三种水生生物活性肽的制备分离与促免疫活性研究

论文摘要

我国水域的辽阔,气候环境的多样,使得我国水生生物资源十分丰富,高附加值利用这些资源、开发水生生物资源精深加工工艺,有利于国家经济的发展和生态保护[1]。同时,水生生物蕴含许多营养成分和生物活性物质,可开发成保健食品或药品,具有广泛的市场前景。本文分别以食品加工过程产生的下脚料罗非鱼鱼鳞、海参内脏、鳗鱼鱼骨,制备分离得到罗非鱼肽、海参肽、鳗鱼肽,并研究三种生物活性肽对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫激活活性,及其作用机制。本文研究结果如下:（1）改进了罗非鱼肽的制备工艺,将酸碱水洗的步骤进行优化、改变酶解的条件、增加层叠过滤与精密过滤步骤,使罗非鱼肽的制备成本降低,产率和质量提升。研究罗非鱼肽的免疫活性发现,罗非鱼肽可诱导RAW264.7细胞产生一氧化氮（NO）,具有剂量依赖性,并诱导一氧化氮合酶（iNOS）的表达,且无细胞毒性作用,这些证明罗非鱼肽具有良好的免疫增强活性。（2）通过酶解海参内脏制备海参肽,并对其分子量分布、氨基酸组成、N端结构、毒性及纯度进行测定。对海参肽免疫活性的研究发现,海参肽可增加RAW264.7细胞免疫活性,且无细胞毒性作用。进一步研究发现,海参肽通过激活NF-κB信号通路与MAPK信号通路,促进TNF-α、IL-6分泌,从而发挥促免疫活性。（3）通过酶解鳗鱼鱼骨制备鳗鱼肽,并发现鳗鱼肽具有诱导RAW264.7细胞产生NO,激活NF-κB信号通路与MAPK信号通路,促进TNF-α,IL-6分泌的功能,具有促免疫活性,进一步通过离子交换层析和凝胶过滤层析分离,最终得到促免疫活性最强的鳗鱼肽Fr-1-1组分。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
•   1.1 罗非鱼
•   1.2 海参
•   1.3 鳗鱼
•   1.4 生物活性肽
•     1.4.1 生物活性肽的制备
•     1.4.2 生物活性肽的分离纯化
•   1.5 免疫与炎症
•     1.5.1 炎症介质
•     1.5.2 参与免疫的信号通路
• 第2章 罗非鱼肽的制备分离及其对RAW264.7 细胞的免疫促进的研究
•   2.1 实验试剂与仪器
•     2.1.1 实验试剂与材料
•     2.1.2 实验仪器
•     2.1.3 细胞株
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 罗非鱼肽的制备
•     2.2.2 细胞培养
•     2.2.3 细胞传代
•     2.2.4 细胞活力检测
•     2.2.5 Griess法检测细胞一氧化氮（NO）生产量
•     2.2.6 Western blot蛋白免疫印迹法
•     2.2.7 统计学分析
•   2.3 实验结果
•     2.3.1 罗非鱼肽粉的制备
•     2.3.2 罗非鱼肽对RAW264.7 细胞活力的影响
•     2.3.3 罗非鱼肽对RAW264.7 细胞生成NO的影响
•     2.3.4 罗非鱼肽对RAW264.7 细胞iNOS蛋白表达量的影响
•   2.4 讨论与总结
• 第3章 海参肽的制备分离及其对RAW264.7 细胞的免疫促进的研究
•   3.1 实验试剂与仪器
•     3.1.1 实验试剂
•     3.1.2 实验仪器
•     3.1.3 细胞株
•   3.2 实验方法
•     3.2.1 海参肽的制备
•     3.2.2 海参肽的N端测序
•     3.2.3 海参肽样品性状、质量检测
•     3.2.4 海参肽分子量分布检测
•     3.2.5 海参肽氨基酸组成及含量测定
•     3.2.6 急性经口毒性试验
•     3.2.7 细胞培养
•     3.2.8 细胞传代
•     3.2.9 细胞活力检测
•     3.2.10 一氧化氮（NO）测定
•     3.2.11 Western blot蛋白免疫印迹法
•     3.2.12 细胞因子检测
•     3.2.13 RT-PCR
•     3.2.14 统计学分析
•   3.3 实验结果
•     3.3.1 海参肽N端测序分析结果
•     3.3.2 海参肽样品性状、质量检测结果
•     3.3.3 海参肽分子量分布检测结果
•     3.3.4 海参肽氨基酸组成及含量测定结果
•     3.3.5 海参肽急性经口毒性试验结果
•     3.3.6 海参肽对RAW264.7 细胞活力的影响
•     3.3.7 海参肽对RAW264.7 细胞生成NO的影响
•     3.3.8 海参肽对RAW264.7 细胞iNOS蛋白表达的影响
•     3.3.9 海参肽对RAW264.7 细胞NF-κB信号通路和MAPK信号通路的影响
•     3.3.10 海参肽对RAW264.7 细胞TNF-α,IL-6 分泌的影响
•   3.4 讨论与结论
• 第4章 鳗鱼肽的制备分离及其对RAW264.7 细胞的免疫促进的研究
•   4.1 实验试剂与仪器
•     4.1.1 实验试剂
•     4.1.2 实验仪器
•     4.1.3 细胞株
•   4.2 实验方法
•     4.2.1 鳗鱼肽的制备
•     4.2.2 细胞培养
•     4.2.3 细胞传代
•     4.2.4 细胞活力检测
•     4.2.5 一氧化氮（NO）测定
•     4.2.6 Western blot蛋白免疫印迹法
•     4.2.7 细胞因子检测
•     4.2.8 RT-PCR
•     4.2.9 离子交换层析
•     4.2.10 凝胶过滤层析
•     4.2.11 统计学分析
•   4.3 实验结果
•     4.3.1 鳗鱼肽对RAW264.7 细胞活力的影响
•     4.3.2 鳗鱼肽对RAW264.7 细胞生成NO的影响
•     4.3.3 鳗鱼肽对RAW264.7 细胞iNOS蛋白表达量的影响
•     4.3.4 鳗鱼肽对RAW264.7 细胞NF-κB信号通路和MAPK信号通路的影响
•     4.3.5 鳗鱼肽对RAW264.7 细胞TNF-α,IL-6 分泌的影响
•     4.3.6 鳗鱼肽阴离子交换层析
•     4.3.7 鳗鱼肽Fr-1 组分聚丙烯酰胺凝胶层析
•   4.4 讨论与结果
• 第5章 总结与展望
•   5.1 总结
•   5.2 展望
• 参考文献
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 罗文奇

导师: 续旭,苑泽堃

关键词: 罗非鱼肽,海参肽,鳗鱼肽,制备分离,免疫激活

来源: 深圳大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 深圳大学

分类号: Q175

DOI: 10.27321/d.cnki.gszdu.2019.000661

总页数: 77

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