胞RNA并反转录为cDNA,同时构建JEV PreM基因阳性标准质粒,以此为模板,建立Real Time PCR反应,确定退火温度和引物浓度,建立JEV、ISG15、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和β-actin基因的标准曲线。确定退火温度为60℃,引物浓度为0.25 μM。以此建立的Real Time PCR反应标准曲线各参数均符合要求,判定系数R2均大于0.99,JEV、β-actin、ISG15、IFN-γ、IL-2、IL-4 和 IL-10 扩增效率分别为 103.0%、103.0%、107.3%、97.3%、96.9%、100.4%、103.1%。该方法的重复性和特异性较好,为后续试验打下基础。2.过表达和干扰ISG15对JEV体外增殖的影响本研究通过IFN-α和JEV刺激猪睾丸(ST)细胞,实时荧光定量PCR检测干扰素刺激基因-15(ISG15)表达情况和JEV病毒核酸拷贝数,结果表明ISG15 mRNA相对表达量显着上升,JEV核酸拷贝数下降。扩增ISG15基因,克隆至pcDNA3.1表达载体,构建ISG15真核表达质粒。将此质粒转染ST细胞,24h后接种JEV。经检测,转染后ISG15mRNA表达量显着上升,病毒核酸量和滴度下降,表明ISG15过表达可显着抑制JEV体外增殖。构建ISG15靶向干扰质粒,转染ST细胞,24h后接种JEV,转染后ST细胞ISG15 mRNA相对表达量下降,成功干扰ISG15的表达,JEV病毒核酸量和滴度上升。以上结果提示ISG15对JEV体外增殖有抑制作用。3.叁种免疫佐剂对仔猪JEV灭活疫苗免疫效果的影响和ISG15的mRNA相对表达量变化本研究首先增殖JEV JS01病毒株,病毒滴度为107.5TCID50/mL,甲醛灭活病毒,制备常规白油乳剂JEV灭活疫苗和分别添加IP-23、IP-24、IP-26免疫增强剂的白油乳剂灭活疫苗。40日龄乙型脑炎抗体呈阴性的健康仔猪25头,随机分成5组,每组5头。第1、2、3组分别为含有IP-23、IP-24、IP-26免疫增强剂的JEV灭活疫苗试验组,第4组为常规灭活疫苗组,第5组为注射PBS空白对照组。间隔两周加强免疫一次。免疫增强剂试验组与常规免疫组相比,仔猪血清中和抗体滴度提高,其中IP-24组最显着。加免后14、28天分离外周血淋巴细胞。MTT法检测淋巴细胞增殖水平无显着差异。PBMCs用JEV JS01刺激24 h后收集细胞,Real Time PCR检测外周血淋巴细胞中细胞因子表达水平,其中ISG15 mRNA表达水平无显着差异。IP-24和IP-26组的IFN-γ、IL-2表达量显着上升,对Th1型免疫有促进作用。IP-23免疫组的IL-4表达量显着上升,主要促进Th2型免疫应答。(本文来源于《南京农业大学》期刊2017-06-01）
逯晓明,于成明,王国鲁,王德亚,耿国伟[7]（2017）在《烟草丛顶病毒RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)介导的体外复制体系》一文中研究指出通过重迭PCR扩增得到烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)中国分离物RdRp的编码序列,构建以pMALC2X为基础载体的原核表达载体pMAL-TB-RdRp。0.5 mM IPTG诱导可特异性表达分子量约为120 kDa的MBP-RdRp融合蛋白。温度梯度实验显示,18℃下诱导表达的MBP-RdRp融合蛋白的可溶性比例较高,约17%;经亲和层析纯化的MBPRdRp可特异性识别TBTV正链和负链的3'末端序列,催化体外复制;对正负链的3'末端的体外复制效率存在差别,识别负链3'末端的体外复制效率明显高于正链3'末端。本研究创建的TBTV RdRp介导的体外复制体系为进一步研究TBTV基因组复制调控奠定了基础。(本文来源于《植物病理学报》期刊2017年06期）
逯晓明[8]（2017）在《烟草丛顶病毒RdRp介导的体外复制调控研究》一文中研究指出烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)为番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)幽影病毒属(Umbravirus)成员,与黄症病毒科(Luteoviridae)的烟草扭脉病毒(Tobacco vein distorting virus,TVDV)复合侵染引起烟草丛顶病。TBTV基因组是一条(+)ssRNA,由4 152个核苷酸组成,编码4个开放阅读框。ORF1编码35 kDa的蛋白,ORF1的C端与ORF2的N端有8个密码子的重迭,ORF1蛋白通过-1位的移码翻译机制表达产生RdRp,为ORF1/ORF2融合蛋白形式。在对云南多地采集的烟草丛顶病毒进化分析后发现,烟草丛顶病毒RdRp编码区序列一致率相对较低,推测RdRp的活性变化可能导致病毒致病力的变化。本研究旨在建立TBTV RdRp介导的体外复制体系,并初步定位参与复制调控的RNA元件。首先通过重迭PCR扩增得到烟草丛顶病毒中国分离物RdRp的编码序列。构建以pMAL-C2X为基础载体的原核表达载体pMAL-TB-RdRp。0.5 mM IPTG诱导可特异性表达分子量约为120 kDa的MBP-RdRp融合蛋白。不同温度条件下诱导MBP-RdRp,结果显示,相比26℃和37℃,18℃下诱导表达的MBP-RdRp融合蛋白的可溶性比例较高,约17%;经亲和层析纯化的MBP-RdRp可特异性识别TBTV正链和负链的3'末端序列,催化体外复制;并且对正负链的3'末端的体外复制效率存在差别,识别负链3'末端的体外复制效率明显高于正链3'末端。说明TBTV RdRp介导的特异性体外复制的建立。同时,结合RNA结构体外分析构建了3'UTR区的部分突变体,根据体外复制效率的变化初步定位了参与复制调控的RNA元件。同时,构建了不同分离物TB-JC,TB-MDI,TB-MDII的RdRp的原核表达载体,并初步验证了纯化的不同分离物RdRp的体外复制活性。为将来进行不同TBTV分离物RdRp的活性比较并定位关键氨基酸突变奠定了基础。(本文来源于《山东农业大学》期刊2017-04-01）
李杰,陈佩玉,郑毅,吴南屏[9]（2016）在《1型人类免疫缺陷病毒体外复制、检测系统的建立及评价》一文中研究指出目的建立1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)体外复制和检测系统(JLTRG/H9细胞混合培养体系),并初步应用于抗HIV-1有效药物筛选。方法 JLTRG细胞与H9细胞按不同比例混合培养后,通过流式细胞技术分别于24、48、72、96 h观察和检测JLTRG细胞增强绿色荧光蛋白(EGFP)的表达来评估JLTRG细胞感染程度,并以此确定最优感染体系。然后以此最优体系来筛选抗HIV-1有效药物。结果(1)在JLTRG/H9细胞混合培养体系中,JLTRG与H9细胞混合培养比例为10:1时,JLTRG细胞EGFP表达量在各个时间点均为最高。(2)在JLTRG/H9细胞混合培养体系(JLTRG与H9细胞数比值10:1)中,T-20能有效抑制JLTRG细胞EGFP的表达,并且呈现剂量依赖性。结论 JLTRG/H9细胞混合培养体系(JLTRG与H9细胞数比值10:1)适用于HIV-1药物筛选。(本文来源于《现代实用医学》期刊2016年12期）
丁宁,张明香[10]（2016）在《肝细胞核因子4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型建立及初步应用》一文中研究指出目的建立一种肝细胞核因子4α(HNF4α)增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型。方法从临床获得的急性乙型肝炎患者血清中扩增并克隆HBV全长DNA;手术获得肝组织中提取总RNA,扩增并克隆HNF4α基因cDNA。BspQI/ScaI双酶切回收HBV全长DNA,HNF4α基因cDNA定向连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA3.1-4α表达载体。将HBV全长DNA1μg/孔,按比例共转染pcDNA3.1-4α(0,0.5μg,1μg)于HepG2细胞,96 h后检测细胞上清中的HBsAg、HBeAg和HBV DNA;以0.5μg/1μg pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA共转染HepG2细胞,加入不同浓度LAM(0,100μmol/L)和ETV(0,10μmol/L),评价建立的体外复制模型。结果 1%TAE琼脂糖凝胶电泳鉴定HBV全长DNA和HNF4αcDNA PCR产物,条带长度为3.2 kb和1.5 kb;目的片段克隆后测序鉴定正确。胶回收HBV全长DNA克隆质粒酶切目的片段,构建的pcDNA3.1-4α表达载体酶切鉴定正确后,测序鉴定。不同浓度比例的pcDNA3.1-4α与HBV全长DNA转染HepG2细胞后,0μg/1μg组合:HBeAg阴性,HBsAg阴性,上清HBV DNA载量为103;0.5μg/1μg组合:HBeAg阴性,HBsAg A值从0.1升高到1.99,上清HBV DNA载量从1×10~3 IU/mL升高到4×10~4 IU/mL;1μg/1μg组合:HBeAg阴性,HBsAg A值从0.1升高到2.4,上清HBV DNA载量从1×10~3 IU/mL升高到1×10~5 IU/mL;LAM从0~100μmol/L,细胞上清HBV DNA降低了97.6%;ETV从0~10μmol/L,上清HBV DNA降低了99.0%。结论 HNF4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型,可以体外评价临床常用抗病毒药物,为后续HBV研究提供新思路。(本文来源于《肝脏》期刊2016年01期）
体外复制论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)感染引起鸭的一种以发育缓慢、产蛋量骤降和瘫痪等为特征的传染病。DTMUV是单股正链RNA病毒,属于黄病毒科、黄病毒属、恩塔亚病毒群,它不但可以感染鸭,而且还可以感染鸡、鹅等禽类,对包括人类在内的哺乳动物具有潜在的健康威胁。血红素加氧酶(HO)是细胞的一种催化血红素降解的起始酶和非常重要的限速酶,血红素加氧酶1(HO-1)是HO的一种亚型,它是在机体内正常存在的一种重要的内源性保护蛋白,其活性不仅与机体的抗炎、抗氧化、抗凋亡等功能密切相关,而且在病毒的感染及复制过程中发挥着非常重要的调控作用,但是对不同病毒调控作用不尽相同。DTMUV感染能否影响细胞中HO-1的表达以及HO-1在DTMUV感染细胞的过程中发挥什么作用尚不清楚。因此本研究拟通过试验明确DTMUV感染对宿主细胞HO-1表达的影响及HO-1在DTMUV感染细胞过程中的作用及其作用机制,从而为该病的防治提供理论依据。DTMUV感染对细胞HO-1基因表达的影响。以实验室保存DTMUV毒株接种鸭胚成纤维细胞(DEF细胞),同时设未接毒对照组,分别收集感染不同时间段的接毒细胞和对照组细胞,提取各组样品的总RNA进行反转录,以荧光定量PCR方法检测细胞HO-1的表达量。试验结果表明,随着DTMUV感染时间的延长,细胞内HO-1的表达量先短暂升高,随后迅速下降到较低水平,表明DTMUV的感染可以抑制细胞内HO-1基因的表达。上调HO-1的表达对DTMUV在DEF细胞上感染的影响。为探索HO-1在DTMUV感染过程中的作用,本试验使用HO-1的特异性诱导剂——钴原卟啉(CoPP)及构建特异性表达质粒诱导细胞HO-1基因的表达,以检测其对DTMUV感染的影响。结果表明,特异性质粒和CoPP均可以显着上调HO-1基因和蛋白的表达水平而不影响细胞的活性,HO-1的基因表达量与特异性质粒转染含量及CoPP浓度均呈正相关,而DTMUV基因表达水平与其呈负相关,转染HO-1过表达质粒后,细胞内病毒的增殖受到了显着抑制。试验中使用最适浓度的特异性质粒及CoPP处理细胞可使细胞中HO-1的表达量显着上调,随着感染时间的延长,细胞中DTMUV的E基因表达量逐渐降低,表明上调HO-1的表达可以有效抑制DTMUV的感染。下调HO-1的表达对DTMUV感染的影响。为明确HO-1的作用我们利用si RNA特异性沉默HO-1基因以降低HO-1的表达量,然后检测HO-1基因沉默后的细胞中E基因的表达情况。结果表明,转染si RNA的细胞HO-1的基因表达量明显降低,而细胞中E基因表达量明显升高,随着si RNA浓度的升高,HO-1蛋白的表达量逐渐减少,细胞中病毒的含量显着增多,从而说明特异性降低HO-1的表达量可以促进DTMUV在细胞上的增殖。HO-1抑制DTMUV感染的作用机制研究。为了弄清HO-1抑制DTMUV感染的机理,我们在DTMUV感染细胞前、后分别用CoPP处理细胞,结果表明,无论感染前还是感染后处理细胞,均能抑制DTMUV的感染,且结果无显着差异。用biliverdin、CORM及Fe Cl3溶液分别模拟HO-1的叁种催化产物biliverdin、CO和Fe~(2+)处理细胞发现,只有用Fe Cl3处理的细胞HO-1的m RNA表达水平明显升高且病毒E基因表达量明显降低,从而说明CoPP促进细胞抑制DTMUV感染的作用与病毒感染的时期无关,在此过程中细胞对病毒感染的抑制作用是由HO-1的催化产物Fe~(2+)介导的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外复制论文参考文献
[1].周冬花.芷类对朊病毒体外复制的影响及作用机制研究[D].中国疾病预防控制中心.2019
[2].都玉印.血红素加氧酶1抑制鸭坦布苏病毒在体外复制作用的研究[D].山东农业大学.2019
[3].曹素芳.靶向HP-PRRSVORF7基因的siRNA重组伪狂病病毒的体外复制抑制效果[J].中国兽医学报.2018
[4].于成明,逯晓明,耿国伟,原雪峰.烟草丛顶病毒RdRp介导的体外复制的对比研究[C].中国植物病理学会2018年学术年会论文集.2018
[5].朱琳枫,鲍欣欣,姚辉,李海波.金银花和鱼腥草抑制甲型流感病毒体外复制研究[J].国际检验医学杂志.2018
[6].杨晶.ISG15对JEV体外复制的抑制作用和叁种佐剂对乙脑灭活疫苗的增效作用[D].南京农业大学.2017
[7].逯晓明,于成明,王国鲁,王德亚,耿国伟.烟草丛顶病毒RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)介导的体外复制体系[J].植物病理学报.2017
[8].逯晓明.烟草丛顶病毒RdRp介导的体外复制调控研究[D].山东农业大学.2017
[9].李杰,陈佩玉,郑毅,吴南屏.1型人类免疫缺陷病毒体外复制、检测系统的建立及评价[J].现代实用医学.2016
[10].丁宁,张明香.肝细胞核因子4α增强型1.0倍HBV复制子体外复制模型建立及初步应用[J].肝脏.2016
论文知识图
